傳染性法氏囊�。↖nfectious Bursal Disease,IBD）是由傳染性法氏囊病毒（Infectious Bursal Disease Virus,IBDV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病,主要損傷3⁶周齡雛雞的中樞免疫器官法氏囊。IBD自被發(fā)現(xiàn)報(bào)道以來,已在全世界范圍內(nèi)廣為流行,其作為一種嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的傳染病而備受關(guān)注。目前預(yù)防和控制IBD的主要措施是進(jìn)行疫苗免疫,而研究病毒在雞體內(nèi)的分布情況與增殖規(guī)律是闡明病毒致病機(jī)理和免疫機(jī)理的重要基礎(chǔ),因此需建立一種準(zhǔn)確可靠的方法研究IBDV強(qiáng)毒和弱毒在感染雞體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布情況,以探究IBDV不同毒株的致病情況,同時(shí)為進(jìn)一步合理、有效利用疫苗預(yù)防IBD提供依據(jù)。本研究首先根據(jù)弱毒B87 E6和強(qiáng)毒BC6/85的基因差異區(qū)分別設(shè)計(jì)合成弱毒B87 E6的探針P1、強(qiáng)毒BC6/85的探針P2,參照文獻(xiàn)合成的IBDV的TaqMan-MGB通用探針PN。繼而優(yōu)化熒光定量RT-PCR的反應(yīng)條件,進(jìn)行特異性、靈敏度的檢測(cè)以及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立。結(jié)果顯示,探針P1和P2靈敏度結(jié)果分別為:B87毒的探針P1可檢測(cè)5個(gè)ELD... 

【文章來源】：中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所北京市

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 引言
    1.1 傳染性法氏囊病概述
    1.2 IBDV的基本特征
        1.2.1 IBDV的分類和形態(tài)
        1.2.2 IBDV的基因組結(jié)構(gòu)
        1.2.3 IBDV的蛋白及其功能
        1.2.4 IBDV的血清型
        1.2.5 IBDV的理化特征
    1.3 IBDV的致病機(jī)制及在感染雞體內(nèi)的分布
        1.3.1 IBDV的致病機(jī)制
        1.3.2 IBDV在感染雞體內(nèi)的分布
    1.4 熒光定量PCR技術(shù)的原理與研究應(yīng)用
        1.4.1 熒光定量PCR技術(shù)的原理與優(yōu)點(diǎn)
        1.4.2 熒光定量PCR技術(shù)的研究與應(yīng)用
    1.5 研究的目的與意義
第二章 IBDV熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)種毒
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.3 主要試劑與材料
        2.1.4 所用溶液及配制方法（見附錄 1）
        2.1.5 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2.2 模板制備
        2.2.3 熒光定量RT-PCR引物的鑒定
        2.2.4 探針PN熒光定量RT- PCR反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的制備
        2.2.5 探針靈敏度和特異性的驗(yàn)證
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 熒光定量RT-PCR引物的鑒定結(jié)果
        2.3.2 靈敏度檢測(cè)結(jié)果
        2.3.3 特異性檢測(cè)的結(jié)果
        2.3.4 探針P_N標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
    2.4 小結(jié)與討論
第三章 IBDV強(qiáng)、弱毒株感染SPF雞后其病毒基因拷貝數(shù)在不同組織內(nèi)的動(dòng)態(tài)分析研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)種毒
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.3 主要試劑與儀器
        3.1.4 SPF雞的分組及接種處理
        3.1.5 組織樣品的處理
        3.1.6 核酸的提取
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析方法
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 探針PN檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組 1～3 不同組織間IBDV基因拷貝量的動(dòng)態(tài)分布
        3.3.2 實(shí)驗(yàn)組 1～3 不同時(shí)間同一組織內(nèi)IBDV基因拷貝量的動(dòng)態(tài)分布
    3.4 小結(jié)與討論
第四章 IBDV B87株及BC6/85 株感染SPF雞后病毒在機(jī)體內(nèi)的動(dòng)態(tài)分布研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)種毒
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.3 試劑與儀器
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理
        4.1.5 組織樣品的處理
        4.1.6 IBDV基因組RNA的提取
        4.1.7 合成cDNA
        4.1.8 熒光定量RT- PCR反應(yīng)
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果的數(shù)據(jù)分析方法
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 實(shí)驗(yàn)組 1～6 組織樣品檢測(cè)的Ct值結(jié)果
        4.3.2 各個(gè)組織樣品檢測(cè)的Ct值結(jié)果
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄
    附錄1 所用溶液及其配制
    附錄2 目的基因的測(cè)序結(jié)果
作者簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]家蠶常用內(nèi)參基因的穩(wěn)定性分析及兩種實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法比較[D]. 彭然.蘇州大學(xué) 2012
[3]雞傳染性法氏囊病病毒VP2蛋白在桿狀病毒表面的展示及其免疫原性研究[D]. 黃春旭.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010
[4]雞傳染性法氏囊病病毒快速、實(shí)用檢測(cè)技術(shù)的研究[D]. 汪振興.上海交通大學(xué) 2009



本文編號(hào)：3606473