在長期的進(jìn)化進(jìn)程中,為抵抗病原生物進(jìn)化出免疫系統(tǒng)。脊椎動物的免疫系統(tǒng)分為先天性免疫系統(tǒng)（Innate immunity）和獲得性免疫系統(tǒng)（Acquired immunity）。Toll/IL-1受體超家族（Toll/IL-1 receptor superfamily）是由TLR家族和IL-1R家族組成。這個新受體家族中的成員都含有Toll同源結(jié)構(gòu)域的TH結(jié)構(gòu)域,是由含有128個氨基酸殘基的10段保守序列組成的。這一信號通路成員是重要的模式識別受體,在對抗外來入侵病原體的天然免疫中發(fā)揮著重要的作用。MicroRNA（miRNA）是約含22核苷酸的內(nèi)生非編碼的小分子RNA,作為一類負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,其可以調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄后水平。miRNA可以通過特定的結(jié)合位點與mRNA的3’非翻譯區(qū)（3’UTR）通過不完全的互補配對方式引起該基因翻譯受阻或者直接降解mRNA,在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。在本研究中,通過鮸魚轉(zhuǎn)錄組測序分析獲得病原菌感染后的差異表達(dá)基因,并對差異表達(dá)的Toll/IL-1受體超家族中成員進(jìn)行了miRNA調(diào)控研究,研究結(jié)論如下:1.我們通過對鮸魚感染鰻弧菌前后的脾臟cDNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 魚類免疫學(xué)研究進(jìn)展
        1.1.1 魚類免疫學(xué)發(fā)展概況
        1.1.2 魚類的免疫系統(tǒng)
        1.1.3 魚類的免疫機制
        1.1.4 鮸魚概況
    1.2 Toll/IL-1 受體超家族
        1.2.1 Toll/IL-1R家族來源
        1.2.2 Toll/IL-1R家族成員
        1.2.3 Toll/IL-1R信號通路
    1.3 miRNA的研究進(jìn)展
        1.3.1 miRNA的內(nèi)源合成
        1.3.2 miRNA的作用機制
        1.3.3 miRNA的功能
        1.3.4 miRNA與免疫系統(tǒng)
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 菌種
        2.1.3 細(xì)胞及轉(zhuǎn)染相關(guān)材料
        2.1.4 載體構(gòu)建所需材料及載體
        2.1.5 引物
        2.1.6 miRNA模擬體及抑制體
        2.1.7 實驗儀器
        2.1.8 分子生物學(xué)軟件
    2.2 實驗方法
        2.2.1 鮸魚巨噬細(xì)胞的分離
        2.2.2 病原菌感染實驗
        2.2.3 RNA提取
        2.2.4 cDNA合成
        2.2.5 cDNA文庫構(gòu)建及測序
        2.2.6 Clean read數(shù)據(jù)的獲得與組裝
        2.2.7 Unigene基因注釋及功能分類
        2.2.8 基因差異表達(dá)分析
        2.2.9 miRNA的篩選及靶基因的預(yù)測
        2.2.10 實時熒光定量PCR分析
        2.2.11 質(zhì)粒構(gòu)建
        2.2.12 轉(zhuǎn)染
        2.2.13 雙熒光素酶報告基因分析
        2.2.14 數(shù)據(jù)分析
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 鰻弧菌感染鮸魚脾臟前后轉(zhuǎn)錄組分析
        3.1.1 測序產(chǎn)量的統(tǒng)計
        3.1.2 序列組裝結(jié)果與生物信息學(xué)分析
        3.1.3 基因定量的分析
        3.1.4 差異表達(dá)基因篩選
        3.1.5 差異表達(dá)基因GO富集和基因通路富集分析
        3.1.6 與免疫相關(guān)的差異表達(dá)基因
    3.2 鮸魚IL-1RI的miRNA調(diào)控分析
        3.2.1 預(yù)測和篩選靶向IL-1RI基因的miRNA
        3.2.2 鮸魚miR-192 的特征分析
        3.2.3 鮸魚miR-192 與IL-1RI 3'UTR作用位點的確定
        3.2.4 鮸魚miR-192 與IL-1RI表達(dá)分析
        3.2.5 討論
    3.3 鮸魚TLR1的miRNA調(diào)控分析
        3.3.1 預(yù)測和篩選靶向TLR1基因的miRNA
        3.3.2 鮸魚TLR1的表達(dá)分析
        3.3.3 miR-217 與TLR13'UTR作用位點的確定
        3.3.4 miR-217 前體與TLR13'UTR雙熒光素酶檢測分析
        3.3.5 鮸魚miR-217 的表達(dá)分析
        3.3.6 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鮸魚名稱辨析[J]. 楊秀英.  齊魯師范學(xué)院學(xué)報. 2014(02)
[2]海水養(yǎng)殖魚類細(xì)菌性疾病研究概況[J]. 錢云霞,王國良,邵健忠.  海洋湖沼通報. 2001(02)
[3]鲇魚淋巴樣器官的發(fā)育[J]. 鐘明超,黃浙.  水產(chǎn)學(xué)報. 1995(03)
[4]魚類免疫學(xué)研究進(jìn)展[J]. 李亞南,陳全震,邵健忠,毛樹堅,王冀平.  動物學(xué)研究. 1995(01)
[5]銀鯽白細(xì)胞及鰓顆粒細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)[J]. 周炳升,李連祥.  水生生物學(xué)報. 1992(01)
[6]魚類免疫學(xué)研究的進(jìn)展[J]. 楊先樂.  水產(chǎn)學(xué)報. 1989(03)

博士論文
[1]牙鲆免疫系統(tǒng)形態(tài)結(jié)構(gòu)、發(fā)育和感染病理反應(yīng)的研究[D]. 劉云.中國海洋大學(xué) 2003

碩士論文
[1]基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的鮸魚分子標(biāo)記篩選及基因差異表達(dá)分析[D]. 車榮波.浙江海洋學(xué)院 2015



本文編號：3598921