本文關(guān)鍵詞：龍眼SVP基因的克隆及功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本試驗以‘四季蜜’、‘立冬本’龍眼嫁接新梢及‘紅核子’龍眼葉芽為材料,研究不同龍眼品種中SVP同源基因序列的差異(包括基因序列的可變剪切)及表達差異,探究龍眼SVP同源基因在龍眼的成花調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中(包括花芽分化和幼年期調(diào)控)的作用。本試驗主要獲得了以下研究結(jié)果：1.熒光定量PCR驗證龍眼13個成花調(diào)控基因在‘四季蜜’和‘立冬本’嫁接新梢中表達的差異。結(jié)果表明,GI與FKF1基因在‘四季蜜’中均表達升高,SVP、 FLC、 EMF2的同源基因在‘四季蜜’中表達降低。龍眼中的TFL1同源基因TFL1(6O27)與TFL1(6475)變化趨勢不同,TFL1(6027)在‘四季蜜’中的表達稍高于‘立冬本’,而TFL1(6475)在‘四季蜜’中表達降低。LFY、AP1與SOC1基因在兩個品種中的表達差異不明顯。2.以‘四季蜜’龍眼嫁接新梢及‘紅核子’龍眼葉芽為試驗材料,克隆龍眼中的SVP同源基因,得到‘四季蜜’龍眼中SVP645基因的7個不同拷貝序列、SVP2719的7個可變剪切序列,‘紅核子’龍眼中SVP645基因的7個不同拷貝序列、SVP2719的4個可變剪切序列。分析各序列,發(fā)現(xiàn)龍眼SVP645基因的大多數(shù)拷貝在‘紅核子’和‘四季蜜’中序列存在差異；SVP2719基因在‘四季蜜’和‘紅核子’中的堿基序列基本無差異,編碼區(qū)氨基酸序列完全一致。3.熒光定量PCR分析兩個龍眼SVP同源基因在‘紅核子’品種中花芽分化過程的表達。結(jié)果顯示,在1月份龍眼花芽開始形態(tài)分化的時候,SVP645基因的表達達到頂峰,而SVP2719基因表達卻開始下降,表明SVP645與SVP2719基因可能具有不同的功能,SVP2719功能可能與抑制花芽分化有關(guān)。4.選擇‘四季蜜’中SVP2719的S-1和S-6號基因序列構(gòu)建重組表達載體,根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化本氏煙草。結(jié)果發(fā)現(xiàn)龍眼SVP2719-S1基因使煙草的花蕾形狀發(fā)生了變化,花蕾畸形,不能正常成花；SVP2719-S6基因使煙草的花朵形狀發(fā)生了變化,花瓣畸形,但花瓣數(shù)、萼片、雌蕊、雄蕊無變化。
【關(guān)鍵詞】：龍眼 SVP基因 可變剪切 多拷貝 基因表達
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：S667.2
【目錄】：

• 摘要9-10
• Abstract10-12
• 縮寫詞12-13
• 第一章 前言13-23
• 1. 木本植物成花的影響因素14-17
• 1.1 木本植物成花的環(huán)境調(diào)控14-16
• 1.1.1 低溫15
• 1.1.2 水分15
• 1.1.3 光照15
• 1.1.4 生產(chǎn)措施15-16
• 1.2 營養(yǎng)生長與生殖生長16
• 1.3 木本植物成花的分子調(diào)控16-17
• 2. 木本植物成花基因研究進展17-21
• 2.1 CO基因17-18
• 2.2 FLC基因18-19
• 2.3 FT與TFL1基因19-20
• 2.4 花分生組織特性基因LFY、AP1和SOC120-21
• 3. 植物SVP基因研究進展21-22
• 4. 本研究的目的和意義22-23
• 第二章 龍眼成花調(diào)控基因的表達23-35
• 1. 試驗材料23
• 1.1 植物材料23
• 1.2 主要試劑23
• 1.3 主要儀器23
• 2. 試驗方法23-28
• 2.1 總RNA的提取及純化23-25
• 2.1.1 總RNA的提取23-24
• 2.1.2 RNA的檢測24
• 2.1.3 RNA的純化24-25
• 2.2 cDNA合成25
• 2.3 龍眼開花途徑相關(guān)基因的引物設(shè)計25-27
• 2.4 熒光定量PCR反應(yīng)27-28
• 3. 結(jié)果與分析28-33
• 3.1 RNA質(zhì)量檢測28
• 3.2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線28-30
• 3.3 13個成花調(diào)控基因在‘立冬本’和‘四季蜜’嫁接新梢中的表達30-33
• 4. 討論33-35
• 第三章 龍眼SVP基因的克隆與表達分析35-55
• 1. 試驗材料35-36
• 1.1 植物材料35
• 1.2 主要試劑35
• 1.3 感受態(tài)和克隆載體35-36
• 1.4 引物合成及測序36
• 1.5 試驗儀器36
• 2. 試驗方法36-39
• 2.1 ‘紅核子’和‘四季蜜’龍眼的RNA提取與純化36
• 2.1.1 總RNA的提取與純化36
• 2.1.2 RNA的檢測36
• 2.2 cDNA的合成36-37
• 2.3 引物設(shè)計與合成37
• 2.4 SVP基因片段的PCR擴增37
• 2.5 目的片段的回收37-38
• 2.6 載體與目的片段的連接38
• 2.7 產(chǎn)物的連接及轉(zhuǎn)化38
• 2.8 測序及結(jié)果分析38-39
• 2.9 ‘紅核子’龍眼SVP基因的表達分析39
• 2.9.1 ‘紅核子’龍眼RNA的提取及純化39
• 2.9.2 RNA的檢測39
• 2.9.3 ‘紅核子’龍眼SVP基因的表達分析39
• 3. 結(jié)果與分析39-52
• 3.1 ‘四季蜜’與‘紅核子’龍眼RNA的提取39
• 3.2 SVP基因的克隆39-50
• 3.2.1 SVP645基因的cDNA克隆39-47
• 3.2.2 SVP2719 基因 cDNA 的克隆47-50
• 3.3 龍眼SVP基因在花芽分化過程的表述50-52
• 3.3.1 ‘紅核子’龍眼RNA的提取及純化50-51
• 3.3.2 龍眼SVP645基因的表達51-52
• 3.3.3 龍眼SVP2719基因的表達52
• 4. 討論52-55
• 第四章 龍眼SVP2719基因植物表達載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化煙草55-73
• 1. 材料和儀器55-56
• 1.1 材料55
• 1.2 根癌農(nóng)桿菌及載體55
• 1.3 試驗儀器與試劑55
• 1.4 培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件55-56
• 2. 試驗方法56-59
• 2.1 龍眼SVP2719基因(帶有5’端UTR序列)的克隆56
• 2.2 龍眼SVP2719基因表達載體的構(gòu)建56-58
• 2.2.1 龍眼SVP2719基因與表達載體質(zhì)粒提取56-57
• 2.2.2 龍眼SVP2719基因與表達載體質(zhì)粒酶切57-58
• 2.3 龍眼SVP2719基因與表達載體的連接58
• 2.4 龍眼SVP2719基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌58-59
• 2.5 龍眼SVP2719基因重組質(zhì)粒的驗證59
• 2.5.1 PCR鑒定59
• 2.5.2 雙酶切鑒定59
• 3. 龍眼SVP2719基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌59-60
• 3.1 龍眼SVP2719基因重組質(zhì)粒的提取59
• 3.2 根癌農(nóng)桿菌EHA105的活化及感受態(tài)細(xì)胞制備59-60
• 3.2.1 根癌農(nóng)桿菌的活化59
• 3.2.2 根癌農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備59-60
• 3.3 龍眼SVP2719基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化EHA10560
• 3.4 龍眼SVP2719基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化EHA105驗證60
• 3.4.1 PCR鑒定60
• 3.4.2 雙酶切鑒定60
• 4. 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的SVP2719基因轉(zhuǎn)化本氏煙草60-61
• 4.1 煙草的播種及外植體預(yù)培養(yǎng)60-61
• 4.2 煙草外植體的轉(zhuǎn)化61
• 4.3 煙草抗性芽的篩選61
• 4.4 抗性芽的生根培養(yǎng)61
• 4.5 抗性植株煉苗及移栽61
• 5. 煙草抗性植株的分子鑒定61-63
• 5.1 煙草抗性植株DNA及RNA的提取61-63
• 5.1.1 DNA的提取61-62
• 5.1.2 RNA的提取62-63
• 5.2 DNA鑒定63
• 5.3 半定量檢測63
• 5.4 熒光定量PCR檢測63
• 6. 結(jié)果與分析63-70
• 6.1 龍眼SVP2719基因植物表達載體的構(gòu)建63-64
• 6.2 龍眼SVP2719基因重組載體轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌64-65
• 6.3 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的SVP2719基因轉(zhuǎn)化本氏煙草65-66
• 6.4 煙草抗性植株的分子鑒定66-68
• 6.4.1 DNA鑒定66-67
• 6.4.2 半定量PCR檢測67-68
• 6.4.3 熒光定量PCR檢測68
• 6.5 轉(zhuǎn)基因煙草性狀觀察68-70
• 7. 討論70-73
• 第五章 總結(jié)與展望73-75
• 參考文獻75-81
• 致謝81

【相似文獻】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 魏丹鳳;龍眼SVP基因的克隆及功能研究[D];福建農(nóng)林大學(xué);2015年

  本文關(guān)鍵詞：龍眼SVP基因的克隆及功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：355463