家禽的生長(zhǎng)速率一直是科學(xué)工作者研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究固始雞和安卡雞生長(zhǎng)速度的過程中,發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新基因。為了進(jìn)一步研究該基因的生物學(xué)特性及功能,本研究首先通過連接T載體對(duì)該基因進(jìn)行了分子克隆,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Quantitative real-time Polymerase Chain Reaction,qPCR）研究了其在雞體內(nèi)的組織表達(dá)情況,并在固始雞-安卡雞F2代資源群對(duì)該基因進(jìn)行了SNP多態(tài)性與經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)聯(lián)分析。得到了如下試驗(yàn)結(jié)果:①克隆得到了該lncRNA基因的長(zhǎng)918bp的完全開放閱讀框(（open reading frame,ORF）,并將克隆得到的序列提交至GenBank（accession no.KP147948）,命名為pouBW1基因。通過生物信息學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)該基因不含內(nèi)含子結(jié)構(gòu),屬于lncRNA家族,且位于雞的2號(hào)染色體上;然后在NCBI中進(jìn)行該基因的同源性比對(duì),僅僅在雞體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了該基因的存在。②對(duì)雞的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、胸肌和腿肌等十四種組織進(jìn)行了定量分析,結(jié)果顯示該基因在雞體內(nèi)呈廣泛性表達(dá),在脾臟和肺臟中的相對(duì)表達(dá)量最高,在胸肌和腿肌中的... 

【文章來源】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
1.文獻(xiàn)綜述
    1.1 lncRNA簡(jiǎn)介
        1.1.1 lncRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 lncRNA的結(jié)構(gòu)與分類
        1.1.3 lncRNA的作用機(jī)制
        1.1.4 lncRNA的研究方法
        1.1.5 lncRNA的功能
        1.1.6 lncRNA研究問題與展望
    1.2 新基因研究策略
        1.2.1 基因克隆
            1.2.1.1 生物學(xué)克隆
            1.2.1.2 電子克隆
        1.2.2 生物信息學(xué)分析
            1.2.2.1 編碼產(chǎn)物預(yù)測(cè)分析
            1.2.2.2 序列同源性分析
            1.2.2.3 染色體定位
            1.2.2.4 基因結(jié)構(gòu)分析
        1.2.3 新基因的體內(nèi)表達(dá)規(guī)律研究
        1.2.4 蛋白質(zhì)水平的表達(dá)分析
        1.2.5 轉(zhuǎn)基因技術(shù)
        1.2.6 基因敲除和基因敲減
2.前言
3.雞pouBW1基因完全開放閱讀框（Open reading frame,ORF）的克隆
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 樣品采集
        3.1.2 主要試劑及溶液配置
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 引物的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.2 總RNA的提取
        3.2.3 普通PCR反應(yīng) 和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)
        3.2.4 PCR產(chǎn)物的回收
        3.2.5 基因的克隆與測(cè)序
            3.2.5.1 連接轉(zhuǎn)化
            3.2.5.2 菌液PCR鑒定
            3.2.5.3 菌液測(cè)序
        3.2.6 長(zhǎng)鏈非編碼RNA鑒定
    3.3 主要儀器設(shè)備
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.4.1 總RNA提取
        3.4.2 菌液PCR檢測(cè)
        3.4.3 完全開放閱讀框（ORF）克隆
        3.4.4 生物信息學(xué)分析
    3.5 討論與小結(jié)
4.雞pouBW1基因的表達(dá)分析
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 樣品的采集
        4.1.3 試劑及溶液配制
        4.1.4 熒光定量試驗(yàn)儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 總RNA提取和反轉(zhuǎn)錄
        4.2.2 熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)
        4.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)
        4.2.4 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 cDNA質(zhì)量及引物特異性檢測(cè)
        4.3.2 1日齡表達(dá)譜分析
        4.3.3 6周齡表達(dá)譜分析
        4.3.4 16周齡表達(dá)譜分析
        4.3.5 不同發(fā)育階段的表達(dá)譜分析
    4.4 討論與小結(jié)
5.固始雞-安卡雞F2代資源群pouBW1基因多態(tài)性分析
    5.1 試驗(yàn)材料
        5.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            5.1.1.1 資源群體
            5.1.1.2 飼養(yǎng)管理及測(cè)量指標(biāo)
        5.1.2 試驗(yàn)主要試劑及配制
        5.1.3 主要儀器設(shè)備
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 基因組DNA的提取方法
        5.2.2 SNP篩選
            5.2.2.1 混池構(gòu)建
            5.2.2.2 引物設(shè)計(jì)、PCR擴(kuò)增和SNP掃描
        5.2.3 最適PCR反應(yīng)體系的確立
        5.2.4 酶切分型
        5.2.5 基因型統(tǒng)計(jì)與分析
            5.2.5.1 基因型頻率與基因頻率的統(tǒng)計(jì)
            5.2.5.2 群體遺傳多態(tài)性的分析
            5.2.5.3 突變位點(diǎn)基因型與經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)聯(lián)分析模型
        5.2.6 連鎖不平衡分析
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 SNP突變位點(diǎn)掃描
        5.3.2 pouBW1基因SNP位點(diǎn)基因型頻率及基因頻率統(tǒng)計(jì)
A位點(diǎn)不同基因型與不同性狀的關(guān)聯(lián)分析">        5.3.3 pouBW1基因n.830G>A位點(diǎn)不同基因型與不同性狀的關(guān)聯(lián)分析
A位點(diǎn)不同基因型與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.3.1 pouBW1基因n.830G>A位點(diǎn)不同基因型與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析
A位點(diǎn)不同基因型與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.3.2 pouBW1基因n.830G>A位點(diǎn)不同基因型與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析
A位點(diǎn)不同基因型與屠體性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.3.3 pouBW1基因n.830G>A位點(diǎn)不同基因型與屠體性狀的關(guān)聯(lián)分析
A位點(diǎn)不同基因型與肌纖維性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.3.4 pouBW1基因n.830G>A位點(diǎn)不同基因型與肌纖維性狀的關(guān)聯(lián)分析
A位點(diǎn)不同基因型與血液參數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.3.5 pouBW1基因n.830G>A位點(diǎn)不同基因型與血液參數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析
A位點(diǎn)加性顯性效應(yīng)分析">        5.3.4 pou BW1基因n.830G>A位點(diǎn)加性顯性效應(yīng)分析
T位點(diǎn)不同基因型與不同性狀的關(guān)聯(lián)分析">        5.3.5 pou BW1基因n.594 C>T位點(diǎn)不同基因型與不同性狀的關(guān)聯(lián)分析
T位點(diǎn)不同基因型與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.5.1 pouBW1基因n.594C>T位點(diǎn)不同基因型與肉質(zhì)性狀的關(guān)聯(lián)分析
T位點(diǎn)不同基因型與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.5.2 pouBW1基因n.594C>T位點(diǎn)不同基因型與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)分析
T位點(diǎn)不同基因型與屠體性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.5.3 pouBW1基因n.594C>T位點(diǎn)不同基因型與屠體性狀的關(guān)聯(lián)分析
T位點(diǎn)不同基因型與肌纖維性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.5.4 pouBW1基因n.594C>T位點(diǎn)不同基因型與肌纖維性狀的關(guān)聯(lián)分析
T位點(diǎn)不同基因型與血液參數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析">            5.3.5.5 pouBW1基因n.594C>T位點(diǎn)不同基因型與血液參數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析
T位點(diǎn)加性顯性效應(yīng)分析">        5.3.6 pou BW1基因n.594C>T位點(diǎn)加性顯性效應(yīng)分析
        5.3.7 單倍型構(gòu)建
        5.3.8 兩個(gè)SNP位點(diǎn)的單倍型組合與F2代資源群經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)聯(lián)分析
    5.4 小結(jié)與討論
6. 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
ABSTRACT


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]長(zhǎng)非編碼RNA以及與疾病發(fā)生的研究進(jìn)展[J]. 唐珍,王含彥,易芳,郭冬梅,羅蓉.  西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2015(01)
[2]長(zhǎng)鏈非編碼RNA研究進(jìn)展[J]. 宿婭,張晨芳,魏強(qiáng),李廣林.  西北植物學(xué)報(bào). 2014(11)
[3]肌肉發(fā)育相關(guān)LncRNA的研究進(jìn)展[J]. 魏彩虹,吳明明,劉瑞鑿,趙福平,張莉,杜立新.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(20)
[4]小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA表達(dá)譜的差異[J]. 王亞芳,盧強(qiáng),趙晉波,鐘代星,馮征,程少毅,贠宇輝,蔣夢(mèng)龍,王艷,周勇安.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2014(06)
[5]小豆遺傳差異、群體結(jié)構(gòu)和連鎖不平衡水平的SSR分析[J]. 白鵬,程須珍,王麗俠,王素華,陳紅霖.  作物學(xué)報(bào). 2014(05)
[6]長(zhǎng)鏈非編碼RNA的生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J]. 王國(guó)強(qiáng),衛(wèi)寧,王禹,龐衛(wèi)軍.  家畜生態(tài)學(xué)報(bào). 2014(03)
[7]非編碼RNA與基因表達(dá)調(diào)控[J]. 楊福蘭,饒周舟,陳漢春.  生命的化學(xué). 2014(01)
[8]長(zhǎng)鏈非編碼RNA在生物體中的調(diào)控作用[J]. 李靈,宋旭.  遺傳. 2014(03)
[9]水稻產(chǎn)量分子設(shè)計(jì)育種研究進(jìn)展[J]. 張分云,李宏,周向陽,王重榮,周德貴,賴穗春,陳立云,周少川.  分子植物育種. 2013(06)
[10]長(zhǎng)鏈非編碼RNA研究進(jìn)展[J]. 楊峰,易凡,曹慧青,梁子才,杜權(quán).  遺傳. 2014(05)

博士論文
[1]中國(guó)對(duì)蝦（Fenneropenaeus chinensis）基因組SNP標(biāo)記的開發(fā)與應(yīng)用[D]. 張建勇.中國(guó)海洋大學(xué) 2011

碩士論文
[1]藍(lán)白斑篩選技術(shù)的改進(jìn)及其生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用[D]. 潘韻芝.蘇州大學(xué) 2014
[2]雞PNPLA3基因多態(tài)性及組織表達(dá)規(guī)律的研究[D]. 蘇玲.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]應(yīng)用SNP標(biāo)記區(qū)分云南瑞麗野生枸櫞個(gè)體和柚SNP標(biāo)記開發(fā)初探[D]. 李翀.西南大學(xué) 2011
[4]Fank1基因敲減小鼠模型的建立及其在雄性小鼠生殖功能中的研究[D]. 董婉維.中國(guó)醫(yī)科大學(xué) 2010
[5]基因組掃描定位雞的2、5、7染色體上有關(guān)屠體性狀QTLs[D]. 趙云航.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[6]基因組掃描定位雞2、5和7號(hào)染色體上肉質(zhì)性狀的QTLs[D]. 梁敏.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3534406