棉花是我國重要的經(jīng)濟作物,種子萌發(fā)是其生長過程中的重要階段,極易受到生物和非生物脅迫的傷害,鹽害是影響棉花產(chǎn)量與品質(zhì)的重要因素之一。褪黑素（Melatonin,MT）是廣泛存在于動植物體中的一類小分子吲哚胺類物質(zhì),具有親水和親脂兩種特性,極易進入種子內(nèi)部,具有顯著的抗氧化功能,能夠提高逆境下種子的活力和萌發(fā)率。目前有關(guān)褪黑素對逆境下蔬菜和果樹種子萌發(fā)調(diào)控效應(yīng)研究較多,但對棉花種子萌發(fā)的調(diào)控效應(yīng)研究較少。因此,本文以國欣棉9號為材料,以篩選出的150 mM NaCl作為脅迫濃度,通過測定種子萌發(fā)指標(biāo)、抗氧化酶系、滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)、細胞膜透性物質(zhì)、褪黑素與激素含量以及代謝酶活性,研究褪黑素對鹽脅迫下棉花種子萌發(fā)的生理調(diào)控機制;并結(jié)合代謝組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析,探討褪黑素對鹽脅迫下棉花種子萌發(fā)的分子調(diào)控機制,為褪黑素的開發(fā)利用和棉花栽培調(diào)控提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.外源褪黑素有效緩解了鹽脅迫對棉花種子萌發(fā)的抑制作用。鹽脅迫顯著降低了棉花種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢及胚根長度,種子萌發(fā)后的鮮物質(zhì)質(zhì)量、干物質(zhì)質(zhì)量也明顯降低。不同褪黑素濃度浸種24 h后,種子發(fā)芽率、胚根長及生.物量變化趨勢不一。低濃度褪黑素... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２褪黑素在植物中的合成＾??Ｆｉｇ．２?Ｔｈｅ?ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｍｅｌａｔｏｎｉｎ?ｉｎ?ｐｌａｎｔ［１７】??１．３褪黑素與植物的抗逆性??］．３．１褪黑素與干旱脅迫調(diào)控??

Ｐ管中，加入５００?ｐＬ含０．１％甲酸的８０％??甲醇水溶液，渦旋振蕩，冰浴靜置５?ｍｉｎ，?１５０００?ｒ／ｍｉｎ、４°Ｃ離心１０?ｍｉｎ，取一定量上清加質(zhì)??譜級水稀釋至甲醇含量為６０％，并置于帶有０．２２?ｐｍ濾膜的離心管中，１５０００?ｒ／ｍｉｎ、４Ｔ：離??心ｌＯｍｉｎ，收集濾液，ＬＣ－ＭＳ進行分析。代謝產(chǎn)物的提取及鑒定由北京諾禾致源生物信息??科技有限公司進行。??２．２．１０．２試驗流程及ＱＣ獲取??本項目基于液質(zhì)聯(lián)用（ＬＣ－ＭＳ）技術(shù)進行非靶向代謝組學(xué)研宂，試驗過程如圖３。ＱＣ??樣本是由待測樣本等量混合制成，對待測樣本進行檢測。??＼?／代謝物定性＼??樣本收柒）?＾定坫分析）??〈代謝ｉ提鵲?（ＬＣ?＜信＾＞析＞??圖３代謝組實驗流程??Ｆｉｇ．３?Ｍｅｔａｂｏｌｏｎｉｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ??２．２．１０．３生物信息分析??將質(zhì)譜檢測到的原始文件導(dǎo)入Ｃｏｍｐｏｕｎｄ?Ｄｉｓｃｏｖｅｒｅｒ?３．０?（ＣＤ）軟件中，進行圖像處理??及比對數(shù)據(jù)庫，并對得到的數(shù)據(jù)進行質(zhì)控，最后通過代謝通路等功能分析解釋代謝物相關(guān)的??生物學(xué)意義。??９??

?ｍｉｎ，于蒸餾水中反復(fù)沖洗５次，最后置于超凈工作臺晾干。試驗分為４個處??理：Ｚｅｒｏ?（Ｚ，?Ｏｈ，種子消毒晾干后取樣）、ＣＫ?（蒸餾水處理）、Ｓ?（１５０ｍＭＮａＣｌ）、ＳＭ?（２０??ＨＭＭＴ＋１５０ｍＭＮａＣｌ）。種子在各濃度溶液中浸種２４ｈ后，于６ｈ、１２ｈ、２４ｈ取樣，棄去??種皮，液氮凍存。每２０粒種子為１組，液氮研磨成粉末，２００?ｍｇ為一個重復(fù)，共設(shè)３個生??物學(xué)重復(fù)。??２．２．１１．２轉(zhuǎn)錄組分析??轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)委托北京諾禾致源生物信息科技有限公司完成，試驗流程如圖４所示。??娜鍵取丨ｆ檢測．．．??ｍＲＮＡ富集??—＿：?）??雙鏈ｃＤＮＡ合成??二二?…二??末端修鉍加Ａ和接頭??片段選擇和ＰＣＲＴｉｔｔ??Ｉ———ＩＴ—??文庫檢測??ｌｌｌｕｍｉｎａ?測序??圖４轉(zhuǎn)錄組實驗流程??Ｆｉｇ．４?Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ?ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ?ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ??２．２．１１．３?ｑＲＴ－ＰＣＲ?驗證??根據(jù)ｃｏｔｔｏｎ數(shù)據(jù)庫（ｈｔｔｐ：／／ｃｏｔｔｏｎｆｇｄ．ｏｒｇ）分析獲得棉花ＣＤＳ序列，通過Ｐｒｉｍｅｒ５軟件設(shè)??計引物，由上海生工生物工程有限公司合成，各引物序列見附錄。??２．３數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計方法??采用ＳＰＳＳ２２．０軟件（ＩＢＭ?Ｃｏｒｐ，?Ａｒｍｏｎｋ，?ＮＹ，?ＵＳＡ）進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，利用ＧｒａｐｈＰａｄ??Ｐｒｉｓｍ５．０?（ＧｒａｐｈＰａｄ?Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｉｎｃ．?ＵＳＡ）進行圖表繪制。??１０??

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]褪黑素對溫度脅迫下茶樹生理代謝的影響[D]. 魏吉鵬.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2019
[2]外源褪黑素促進鹽脅迫下玉米種子萌發(fā)的分子機理[D]. 徐暑暉.揚州大學(xué) 2018
[3]鹽脅迫下野大豆（Glycine soja）和栽培大豆（Glycine max）幼苗葉片代謝組學(xué)比較研究[D]. 張婧.東北師范大學(xué) 2017
[4]外源褪黑素對硝酸鹽脅迫條件下黃瓜幼苗抗氧化系統(tǒng)及氮代謝的影響[D]. 王偉香.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2015
[5]棉花幼苗根系對鹽脅迫的響應(yīng)及機制[D]. 趙遠偉.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014



本文編號：3533687