無血清規(guī)模化培養(yǎng)MDCK細(xì)胞的關(guān)鍵控制點(diǎn)研究
發(fā)布時(shí)間:2021-11-24 08:35
我國目前流感病毒疫苗都是利用雞胚基質(zhì)生產(chǎn)的。然而,由于雞胚數(shù)量的限制和雞胚工藝擴(kuò)大生產(chǎn)的可及性差,一旦大流感來臨時(shí),用雞胚基質(zhì)生產(chǎn)的流感疫苗將遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能夠滿足人們需求。而以細(xì)胞基質(zhì)生產(chǎn)流感疫苗則不受雞胚數(shù)量的限制、質(zhì)量可控、易于擴(kuò)大規(guī)模,且能適用于對雞蛋蛋白過敏的人群。MDCK細(xì)胞是當(dāng)前最受關(guān)注的流感疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)之一。細(xì)胞基質(zhì)病毒性疫苗的培養(yǎng)常常可分為兩個階段,即細(xì)胞生長期和產(chǎn)毒期。為了更加高效和經(jīng)濟(jì)的研發(fā)可靠的疫苗生產(chǎn)工藝,首先設(shè)計(jì)在實(shí)驗(yàn)室規(guī)模利用搖床和搖瓶摸索了基本工藝并優(yōu)化工藝參數(shù)。確定細(xì)胞傳代的參數(shù),按梯度密度(2×106、1.5×106、1×106、7×105和5×105cells/mL)接種細(xì)胞于細(xì)胞搖瓶,然后對比不同細(xì)胞接種密度的細(xì)胞生長曲線,同時(shí),監(jiān)測各實(shí)驗(yàn)組間的細(xì)胞活率、細(xì)胞代謝和細(xì)胞周期情況,結(jié)果表明在48h時(shí),各梯度密度接種都處于細(xì)胞生長分裂的對數(shù)生長期,細(xì)胞增長最高達(dá)到了8.3×106 cells/mL;各梯度密度的細(xì)胞接種幾乎...
【文章來源】:武漢生物制品研究所湖北省
【文章頁數(shù)】:79 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
縮略詞表
摘要
Abstract
前言
技術(shù)路線
第一章 基于MDCK細(xì)胞培養(yǎng)的基本工藝參數(shù)摸索
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.4 小結(jié)與討論
第二章 懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)工藝的優(yōu)化研究
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.4 小結(jié)與討論
第三章 懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)的規(guī);糯笱芯
3.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.4 小結(jié)與討論
第四章 總結(jié)和展望
4.1 總結(jié)
4.2 創(chuàng)新點(diǎn)
4.3 展望
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
在讀期間論文發(fā)表情況
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)H7N9流感病毒時(shí)TPCK胰酶添加量的優(yōu)化研究[J]. 孟子延,張家友,劉琛,張哲罡,邱冉,羅丹,施金榮,趙巍,夏志武,楊曉明. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2019 (11)
[2]TPCK胰酶和普通胰酶對各亞型流感病毒在MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)中的影響[J]. 馬萍,李欣玥. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2017(18)
[3]犬腎細(xì)胞MDCK研究進(jìn)展[J]. 萬玉林,陶世宇,武發(fā)菊,柴立麗,安芳蘭,楊進(jìn)才,劉學(xué)榮. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(23)
[4]A549細(xì)胞凍存與復(fù)蘇方法的改進(jìn)[J]. 季曉宇,鞠曉梅,湯賀,姜萌,羅來鵬,劉宇軒,侯毅鞠. 中國科技信息. 2016(13)
[5]規(guī);溉榧(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)病毒疫苗——過程工程和生物反應(yīng)器[J]. 楊艷坤,郭雯雯,隋涌,白仲虎. 生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2015(01)
[6]反應(yīng)器細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和微載體培養(yǎng)技術(shù)在動物疫苗生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 張韌,王建超,陳文慶,劉華杰,高飛,徐舸辰,林龍飛. 中國獸藥雜志. 2012(11)
[7]BHK21細(xì)胞凍存密度與復(fù)蘇后活力的關(guān)系分析[J]. 郭海平,郭冠萍,郝鵬. 畜牧與飼料科學(xué). 2010(03)
[8]微載體規(guī);囵B(yǎng)MDCK細(xì)胞增殖H9N2亞型禽流感病毒的研究[J]. 李春艷,肖晶,李曦,劉娣. 中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2009(12)
[9]Apoptosis and Proinflammatory Cytokine Responses of Primary Mouse Microglia and Astrocytes Induced by Human H1N1 and Avian H5N1 Influenza Viruses[J]. Gefei Wang1,2,Juan Zhang1,2,Weizhong Li1,2,Gang Xin1,2,Yun Su1,2,Yuanli Gao1,2,Heng Zhang1,2,Guimei Lin1,2,Xiaoyang Jiao1,2 and Kangsheng Li1,2,3 1Department of Microbiology and Immunology,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China; 2The Key Immunopathology Laboratory of Guangdong Province,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China. Cellular & Molecular Immunology. 2008(02)
[10]動物細(xì)胞培養(yǎng)用生物反應(yīng)器及其力學(xué)環(huán)境[J]. 何輝,樊瑜波. 生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2004(03)
博士論文
[1]基于MDCK細(xì)胞高密度培養(yǎng)的甲型流感病毒疫苗生產(chǎn)工藝開發(fā)與優(yōu)化[D]. 黃錠.華東理工大學(xué) 2016
碩士論文
[1]動物細(xì)胞培養(yǎng)用生物反應(yīng)器內(nèi)流體混合及氣液傳質(zhì)特性研究[D]. 鄭兵兵.華東理工大學(xué) 2013
本文編號:3515611
【文章來源】:武漢生物制品研究所湖北省
【文章頁數(shù)】:79 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
縮略詞表
摘要
Abstract
前言
技術(shù)路線
第一章 基于MDCK細(xì)胞培養(yǎng)的基本工藝參數(shù)摸索
1.1 實(shí)驗(yàn)材料
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1.4 小結(jié)與討論
第二章 懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)工藝的優(yōu)化研究
2.1 實(shí)驗(yàn)材料
2.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.4 小結(jié)與討論
第三章 懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)的規(guī);糯笱芯
3.1 實(shí)驗(yàn)材料
3.2 實(shí)驗(yàn)方法
3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.4 小結(jié)與討論
第四章 總結(jié)和展望
4.1 總結(jié)
4.2 創(chuàng)新點(diǎn)
4.3 展望
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
在讀期間論文發(fā)表情況
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]懸浮MDCK細(xì)胞培養(yǎng)H7N9流感病毒時(shí)TPCK胰酶添加量的優(yōu)化研究[J]. 孟子延,張家友,劉琛,張哲罡,邱冉,羅丹,施金榮,趙巍,夏志武,楊曉明. 中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2019 (11)
[2]TPCK胰酶和普通胰酶對各亞型流感病毒在MDCK細(xì)胞分離培養(yǎng)中的影響[J]. 馬萍,李欣玥. 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2017(18)
[3]犬腎細(xì)胞MDCK研究進(jìn)展[J]. 萬玉林,陶世宇,武發(fā)菊,柴立麗,安芳蘭,楊進(jìn)才,劉學(xué)榮. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(23)
[4]A549細(xì)胞凍存與復(fù)蘇方法的改進(jìn)[J]. 季曉宇,鞠曉梅,湯賀,姜萌,羅來鵬,劉宇軒,侯毅鞠. 中國科技信息. 2016(13)
[5]規(guī);溉榧(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)病毒疫苗——過程工程和生物反應(yīng)器[J]. 楊艷坤,郭雯雯,隋涌,白仲虎. 生物產(chǎn)業(yè)技術(shù). 2015(01)
[6]反應(yīng)器細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和微載體培養(yǎng)技術(shù)在動物疫苗生產(chǎn)中的應(yīng)用[J]. 張韌,王建超,陳文慶,劉華杰,高飛,徐舸辰,林龍飛. 中國獸藥雜志. 2012(11)
[7]BHK21細(xì)胞凍存密度與復(fù)蘇后活力的關(guān)系分析[J]. 郭海平,郭冠萍,郝鵬. 畜牧與飼料科學(xué). 2010(03)
[8]微載體規(guī);囵B(yǎng)MDCK細(xì)胞增殖H9N2亞型禽流感病毒的研究[J]. 李春艷,肖晶,李曦,劉娣. 中國人獸共患病學(xué)報(bào). 2009(12)
[9]Apoptosis and Proinflammatory Cytokine Responses of Primary Mouse Microglia and Astrocytes Induced by Human H1N1 and Avian H5N1 Influenza Viruses[J]. Gefei Wang1,2,Juan Zhang1,2,Weizhong Li1,2,Gang Xin1,2,Yun Su1,2,Yuanli Gao1,2,Heng Zhang1,2,Guimei Lin1,2,Xiaoyang Jiao1,2 and Kangsheng Li1,2,3 1Department of Microbiology and Immunology,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China; 2The Key Immunopathology Laboratory of Guangdong Province,Shantou University Medical College,Shantou 515041,China. Cellular & Molecular Immunology. 2008(02)
[10]動物細(xì)胞培養(yǎng)用生物反應(yīng)器及其力學(xué)環(huán)境[J]. 何輝,樊瑜波. 生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2004(03)
博士論文
[1]基于MDCK細(xì)胞高密度培養(yǎng)的甲型流感病毒疫苗生產(chǎn)工藝開發(fā)與優(yōu)化[D]. 黃錠.華東理工大學(xué) 2016
碩士論文
[1]動物細(xì)胞培養(yǎng)用生物反應(yīng)器內(nèi)流體混合及氣液傳質(zhì)特性研究[D]. 鄭兵兵.華東理工大學(xué) 2013
本文編號:3515611
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