小菜蛾（Plutella xylostella L.）為重要的十字花科蔬菜害蟲(chóng),因其生命周期短、世代重疊嚴(yán)重、繁殖能力強(qiáng)以及生產(chǎn)中不合理用藥,使得其對(duì)絕大多數(shù)殺蟲(chóng)劑產(chǎn)生了抗藥性。氟苯蟲(chóng)酰胺因其新穎的作用靶標(biāo),良好的速效、持效性以及對(duì)哺乳動(dòng)物的低毒性等優(yōu)勢(shì)而得到廣泛應(yīng)用,但小菜蛾對(duì)氟苯蟲(chóng)酰胺的抗性問(wèn)題也越來(lái)越突出。為探討小菜蛾對(duì)氟苯蟲(chóng)酰胺的抗性與生殖發(fā)育之間的關(guān)系,本項(xiàng)目以敏感品系（S）、室內(nèi)篩選的氟苯蟲(chóng)酰胺抗性品系（R_f）、田間抗性種群（R_b）三個(gè)品系/種群為研究對(duì)象,分別利用熒光定量PCR和超高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法等多種方法開(kāi)展研究,得到的結(jié)果如下:1.在前期抗性汰選的基礎(chǔ)上,繼續(xù)采用浸漬法獲得了對(duì)氟苯蟲(chóng)酰胺抗性達(dá)946.95倍的高抗小菜蛾品系（R_f）,且魚(yú)尼丁受體4946位點(diǎn)基因型為GAG。測(cè)得小菜蛾田間抗性種群（R_b）對(duì)氟苯蟲(chóng)酰胺的抗性倍數(shù)1115.06倍。2.為進(jìn)一步研究小菜蛾生殖與抗性之間的作用機(jī)制,用熒光定量PCR分析比較抗性小菜蛾和敏感品系小菜蛾成蟲(chóng)卵黃原蛋白（PxVg）基因、卵黃原蛋白受... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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小菜蛾對(duì)氟苯蟲(chóng)酰胺的抗性發(fā)展規(guī)律

山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文223.2不同品系/種群小菜蛾生殖相關(guān)基因表達(dá)差異與酶活性分析3.2.1小菜蛾總RNA提取及cDNA合成圖21.0%瓊脂糖凝膠電泳總RNA檢測(cè)Fig.2TotalRNAdetectionon1.0%agarosegelelectrophoresis注：由左及右依次為S、Rf、Rb。Note:S、Rf、Rbfromlefttoright通過(guò)BioTekEPOCH2檢測(cè)小菜蛾總RNA的提取質(zhì)量，以ddH2O作為空白對(duì)照，結(jié)果表明，提取的小菜蛾總RNA的OD260/OD280值均在1.8～2.2之間，且濃度均大于500ng/μL，說(shuō)明提取的RNA純度較好，無(wú)蛋白質(zhì)和DNA污染。通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)RNA完整性，結(jié)果顯示28S、18S和5S條帶清晰（圖2），由于昆蟲(chóng)的總RNA在電泳條件下28SrRNA的氫鍵易斷裂（Winnebecketal.,2010），從而使28S亮度減弱。可知RNA樣品完整性良好，質(zhì)量合格，可用于后續(xù)cDNA的合成。3.2.2引物驗(yàn)證通過(guò)1.0%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR擴(kuò)增目的片段的檢測(cè)結(jié)果顯示（圖3），產(chǎn)物片段大小與預(yù)期一致均在200bp以內(nèi)，目的條帶清晰單一，無(wú)引物二聚體及非特異性擴(kuò)增條帶。依據(jù)Bustin等對(duì)qPCR引物質(zhì)量提出的要求，從圖4中看所有引物擴(kuò)增的溶解峰單一，且溶解溫度均大于80℃，通過(guò)圖5結(jié)果顯示R2均大于0.98，所有引物擴(kuò)增的Ct-LogC斜率均在-3.58~-3.10之間，擴(kuò)增效率均在90%~110%之間，均符合要求，說(shuō)明引物質(zhì)量合格，可以用于后續(xù)的熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)。

氟苯蟲(chóng)酰胺抗性對(duì)小菜蛾生殖的影響機(jī)制初探23圖36對(duì)不同引物的小菜蛾P(guān)CR擴(kuò)增結(jié)果1-6分別為RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.3PCRamplificationresultsofP.xylostellawith6differentprimerpairs1-6areRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.圖4小菜蛾基因的熒光定量PCR溶解曲線A-F分別為RPS-13，β-actin，Vg，VgR，Tre，MetFig.4FluorescencequantitativePCRdissolutioncurveA-FareRPS-13,β-actin,Vg,VgR,TreandMetgeneinP.xylostella,respectively.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]江原鈍綏螨卵黃原蛋白基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 高尚仁.南昌大學(xué) 2018
[2]抗氟苯蟲(chóng)酰胺小菜蛾的轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 王成花.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]食物和殺蟲(chóng)劑對(duì)黑肩綠盲蝽生長(zhǎng)、發(fā)育和生殖的影響[D]. 劉陳.揚(yáng)州大學(xué) 2017
[4]小菜蛾對(duì)雙酰胺類殺蟲(chóng)劑的室內(nèi)與田間抗性的異同研究[D]. 秦超.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[5]小菜蛾保幼激素受體基因的分子特性及生殖調(diào)控作用研究[D]. 楊一帆.福建農(nóng)林大學(xué) 2017
[6]小菜蛾卵黃原蛋白受體基因的克隆與表達(dá)模式分析[D]. 王加偉.福建農(nóng)林大學(xué) 2016
[7]小菜蛾卵黃原蛋白基因的克隆、表達(dá)模式與功能分析[D]. 鄒明民.福建農(nóng)林大學(xué) 2015
[8]馬鈴薯甲蟲(chóng)保幼激素合成與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的克隆和功能分析[D]. 周立濤.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[9]亞劑量氟鈴脲對(duì)昆蟲(chóng)免疫的干擾機(jī)制及血細(xì)胞高通量藥物篩選[D]. 賀媛.華東理工大學(xué) 2011
[10]吡蟲(chóng)啉對(duì)煙粉虱實(shí)驗(yàn)種群的亞致死影響[D]. 吳咚咚.福建農(nóng)林大學(xué) 2009



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