BROTHER OF FT AND TFL1（BFT）被稱為FLOWERING LOCUS T（FT）和TERMINAL FLOWER1（TFL1）的兄弟,在植物開花通路中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。在鹽脅迫下,擬南芥BFT蛋白在頂端分生組織中同b ZIP轉(zhuǎn)錄因子FD互作,形成復(fù)合物調(diào)控開花轉(zhuǎn)變。實(shí)驗(yàn)室前期構(gòu)建了新陸早33葉組織的酵母雙雜c DNA文庫(kù),并從中篩選出一個(gè)與陸地棉開花促進(jìn)因子Gh FT1蛋白互作的天冬氨酸類似蛋白（Aspartic proteinases,APs）,該蛋白酶基因在植物生長(zhǎng)發(fā)育、抗病及逆境脅迫過程中起著重要作用。目的:全基因組鑒定棉花BFT和Gh APs基因,通過生物信息學(xué)分析,初步預(yù)測(cè)Gh APs可能存在的生物學(xué)功能;利用蛋白互作和轉(zhuǎn)基因擬南芥研究,探索Gh BFT在開花調(diào)控中的功能。方法:基于最近更新的棉花基因組數(shù)據(jù)庫(kù),鑒定棉花BFT和Gh APs基因;RT-PCR技術(shù)克隆Gh BFT1和Gh BFT2基因;實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)Gh BFT1和Gh BFT2基因表達(dá)特征;酵母雙雜交（Yeast two-hybrid,Y2H）和雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)（Bimo... 

【文章來源】：石河子大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

棉花與其它植物BFT蛋白系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

棉花BFT和APs基因的全基因組分析16A.保守基序分析；B.基因結(jié)構(gòu)分析A.Conservedmotifanalysis;B.Genestructuralanalysis圖2-2棉花與其它物種BFT基因結(jié)構(gòu)和保守基序分析Fig.2-2AnalysisofBFTgenestructureandconservedmotifamongcottonandotherplantspecies多重序列比對(duì)結(jié)果顯示，不同物種BFT氨基酸序列間相似性較高，均含有PEBP家族典型的保守結(jié)構(gòu)域D-P-D-x-P和G-x-H-R，且不同倍性的棉花BFT氨基酸序列均具有TFL1亞組的保守位點(diǎn)His88/Asp144，這與報(bào)道的擬南芥AtBFT含有FT保守位點(diǎn)Tyr85有所不同(Yooetal.,2010)。其次，與擬南芥位于同一進(jìn)化分支的琴葉擬南芥、薺菜、蕪菁和甘藍(lán)等十字花科物種的BFT蛋白序列均含有FT功能保守位點(diǎn)Tyr85，而親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的棉花、獼猴桃和大豆BFT蛋白序列卻含有His88保守位點(diǎn)(圖2-3)。BFT同源蛋白間保守氨基酸位點(diǎn)的差異，可能是物種在進(jìn)化過程中導(dǎo)致BFT蛋白發(fā)生部分突變，意味著不同物種BFT基因功能可能存在一定的差異。通過比較不同倍性棉花BFT同源氨基酸序列，發(fā)現(xiàn)BFT蛋白間相似性達(dá)82%~99%，且擁有4處棉花BFT蛋白特異保守位點(diǎn)，分別為Val4(V)、Pro5(P)、Thr28(T)和Ala46(A)；而棉花BFT1和BFT2間存在多處突變位點(diǎn)(圖2-3)。綜上，通過分析BFT基因結(jié)構(gòu)、蛋白保守基序及序列特征，我們發(fā)現(xiàn)植物BFT基因具有一定的保守性，預(yù)示其可能具有相似的功能。

棉花BFT和APs基因的全基因組分析17不同顏色方框分別代表不同保守基序；陰影部分：紫色為保守結(jié)構(gòu)域，粉色為棉花BFT1、BFT2蛋白突變位點(diǎn)，綠色代表棉花BFT蛋白保守位點(diǎn)，藍(lán)色代表FT/TFL1亞家族特異保守位點(diǎn)Differentcolorboxesrepresentdifferentconservativemotifs;shadowpart:purpleistheconserveddomain,pinkisthecottonBFT1andBFT2proteinmutationsite,greenrepresentsthecottonBFTproteinconservedsite,andbluerepresentsthespecificconservedsiteofFT/TFL1subfamily.圖2-3棉花與其它植物BFT蛋白的氨基酸序列比對(duì)Fig.2-3AminoacidsequencealignmentofBFTproteinsamongcottonandotherplantspecies2.2.4棉花BFT基因的表達(dá)特征基于陸地棉(TM-1)和海島棉轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)(Huetal.,2019)，分析BFT同源基因在陸地棉和海島棉的根、莖、葉、花等組織及不同發(fā)育時(shí)期胚珠和纖維中的表達(dá)特征。結(jié)果顯示，陸地棉GhBFT1-A基因在TM-1的莖、花藥和苞片中表達(dá)量相對(duì)較高；GhBFT1-D在胚珠和纖維發(fā)育早期高表達(dá)，且在葉、花瓣、雌蕊、萼片、花絲及花托中表達(dá)量較高；GhBFT2-A在胚珠發(fā)育早期時(shí)期表達(dá)量較高；GhBFT2-D在根、葉、花托和萼片中表達(dá)相對(duì)較高。綜合來看，在陸地棉4個(gè)GhBFT基因中，GhBFT1-D在各組織中表達(dá)量相對(duì)較高(圖2-4)，猜測(cè)其可能在基因功能中起主導(dǎo)作用。同樣，海島棉BFT基因表達(dá)特征也呈現(xiàn)出相似的現(xiàn)象，4個(gè)GbBFT同源基因中，GbBFT1-D表達(dá)量相對(duì)較高，且也在胚珠、纖維、葉和花中高表達(dá)(圖2-5)。海島棉和陸地棉中4個(gè)BFT基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)差異，有可能與棉花發(fā)生全基因組復(fù)制事件后，基因間出現(xiàn)有偏性的基因表達(dá)特征有

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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