在哺乳動物體內(nèi),免疫球蛋白受體在免疫防御中起著重要作用,而負(fù)責(zé)運(yùn)輸免疫球蛋白G（IgG）的新生兒Fc受體（FcRn）（α鏈）及負(fù)責(zé)運(yùn)輸免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白M（IgM）的聚合免疫球蛋白受體（pIgR）分別由FCGRT和PIGR基因編碼。為了制備抗雙峰駝FcRn和pIgR的多克隆抗體,為本實(shí)驗(yàn)室后期進(jìn)一步研究雙峰駝免疫球蛋白受體在其不同黏膜表面的分布規(guī)律和黏膜免疫反應(yīng)之間的關(guān)系提供依據(jù)。本研究由以下兩方面構(gòu)成:（1）首先分別從NCBI收錄的雙峰駝FCGRT和PIGR基因序列中選取編碼區(qū),經(jīng)跨膜結(jié)構(gòu)和信號肽預(yù)測分析,截取不含信號肽的膜外序列,經(jīng)酶切位點(diǎn)預(yù)測后構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-FcRn和pET-28a-pIgR;然后,將其分別轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞BL21（DE3）和Rosetta（DE3）中,經(jīng)1.0 mmol·L^-1 IPTG誘導(dǎo)表達(dá)6 h后進(jìn)行SDS-PAGE檢測。接著,分別以0.1 mmol·L^-1、0.3 mmol·L^-1、0.5 mmol·L^-1、0.7 mmol·L^-... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

IgG和白蛋白的FcRn挽救途徑（引自BaldwinWM，2019）

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文8基因的多態(tài)性與免疫球蛋白A腎病相關(guān)[81]，進(jìn)一步強(qiáng)調(diào)了pIgR的臨床重要性。圖2聚合免疫球蛋白受體（pIgR）通過極化上皮細(xì)胞的途徑（引自KaetzelCS，2005）Fig.2ThepathwayofpIgRthroughpolarizedepithelialcells(fromkaetzelCS,2005)3.3.2pIgR的免疫功能通過pIgR產(chǎn)生的SC除了促進(jìn)pIg的運(yùn)輸外，對SIg也至關(guān)重要[62]。首先，SC增強(qiáng)了SIg的穩(wěn)定性。雖然SC不改變SIg抗原的親和力[82]，但SC被認(rèn)為有助于SIg抵抗腸道內(nèi)宿主和細(xì)菌酶的蛋白水解[83]。然而，已有病原體進(jìn)化出了克服增強(qiáng)的蛋白質(zhì)水解抗性的方法，尤其是鏈球菌特異性蛋白酶對pIg和SIg的降解作用相似[84]。第二，SC幫助在黏液層中適當(dāng)?shù)囟ㄎ籗Ig。SC和pIg均通過N-鍵和o-鍵發(fā)生糖基化[85]，這些糖基化作用有助于上皮細(xì)胞的胞吞作用和SIg的釋放[86]。在遠(yuǎn)端胃腸道中，SIg通過厚的內(nèi)黏液層擴(kuò)散并附著于外黏液層，腸道細(xì)菌通過與這些碳水化合物結(jié)合而定位于外黏液層[80]。第三，SC是非特異性的微生物清道夫。N-和o-鏈糖基化都介導(dǎo)細(xì)菌的附著，幫助細(xì)菌在黏液層的隔離[87]。例如，SC通過與非特異性的糖鏈相互作用，凝集和中和艱難梭菌毒素A[88]。此外，腸致病性大腸桿菌內(nèi)毒素蛋白和1型脊椎凝集素的聚糖結(jié)合能力介導(dǎo)了SIgA結(jié)合，從而在體外凝集細(xì)菌并防止上皮細(xì)胞損傷[77]。天然的、非特異性的SIgA還能在體內(nèi)降低霍亂弧菌的細(xì)菌載量，并在體外依賴SC上存在的含甘露糖的寡糖抑制生物膜的形成[89]。天然SIgA進(jìn)一步介導(dǎo)體內(nèi)凝集和管腔內(nèi)免疫排斥，清除腸球菌[90]和腸傷寒沙門氏菌，從而減少兩種病原體的感染和炎癥[91]。因

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文202試驗(yàn)結(jié)果2.1雙峰駝FCGRT基因合成與重組質(zhì)粒構(gòu)建的結(jié)果通過對雙峰駝FcRn蛋白親水性（見圖1-1A）和抗原表位（見圖1-1B）的預(yù)測分析，表明該蛋白為抗原指數(shù)較高的疏水性蛋白；跨膜結(jié)構(gòu)預(yù)測FcRn蛋白總共有355個(gè)氨基酸，其中氨基酸1-299為膜外區(qū)（見圖1-2），利用Editseq（DNASTAR7.0）截取膜外部分；信號肽預(yù)測該蛋白氨基酸1-24為信號肽部分（見圖1-3），截除信號肽，剩余275個(gè)氨基酸，然后在上游和下游分別添加起始密碼子ATG和終止密碼子TAG，最終預(yù)測該FcRn重組蛋白大小為34KDa。圖1-1雙峰駝FcRn蛋白親水性與抗原表位的預(yù)測Fig.1-1PredictionofthehydropHilicityandepitopeofFcRnproteininBactriancamel圖1-2雙峰駝FcRn蛋白跨膜區(qū)的預(yù)測Fig.1-2PredictionofFcRnproteintransmembraneregioninBactriancamel

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]雙峰駝PIGR和FCGRT的基因克隆、生物信息學(xué)分析及在扁桃體中表達(dá)特性的研究[D]. 賈帥.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017

碩士論文
[1]超聲波輔助珠磨法破壁微擬球藻細(xì)胞[D]. 劉習(xí)軍.華南理工大學(xué) 2019
[2]重組大腸桿菌表達(dá)包涵體藥物蛋白的復(fù)性與純化研究[D]. 何偉.華東理工大學(xué) 2017
[3]雙峰駝黏膜免疫效應(yīng)分子sIgA分泌細(xì)胞在小腸分布規(guī)律的研究[D]. 張林江.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[4]雙峰駝IgGs的提取、抗體制備及其分泌細(xì)胞在小腸分布規(guī)律的研究[D]. 張旺東.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3450358