發(fā)布時(shí)間：2017-04-30 10:15

  本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)蛋白表皮生長(zhǎng)因子和肌腱蛋白在仿刺參再生過(guò)程中的表達(dá)分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：海參有很強(qiáng)的再生能力,目前可以確定許多重要基因與再生過(guò)程的分子機(jī)制以及細(xì)胞間的信號(hào)通路相關(guān)。Fibropellin-ia基因的產(chǎn)物形成復(fù)雜的纖維狀結(jié)構(gòu)且與其他透明層的組件一起構(gòu)成細(xì)胞粘附的胞外基質(zhì)。透明層是一個(gè)復(fù)雜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),在胚胎發(fā)育的整個(gè)過(guò)程中都覆蓋在海參胚胎的周?chē)?在胚胎發(fā)育的某些特定時(shí)期,細(xì)胞可以在透明層上面進(jìn)行附著和遷移。Tenascin蛋白表達(dá)在胚胎發(fā)育過(guò)程中以及成體正常組織的傷口愈合,神經(jīng)再生等過(guò)程,且腫瘤組織細(xì)胞中也有明顯的表達(dá)。在本研究中,我們首次克隆了仿刺參中fibropellin-ia和tenascin的全長(zhǎng)cDNA,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示日本仿刺參fibropellin-ia(Aj-fnia)cDNA全長(zhǎng)1390個(gè)堿基,編碼199個(gè)氨基酸、tenascin(Aj-tenascin)為1366個(gè)堿基,編碼179個(gè)氨基酸。通過(guò)生物信息學(xué)方法分析了這兩個(gè)基因的結(jié)構(gòu)和特點(diǎn)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和原位雜交(ISH)技術(shù)分析了仿刺參再生過(guò)程中的細(xì)胞外基質(zhì)重塑的過(guò)程中這兩個(gè)基因的表達(dá)模式。結(jié)果發(fā)現(xiàn),Aj-fnia和Aj-tenascin在再生組織的表達(dá)水平高于正常組織。在仿刺參進(jìn)行吐臟處理后,Aj-fnia和Aj-tenascin在腸道和呼吸道的最高表達(dá)水平分別出現(xiàn)在第15日和20日。在體壁早期的再生階段,Aj-fnia和Aj-tenascin的最高表達(dá)水平出現(xiàn)在35分鐘和45分鐘,隨后,表達(dá)量均有所下降,然后在5至7 d再次出現(xiàn)表達(dá)量的峰值。原位雜交技術(shù)分析Aj-fnia和Aj-tenascin基因在仿刺參體內(nèi)的體壁、縱肌、腸道和呼吸道樹(shù)中的表達(dá)部位的時(shí)發(fā)現(xiàn):在體壁的表皮、真皮和結(jié)締組織中,腸道的黏膜和黏膜下層,呼吸樹(shù)的粘膜細(xì)胞及末端的一層或多層鱗狀上皮細(xì)胞中目的基因表達(dá)較多。所有上述這些發(fā)現(xiàn)均表明:Aj-fnia和Aj-tenascin在海參的再生過(guò)程中扮演了十分重要角色,是刺參再生的重要相關(guān)基因。
【關(guān)鍵詞】：仿刺參 細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān) Fibropellin-ia(Aj-fnia)基因 Tenascin(Aj-tenascin)基因 表達(dá)模式
【學(xué)位授予單位】：遼寧師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 1 前言9-20
• 1.1 仿刺參的分類、形態(tài)特點(diǎn)9-11
• 1.1.1 仿刺參的分類和形態(tài)特征9
• 1.1.2 仿刺參的生活習(xí)性9-10
• 1.1.3 仿刺參的藥用和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值10
• 1.1.4 仿刺參的特殊生理特點(diǎn)10-11
• 1.2 仿刺參各組織器官的再生11-15
• 1.2.1 仿刺參吐臟后消化道的再生11-12
• 1.2.2 仿刺參吐臟后呼吸樹(shù)的再生12-13
• 1.2.3 仿刺參體壁創(chuàng)傷后的再生13
• 1.2.4 仿刺參創(chuàng)傷后縱肌帶的再生13-14
• 1.2.5 探究仿刺參再生的原理和機(jī)制14-15
• 1.3 細(xì)胞外基質(zhì)—ECM15
• 1.4 Fibropellin-ia15-16
• 1.4.1 基因的家族成員介紹15
• 1.4.2 基因的結(jié)構(gòu)和功能15-16
• 1.5 Tenascin16-19
• 1.5.1. 基因的家族成員介紹16-18
• 1.5.2. 基因的結(jié)構(gòu)和功能18-19
• 1.6 實(shí)驗(yàn)的目的及探究的意義19-20
• 2 材料和方法20-36
• 2.1 材料20-25
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料20
• 2.1.2 主要試劑及藥品20-24
• 2.1.3 儀器與設(shè)備24-25
• 2.2 方法25-36
• 2.2.1 提取仿刺參總RNA25
• 2.2.2 獲取基因全長(zhǎng)序列25-32
• 2.2.3 原位雜交32-35
• 2.2.4 熒光實(shí)時(shí)定量PCR35-36
• 3 結(jié)果36-51
• 3.1 基因全長(zhǎng)的克隆36-42
• 3.1.1 Aj-fnia、Aj-tenascin基因EST片段36-37
• 3.1.2 Aj-fnia、Aj-tenascin基因 3’RACE片段37-38
• 3.1.3 Aj-fnia、Aj-tenascin基因 5’RACE片段38-39
• 3.1.4 Aj-fnia、Aj-tenascin基因全長(zhǎng)序列39-42
• 3.2 生物信息學(xué)分析42-47
• 3.3 Aj-fnia和Aj-tenascin的表達(dá)部位47-49
• 3.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Aj-fnia和Aj-tenascin的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平49-51
• 4 討論51-54
• 4.1 Aj-fnia、Aj-tenascin基因結(jié)構(gòu)和功能51-52
• 4.2 Aj-fnia、Aj-tenascin基因在仿刺參中表達(dá)部位的情況52
• 4.3 Aj-fnia、Aj-tenascin基因在各階段再生組織中的表達(dá)模式52-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況62-63
• 致謝63

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9 江曙光;常亞青;田q，

本文編號(hào)：336676