目的:潞黨參產(chǎn)于上黨盆地,為山西道地藥材,具有補(bǔ)中益氣、健脾益肺的功效。課題組前期從黨參中克隆得到蔗糖:蔗糖1-果糖基轉(zhuǎn)移酶（sucrose:sucrose 1-fructosyltransferase,Cp1-SST）,該基因可響應(yīng)干旱脅迫且在果聚糖合成代謝中發(fā)揮重要作用。目前黨參基因相關(guān)的研究已經(jīng)起步,但是從轉(zhuǎn)錄調(diào)控方向研究黨參果聚糖的生物合成途徑尚不明確。本文從Cp1-SST的亞細(xì)胞定位出發(fā),探究Cp1-SST基因?qū)Ω珊得{迫響應(yīng)及相關(guān)糖代謝的機(jī)制,克隆Cp1-SST基因的啟動子并對其序列進(jìn)行功能分析以及冷脅迫處理,分析其對下游基因Cp1-SST的啟動作用,同時(shí)對黨參轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫進(jìn)行黨參多糖合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的篩選,再結(jié)合Cp1-SST基因啟動子元件分析的結(jié)果篩選轉(zhuǎn)錄因子,為闡明黨參果聚糖合成調(diào)控的分子機(jī)制提供依據(jù),并為探討黨參道地性形成機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。方法:1.通過無縫克隆技術(shù)將Cp1-SST基因克隆至pHBT-GFP-NOS載體上,獲得1-SST-GFP植物瞬時(shí)表達(dá)融合載體。利用PEG-Ca²⁺介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì)體,利用熒光共聚焦顯微鏡觀察蛋白亞細(xì)胞定... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

pHBT-1-SST-GFP重組載體圖譜

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文9整齊單一，且28S和18S條帶的亮度比接近2∶1。核酸蛋白儀檢測結(jié)果顯示樣品的A260/A280在1.8~2.0之間，且A260/A230均大于2.0，說明所提取的RNA完整性好、純度高，可用于后續(xù)cDNA的合成。以黨參cDNA為模板，擴(kuò)增得到1800bp左右的片段，電泳結(jié)果（圖1-3）表明，擴(kuò)增產(chǎn)物與預(yù)期目的片段大小一致且條帶單一，可用于后續(xù)TA克隆實(shí)驗(yàn)。圖1-2黨參根總RNA電泳分析圖1-3Cp1-SST基因PCR電泳分析(MK:5000Marker；1：擴(kuò)增的Cp1-SST片段)1.3.2pHBT-1-SST-GFP重組載體的構(gòu)建通過設(shè)計(jì)無縫克隆引物將1-SST基因克隆至pHBT-GFP-NOS載體上，獲得1-SST-GFP植物瞬時(shí)表達(dá)融合載體。以培養(yǎng)過夜的菌落為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，所得條帶亮且單一（圖1-4），與目的片段大小一致，可用于質(zhì)粒的提齲對提取的質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，電泳分析結(jié)果如圖1-5所示，說明pHBT-1-SST-GFP重

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文9整齊單一，且28S和18S條帶的亮度比接近2∶1。核酸蛋白儀檢測結(jié)果顯示樣品的A260/A280在1.8~2.0之間，且A260/A230均大于2.0，說明所提取的RNA完整性好、純度高，可用于后續(xù)cDNA的合成。以黨參cDNA為模板，擴(kuò)增得到1800bp左右的片段，電泳結(jié)果（圖1-3）表明，擴(kuò)增產(chǎn)物與預(yù)期目的片段大小一致且條帶單一，可用于后續(xù)TA克隆實(shí)驗(yàn)。圖1-2黨參根總RNA電泳分析圖1-3Cp1-SST基因PCR電泳分析(MK:5000Marker；1：擴(kuò)增的Cp1-SST片段)1.3.2pHBT-1-SST-GFP重組載體的構(gòu)建通過設(shè)計(jì)無縫克隆引物將1-SST基因克隆至pHBT-GFP-NOS載體上，獲得1-SST-GFP植物瞬時(shí)表達(dá)融合載體。以培養(yǎng)過夜的菌落為模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，所得條帶亮且單一（圖1-4），與目的片段大小一致，可用于質(zhì)粒的提齲對提取的質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，電泳分析結(jié)果如圖1-5所示，說明pHBT-1-SST-GFP重

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]茄子花藥開裂相關(guān)基因SmDAD1啟動子的克隆及功能分析[J]. 張少偉,袁超,牛義,湯青林,魏大勇,王永清,田時(shí)炳,楊洋,王志敏.  園藝學(xué)報(bào). 2020(04)
[2]中間錦雞兒CiNAC038啟動子的克隆及對激素響應(yīng)分析[J]. 紅格日其其格,王燕飛,高仙靈,龐彩霞,尚曉蕊,李國婧,王瑞剛.  生物技術(shù)通報(bào). 2020(07)
[3]馬鈴薯StMYB44基因?qū)φ崽堑捻憫?yīng)[J]. 謝海娟,蒲秀琴,葉廣繼,王艦,楊永智.  西北植物學(xué)報(bào). 2020(02)
[4]甘藍(lán)型油菜啟動子pBnaC05g31880D的克隆與功能分析[J]. 華兆暉,范世航,李俊.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020(02)
[5]小葉楊TMM基因啟動子克隆及表達(dá)模式分析[J]. 樂麗娜,滕青云,宋冰倩,匡華琳,陳英.  分子植物育種. 2020(01)
[6]小麥灌漿相關(guān)基因TaGIF1的克隆及表達(dá)分析[J]. 田小萍,王光浩,張宏,吉萬全.  麥類作物學(xué)報(bào). 2020(01)
[7]薺菜TPD1基因啟動子與GUS基因表達(dá)載體的構(gòu)建及擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化[J]. 何金花,楊正修,姜路華,方磊,趙燕.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(24)
[8]大豆中3個(gè)Dof轉(zhuǎn)錄因子的生物信息學(xué)及表達(dá)分析[J]. 翟瑩,邱爽,張軍,劉春雨,趙艷,李珊珊,張梅娟,邱增城,任巍巍.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2019(06)
[9]巴戟天MoDXR基因及其啟動子的克隆與分析[J]. 謝德金,葉友杰,楊德明,張婭欣,何天友,陳禮光,鄭郁善.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2020(02)
[10]蘋果NLP（Nin-Like Protein）轉(zhuǎn)錄因子基因家族全基因組鑒定及表達(dá)模式分析[J]. 王尋,陳西霞,李宏亮,張富軍,趙先炎,韓月彭,王小非,郝玉金.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(23)

博士論文
[1]陸地棉GhWRKY27/42/91基因的克隆和功能驗(yàn)證[D]. 顧麗姣.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2019
[2]擬南芥AtSUC4與AtPsaL的葉綠體定位機(jī)制的研究[D]. 楊紫薇.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[3]擬南芥ERF74對非生物脅迫響應(yīng)機(jī)制的研究[D]. 姚遠(yuǎn).華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[4]小麥族植物果聚糖合成酶基因克隆及功能驗(yàn)證[D]. 高翔.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2010
[5]辣椒WRKY轉(zhuǎn)錄因子cDNA的分離與功能鑒定[D]. 王育娜.福建農(nóng)林大學(xué) 2008

碩士論文
[1]馬鈴薯StCRK1和StCRK2亞細(xì)胞定位及其互作蛋白的初步篩選[D]. 王雙.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2019
[2]潞黨參藥材商品等級及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D]. 張沙沙.山西醫(yī)科大學(xué) 2019
[3]蔗糖—果糖基轉(zhuǎn)移酶SST基因轉(zhuǎn)入甜菜產(chǎn)生果聚糖的研究[D]. 梁文潔.石河子大學(xué) 2017
[4]黨參揮發(fā)性成分分析及特殊香氣研究[D]. 郭瓊瓊.山西醫(yī)科大學(xué) 2016
[5]不同來源黨參成分含量測定及黨參HPLC特征圖譜研究[D]. 關(guān)琳靜.山西醫(yī)科大學(xué) 2015
[6]潞黨參與常用商品黨參質(zhì)量比較研究及潞黨參質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂[D]. 趙江燕.山西醫(yī)科大學(xué) 2014
[7]棕色棉纖維原花青素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因GhTT12的克隆與表達(dá)分析[D]. 吳楠.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[8]轉(zhuǎn)蔗糖：蔗糖-1-果糖基轉(zhuǎn)移酶基因甘蔗的抗旱性研究[D]. 武媛麗.海南大學(xué) 2011



本文編號：3360488