目的:骨質(zhì)疏松癥是以骨量減少、骨的微觀結(jié)構(gòu)退化為特征的,致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病。多見于老年動物和絕育后動物。隨著社會的發(fā)展,越來越多的寵物主人會選擇為自己的愛寵做絕育手術(shù),動物絕育后,體內(nèi)雌激素水平會顯著下降,雌激素水平降低可能會導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生,但長期補充雌激素會增加動物患乳腺癌和對稱性脫毛等疾病的風(fēng)險,因此,研究者力圖尋找一種安全性高、副作用小的雌激素替代物。葛根素是一種植物雌激素,對骨質(zhì)疏松癥的治療效果與雌激素像似,但無雌激素的副作用。本研究擬在細(xì)胞水平和分子水平上研究葛根素對MC3T3-E1成骨細(xì)胞增殖所產(chǎn)生的作用,并觀察其量效關(guān)系和時效關(guān)系。進一步通過抑制MC3T3-E1成骨細(xì)胞中MAPK信號通路主要成員P38和ERK1/2的活性后,觀察比較下游蛋白及MC3T3-E1細(xì)胞増殖過程中標(biāo)志物的表達(dá)情況,明確葛根素對MC3T3-E1細(xì)胞的作用機制并闡明其間所涉及的信號通路。方法與結(jié)果:在MC3T3-E1細(xì)胞培養(yǎng)基中加入不同濃度(0mol/L、10^-7mol/L、10^-6mol/L、10^-5

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度葛根素對MC3T3-E1細(xì)胞增殖的影響

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文20表310-6mol/L葛根素作用不同時間對MC3T3-E1細(xì)胞增殖的影響Table3Effectsof10-6mol/LpuerarinonMC3T3-E1cellproliferationatdifferenttime組別24h36h48h60hOD值1.240.131.530.042.420.121.860.06圖210-6mol/L葛根素作用不同時間對MC3T3-E1細(xì)胞增殖的影響Figure2Effectsof10-6mol/LpuerarinonMC3T3-E1cellproliferationatdifferenttime3.2pNPP檢測結(jié)果pNPP檢測結(jié)果如表3，與對照組相比濃度為10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L的葛根素都能增強MC3T3-E1細(xì)胞內(nèi)ALP的活性，其中葛根素濃度為10-6mol/L時增強細(xì)胞內(nèi)ALP活性的作用最為明顯，葛根素濃度在10-6-10-4mol/L范圍內(nèi)時，濃度越高，促進MC3T3-E1細(xì)胞分泌ALP能力越弱。濃度為10-3mol/L的葛根素會抑制MC3T3-E1細(xì)胞分泌ALP。表4不同濃度葛根素對MC3T3-E1細(xì)胞分化的影響Table4EffectsofPuerarinatDifferentConcentrationsonMC3T3-E1CellDifferentiation注：*表示與空白對照組比較差異顯著（P<0.05）組別空白對照組10-7mol/LPUE10-6mol/LPUE10-5mol/LPUE10-4mol/LPUE10-3mol/LPUEOD值071±0.040.86±0.06*1.09±0.09*0.91±0.06*0.83±0.04*0.61±0.06*

葛根素激活P38、ERK1/2信號通路促進MC3T3-E1細(xì)胞增殖的研究21圖3不同濃度葛根素對MC3T3-E1細(xì)胞分化的影響Figure3EffectsofPuerarinatDifferentConcentrationsonMC3T3-E1CellDifferentiation4討論骨質(zhì)疏松癥是以骨量減少、骨的微觀結(jié)構(gòu)退化為特征的，致使骨的脆性增加以及易于發(fā)生骨折的一種全身性骨骼疾病[1]。促進破骨細(xì)胞骨吸收和抑制成骨細(xì)胞骨生成所導(dǎo)致的骨代謝失調(diào)都可以引起骨質(zhì)疏松癥。成骨細(xì)胞在減少骨質(zhì)丟失和維持骨量中都發(fā)揮著重要作用。由于大多數(shù)原代成骨細(xì)胞在培養(yǎng)9代后會出現(xiàn)生長停滯、衰老和死亡等情況，這使其在體外細(xì)胞實驗中具有一定的局限性。MC3T3-E1細(xì)胞是來源于小鼠顱蓋骨細(xì)胞的前體細(xì)胞，具有成骨細(xì)胞形成過程中的生物學(xué)特性，包括基質(zhì)成熟及礦化和ALP活性等，已成為體外研究骨質(zhì)疏松癥比較有價值的細(xì)胞模型[92]，因此，我們采用MC3T3-E1細(xì)胞進行體外實驗。目前治療骨質(zhì)疏松的藥物主要分為骨吸收抑制劑、骨形成促進劑和骨礦化物這三類。雌激素對于骨質(zhì)疏松癥效果好，但副作用大，長期使用可能會導(dǎo)致乳腺癌、皮膚色素過度沉著等疾玻因此，我們力圖尋找一種和雌激素效果，但是安全性高、副作用小的藥物。植物雌激素具有雌激素樣作用，安全性高、副作用校葛根素為中藥葛根的提取物，是一種副作用小的植物雌激素，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于臨床，對高血壓、糖尿并冠心病等疾病有較好的療效。研究表明，其具有促進成骨細(xì)胞骨形成的作用[93]。本章實驗以MC3T3-E1細(xì)胞為模型，考察了葛根素對

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本文編號：3321611