本文關(guān)鍵詞：合浦珠母貝外套膜細(xì)胞培養(yǎng)及其礦化功能的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：合浦珠母貝(Pinctada fucata)是我國(guó)重要的海水珍珠養(yǎng)殖貝類,也是生物礦化研究的典型物種。外套膜是珍珠貝進(jìn)行生物礦化的主要器官。過(guò)去研究普遍認(rèn)為,外套膜細(xì)胞通過(guò)分泌基質(zhì)蛋白,調(diào)控晶體在胞外生長(zhǎng)。然而,外套膜細(xì)胞是否直接參與到貝殼礦化過(guò)程還尚未被探明。本研究發(fā)現(xiàn),含有外套膜細(xì)胞的結(jié)晶體系中,能夠長(zhǎng)出大量碳酸鈣晶體,這些晶體都由高度有序的微小單元堆砌而成,呈現(xiàn)出典型生物礦化產(chǎn)物的特點(diǎn);當(dāng)晶體礦物質(zhì)成分被溶解之后,可觀察到一層有機(jī)質(zhì)薄膜;部分晶體表面出現(xiàn)被“腐蝕”的痕跡,“腐蝕”部位光滑平整,還有細(xì)胞附著其上。在僅含有細(xì)胞分泌物(基質(zhì)蛋白)的結(jié)晶體系中,并未析出任何晶體,而在體外碳酸鈣結(jié)晶實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞分泌物卻能改變天然方解石晶體的形貌,并促進(jìn)晶體的生長(zhǎng)及融合。以上結(jié)果表明,外套膜細(xì)胞與碳酸鈣晶體的成核過(guò)程密不可分,并很可能直接參與到晶體表面的重塑;外套膜細(xì)胞分泌物,如可溶性基質(zhì)蛋白等,不能獨(dú)立介導(dǎo)晶體成核,但能加速晶體的生長(zhǎng),并促進(jìn)晶體融合,調(diào)控晶體的形貌。由此可見,軟體動(dòng)物的礦化過(guò)程,很可能是由細(xì)胞及其分泌物共同參與完成。介于外套膜細(xì)胞在礦化過(guò)程中表現(xiàn)出的重要作用,建立外套膜細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,無(wú)論是對(duì)于軟體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的研究,還是對(duì)于生物礦化機(jī)制的研究,都有巨大貢獻(xiàn)。在合浦珠母貝外套膜原代細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn),延長(zhǎng)合浦珠母貝外套膜細(xì)胞體外存活時(shí)間,并最終建立細(xì)胞系的有效方法,是通過(guò)改良細(xì)胞培養(yǎng)基,增強(qiáng)細(xì)胞分裂和貼壁能力。本實(shí)驗(yàn)研究的四種脊椎動(dòng)物源細(xì)胞因子中:表皮生長(zhǎng)因子(EGF)能顯著提高原代培養(yǎng)細(xì)胞的活性、貼壁能力和遷移能力,并促進(jìn)pif80、n16和accbp基因的表達(dá);內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑(ECGS)能增強(qiáng)細(xì)胞的貼壁能力和遷移能力,并大幅提高pif80、n16和msi7基因的表達(dá)水平;胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)能顯著增強(qiáng)細(xì)胞活性、貼壁能力、遷移能力和msi7的基因表達(dá)水平,但對(duì)pif80、n16和accbp基因的表達(dá)有一定抑制作用;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)能增強(qiáng)細(xì)胞的活性及貼壁能力,并顯著提升pif80、n16和accbp基因的表達(dá)水平。這些結(jié)果表明,脊椎動(dòng)物源細(xì)胞因子能夠有助于延長(zhǎng)外套膜細(xì)胞壽命,增強(qiáng)其貼壁能力和遷移能力,并促進(jìn)部分礦化相關(guān)基質(zhì)蛋白的表達(dá),因而可用于外套膜細(xì)胞的優(yōu)化培養(yǎng)。
【關(guān)鍵詞】：合浦珠母貝 細(xì)胞介導(dǎo)礦化 細(xì)胞因子 外套膜 細(xì)胞培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：清華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S917.4
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 主要符號(hào)對(duì)照表8-9
• 第1章 引言9-22
• 1.1 生物礦化9-12
• 1.1.1 生物礦化的概念及意義9-10
• 1.1.2 生物礦化的調(diào)控機(jī)制10-11
• 1.1.3 生物礦化的研究意義11-12
• 1.2 珍珠貝生物礦化研究現(xiàn)狀12-16
• 1.2.1 珍珠貝的貝殼12-13
• 1.2.2 基質(zhì)蛋白研究現(xiàn)狀13-15
• 1.2.3 珍珠貝礦化器官——外套膜15-16
• 1.3 細(xì)胞介導(dǎo)生物礦化研究16-19
• 1.4 軟體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)19-20
• 1.4.1 軟體動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)狀19-20
• 1.4.2 脊椎動(dòng)物源細(xì)胞因子對(duì)無(wú)脊椎動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的影響20
• 1.5 研究目的與意義20-21
• 1.6 論文各部分主要內(nèi)容21-22
• 第2章 外套膜細(xì)胞及其分泌物對(duì)碳酸鈣結(jié)晶的影響22-33
• 2.1 材料與方法22-24
• 2.1.1 外套膜原代細(xì)胞及其分泌物介導(dǎo)碳酸鈣晶體形成22-23
• 2.1.2 體外碳酸鈣結(jié)晶實(shí)驗(yàn)23-24
• 2.2 結(jié)果24-30
• 2.2.1 外套膜細(xì)胞介導(dǎo)碳酸鈣結(jié)晶24-27
• 2.2.2 外套膜細(xì)胞對(duì)碳酸鈣晶體表面的重塑作用27-29
• 2.2.3 細(xì)胞分泌物對(duì)碳酸鈣結(jié)晶的影響29-30
• 2.3 討論30-33
• 2.3.1 外套膜細(xì)胞及其分泌物對(duì)晶體成核、生長(zhǎng)及重塑的影響30-32
• 2.3.2 本部分研究的結(jié)論及意義32-33
• 第3章 細(xì)胞因子對(duì)外套膜細(xì)胞培養(yǎng)及礦化功能的影響33-49
• 3.1 材料與方法33-37
• 3.1.1 組織平衡液、組織消毒液和細(xì)胞培養(yǎng)液的配制33-34
• 3.1.2 外套膜原代細(xì)胞的培養(yǎng)與收集34
• 3.1.3 細(xì)胞活性檢測(cè)34-35
• 3.1.4 細(xì)胞貼壁實(shí)驗(yàn)35
• 3.1.5 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)35
• 3.1.6 礦化相關(guān)基因的表達(dá)分析35-37
• 3.2 結(jié)果37-45
• 3.2.1 外套膜細(xì)胞培養(yǎng)37-38
• 3.2.2 細(xì)胞因子對(duì)細(xì)胞活性的影響38-39
• 3.2.3 細(xì)胞因子對(duì)細(xì)胞貼壁能力的影響39-42
• 3.2.4 細(xì)胞因子對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響42-44
• 3.2.5 細(xì)胞因子對(duì)礦化相關(guān)基因表達(dá)的影響44-45
• 3.3 討論45-49
• 3.3.1 外套膜原代細(xì)胞培養(yǎng)45-46
• 3.3.2 脊椎動(dòng)物源細(xì)胞因子對(duì)外膜細(xì)胞培養(yǎng)及其礦化功能的影響46-48
• 3.3.3 本部分研究的結(jié)論及意義48-49
• 第4章 結(jié)論與展望49-52
• 4.1 結(jié)論49
• 4.2 展望49-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果58

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