隨著生活水平的提高,人們對膳食結構的要求越來越高,畜產品的營養(yǎng)價值、風味品質及衛(wèi)生安全備受關注,對優(yōu)質羊肉需求不斷加大。肉用動物脂肪分布和甘油三酯的沉積是影響肉質風味和胴體品質的重要因素。動物體脂沉積受前體脂肪細胞增殖和分化的影響,前體脂肪細胞的增殖和分化受多種因素調控。本文采用Ι型膠原酶消化分離小尾寒羊尾部和皮下體脂肪細胞,進行原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng),添加不同長鏈脂肪酸誘導分化,觀察細胞形態(tài),通過油紅O染色,實時熒光定量PCR法,研究長鏈脂肪酸對綿羊前體脂肪細胞增殖活性和成脂分化的影響及其對相關基因表達的影響。實驗結果如下:1.小尾寒羊尾部前體脂肪細胞接種后4h開始有少量細胞貼壁,腹部皮下前體脂肪細胞接種后6h后開始有少量細胞貼壁;開始貼壁的細胞形態(tài)多為三角形和不規(guī)則形狀,細胞生長至鋪滿瓶底時,細胞形態(tài)多呈長梭形。細胞生長曲線呈“S”形,尾部前體脂肪細胞倍增時間為22.04 h,顯著短于皮下前體脂肪細胞29.56h（P<0.01）;尾部前體脂肪細胞最大增殖密度為58.9×10⁴個/mL,顯著大于皮下前體脂肪細胞29.7×10⁴個/mL（P... 

【文章來源】：西北民族大學甘肅省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

尾部和皮下前體脂肪細胞分離培養(yǎng)及傳代A：尾部前體脂肪細胞培養(yǎng)6d(第一代)；B：尾部前體脂肪細胞培養(yǎng)12d(第一代)；C：尾部前體脂肪細胞培養(yǎng)7d(第二代)；D：皮下前體脂肪細胞培養(yǎng)8d(第一代)；E：皮下前體脂肪細胞培養(yǎng)15d(第一代)；F：皮下前體脂肪細胞培養(yǎng)8d(第二代)

西北民族大學生命科學與工程學院2017級碩士研究生畢業(yè)論文17性（圖3-C）；添加分化誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)3d后，實驗組細胞形態(tài)由長梭形變成橢圓形，再換維持分化液培養(yǎng)2d后，細胞體積變大，而且細胞質中開始出現(xiàn)可辨的小脂滴，此時，細胞分化已經(jīng)開始接近分化終末階段，細胞再無無分裂增殖的能力（圖3-D），將維持分化培養(yǎng)基換為完全培養(yǎng)基，每隔2d換液1次，培養(yǎng)10d后，脂滴體積變大，數(shù)量變多，且大部分脂滴融合，使細胞呈戒指狀（圖3-E），培養(yǎng)至第12d，油紅O染色，脂滴染成紅色（圖3-F）。圖3尾部前體脂肪細胞誘導分化及油紅O染色A：對照組誘導5d；B：對照組誘導10d；C：對照組誘導12d后油紅O染色；D：實驗組誘導5d；E：實驗組誘導10d；F：實驗組誘導12d后油紅O染色。Figure3DifferentiationoftailpreadipocytesandoilredOstainingA:controlgroupinduced5d;B:controlgroupinduced10d;C:controlgroupinduced12doilredOstaining;D:experimentalgroupinduced5d;E:experimentalgroupinduced10d;F:experimentalgroupinduced12doilredOstaining.2.3.3.2皮下前體脂肪細胞誘導分化及油紅O染色皮下前體脂肪細胞添加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3d后，空白對照組細胞形態(tài)為長梭形，再換維持分化培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2d后，細胞形態(tài)仍為長梭形（圖4-A），將維持分化培養(yǎng)基換為完全培養(yǎng)基且每隔2d換液，繼續(xù)培養(yǎng)10d后，細胞形態(tài)仍為長梭形，無可辨脂滴（圖4-B），培養(yǎng)至第12d，油紅O染色，呈陰性（圖4-C）；添加分化誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)3d后，實驗組細胞形態(tài)由長梭形變成橢圓形，換維持分化培養(yǎng)基培養(yǎng)2d后，細胞體積變大，而且細胞質中開始出現(xiàn)可辨的小脂滴，此時，細胞分化已經(jīng)開始接近分化終末階段，細胞再無無分裂增殖的能力ABCDEF

西北民族大學生命科學與工程學院2017級碩士研究生畢業(yè)論文17性（圖3-C）；添加分化誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)3d后，實驗組細胞形態(tài)由長梭形變成橢圓形，再換維持分化液培養(yǎng)2d后，細胞體積變大，而且細胞質中開始出現(xiàn)可辨的小脂滴，此時，細胞分化已經(jīng)開始接近分化終末階段，細胞再無無分裂增殖的能力（圖3-D），將維持分化培養(yǎng)基換為完全培養(yǎng)基，每隔2d換液1次，培養(yǎng)10d后，脂滴體積變大，數(shù)量變多，且大部分脂滴融合，使細胞呈戒指狀（圖3-E），培養(yǎng)至第12d，油紅O染色，脂滴染成紅色（圖3-F）。圖3尾部前體脂肪細胞誘導分化及油紅O染色A：對照組誘導5d；B：對照組誘導10d；C：對照組誘導12d后油紅O染色；D：實驗組誘導5d；E：實驗組誘導10d；F：實驗組誘導12d后油紅O染色。Figure3DifferentiationoftailpreadipocytesandoilredOstainingA:controlgroupinduced5d;B:controlgroupinduced10d;C:controlgroupinduced12doilredOstaining;D:experimentalgroupinduced5d;E:experimentalgroupinduced10d;F:experimentalgroupinduced12doilredOstaining.2.3.3.2皮下前體脂肪細胞誘導分化及油紅O染色皮下前體脂肪細胞添加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)3d后，空白對照組細胞形態(tài)為長梭形，再換維持分化培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)2d后，細胞形態(tài)仍為長梭形（圖4-A），將維持分化培養(yǎng)基換為完全培養(yǎng)基且每隔2d換液，繼續(xù)培養(yǎng)10d后，細胞形態(tài)仍為長梭形，無可辨脂滴（圖4-B），培養(yǎng)至第12d，油紅O染色，呈陰性（圖4-C）；添加分化誘導培養(yǎng)基培養(yǎng)3d后，實驗組細胞形態(tài)由長梭形變成橢圓形，換維持分化培養(yǎng)基培養(yǎng)2d后，細胞體積變大，而且細胞質中開始出現(xiàn)可辨的小脂滴，此時，細胞分化已經(jīng)開始接近分化終末階段，細胞再無無分裂增殖的能力ABCDEF

【參考文獻】：
期刊論文
[1]南陽黑豬與長白豬肉品質差異的機制研究[J]. 苗志國,魏攀鵬,柳東陽,張金洲,劉洋,朱建靜,郭麗萍.  江蘇農業(yè)科學. 2019(11)
[2]新西蘭兔肌內和皮下前體脂肪細胞原代培養(yǎng)與誘導分化的研究[J]. 陳濤,馬立霞,李志鑫,曾勇慶,陳偉.  中國畜牧雜志. 2019(06)
[3]FABP4與腫瘤上皮-間質轉化信號通路相關性的研究進展[J]. 張燕,夏敏.  醫(yī)學綜述. 2019(09)
[4]多不飽和脂肪酸對動物脂類代謝的調節(jié)作用與機制[J]. 王雪,閆素梅.  動物營養(yǎng)學報. 2019(06)
[5]豬肌源性前體脂肪細胞的分離培養(yǎng)和成脂誘導分化研究[J]. 張寧芳,成志敏,樂寶玉,秦本源,王媛媛,王鶴潔,高鵬飛,郭曉紅,李步高,曹果清.  畜牧獸醫(yī)學報. 2018(12)
[6]外源性脂肪酸對羅非魚脂肪細胞增殖與分化的影響[J]. 王雅文,喬芳,張美玲,賈永義,杜震宇.  水生生物學報. 2018(03)
[7]Wnt10b對山羊前體脂肪細胞分化相關基因表達的影響[J]. 林森,林亞秋,朱江江,許晴,趙越,池永東,王永.  畜牧獸醫(yī)學報. 2018(04)
[8]從江香豬肌內和皮下脂肪前體細胞分化過程中相關基因的表達[J]. 孫成娟,許厚強,趙佳福,陳偉,周迪,張青青.  農業(yè)生物技術學報. 2017(12)
[9]梅山豬前體脂肪細胞的分離培養(yǎng)及分化相關基因的表達規(guī)律研究[J]. 鄭月英,魏勝娟,董書圣,張萌萌,顏培實.  畜牧與獸醫(yī). 2017(06)
[10]大鼠前體脂肪細胞分離培養(yǎng)方法的改進[J]. 張孝珍,高廣慧,陳妍,張國華.  中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志. 2017(02)

博士論文
[1]中鏈脂肪酸誘導的棕色脂肪分化和增殖及其在肥胖控制中的作用[D]. 張永.中國人民解放軍醫(yī)學院 2017
[2]EPA及其前體ALA對草魚脂肪蓄積的調控作用及機制分析[D]. 雷彩霞.西北農林科技大學 2017
[3]BMP2對豬前體脂肪細胞分化的影響及其機制研究[D]. 柴孟龍.吉林農業(yè)大學 2016
[4]長鏈脂肪酸對乳鴿腸道發(fā)育及營養(yǎng)物質代謝調控的機理研究[D]. 謝鵬.浙江大學 2013
[5]誘生型熱休克蛋白70與TRAF6結合抑制LPS激活的NF-κB信號通路[D]. 陳華群.南京師范大學 2006

碩士論文
[1]CIDEC對奶牛乳腺上皮細胞中FASN表達的調控研究[D]. 呂賀.東北農業(yè)大學 2019
[2]肝臟ChREBP-β對糖脂代謝的調節(jié)作用及其機制研究[D]. 李昊.中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學 2019
[3]肝癌細胞中CCAAT增強子結合蛋白α通過組蛋白去乙酰化酶（HDACs）-miRNA上調的機制研究[D]. 胡曉曉.廣西醫(yī)科大學 2019
[4]利用CRISPR/Cas9技術編輯大麥乙酰輔酶A羧化酶（ACC1）基因[D]. 林萌萌.山東農業(yè)大學 2019
[5]腸道菌群與長鏈脂肪酸代謝關鍵酶表達的相關性研究[D]. 李冉.浙江工業(yè)大學 2018
[6]中鏈脂肪酸和α亞麻酸對APP/PS1轉基因癡呆模型小鼠去甲腎上腺素、多巴胺代謝以及腦功能的影響[D]. 李峰.中國人民解放軍醫(yī)學院 2018
[7]DNMT3A對豬肌內前體脂肪細胞增殖與分化的作用機制研究[D]. 王香明.西北農林科技大學 2018
[8]原花青素對豬前體脂肪細胞增殖與分化影響的研究[D]. 鄭月英.南京農業(yè)大學 2017
[9]酶法合成果膠中鏈脂肪酸酯及其在食品中的應用研究[D]. 熊增星.南昌大學 2017
[10]Marc-145懸浮培養(yǎng)細胞系的建立及培養(yǎng)研究[D]. 馬花.西北民族大學 2017



本文編號：3313201