為了證實(shí)綠原酸對(duì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)大菱鲆（Scophthalmus maximus）肝細(xì)胞損傷中保護(hù)作用,本試驗(yàn)首次克隆和分析了Nrf2和β-actin基因,檢測(cè)Nrf2在不同組織中的表達(dá)。同時(shí),在體外條件下,將金屬蛋白酶低濃度組（2μg/ml）、中濃度組（10μg/ml）和高濃度組（50μg/ml）作用于大菱鲆肝細(xì)胞2h、4h、8h和16h。通過(guò)酶活測(cè)定、RT-qPCR及流式細(xì)胞等技術(shù),首先通過(guò)測(cè)定SOD、CAT活力MDA含量及Nrf2和HO-1基因的相對(duì)表達(dá)水平,同時(shí)測(cè)定肝細(xì)胞活性氧（ROS）和凋亡情況,獲得了金屬蛋白酶致大菱鲆肝細(xì)胞氧化損傷的程度;進(jìn)一步研究了綠原酸（9μg/ml、18μg/ml和36μg/ml）對(duì)金屬蛋白酶脅迫肝細(xì)胞后上述的抗氧化指標(biāo)及基因的相對(duì)表達(dá)情況,明確了綠原酸對(duì)金屬蛋白酶致大菱鲆肝細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。大菱鲆Nrf2基因cDNA全長(zhǎng)2448bp,開(kāi)放閱讀框（ORF）為1983bp,編碼660個(gè)氨基酸,5′-非編碼區(qū)（UTR）為44bp,3′-UTR為421bp。大菱鲆Nrf2基因與高體鰤（Seriola dumerili）的同源性最高為83.5%,與雞（G... 

【文章來(lái)源】：河北科技師范學(xué)院河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【圖文】：

大菱鲆Nrf2基因5′RACE和3′RACEFig.2-1Nrf2genecloning,3′,5′rapidamplificationofcDNAendsM.Marker2000；1.3′端；2.5′端

第二章大菱鲆Nrf2基因的克隆及表達(dá)分析23660個(gè)氨基酸，5′-UTR為44bp，3′-UTR為421bp(圖2-2)；ProtParam軟件預(yù)測(cè)出該蛋白分子量為63.7kD，理論等電點(diǎn)為4.6；富含亮氨酸含量最高為10.0%，絲氨酸次之為9.7%，組氨酸含量最低為2.3%（圖2-3）；SignalP4.1Server程序預(yù)測(cè)該蛋白不含信號(hào)肽；NetNGlyc1.0軟件分析第145、166、267、307、350、374、594位為N-糖基化位點(diǎn)。圖2-2大菱鲆Nrf2基因cDNA核苷酸序列和推導(dǎo)的氨基酸序列Fig.2-2NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofNrf2cDNA陰影部分ATG、TAA和AATAAA分別代表起始密碼子、終止密碼子和加尾信號(hào)，下劃線代表CNC結(jié)構(gòu)域，下劃虛線代表DNA結(jié)合區(qū)域，方框中代表Nrf2與抑制蛋白Keap1

第二章大菱鲆Nrf2基因的克隆及表達(dá)分析24結(jié)合所必需的的DLG和ETGE基序。圖2-3大菱鲆Nrf2氨基酸組成Fig.2-3AminoacidcompositionofturbotNrf22.4.3大菱鲆Nrf2蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)及功能域分析使用PredictProtein軟件對(duì)大菱鲆肌動(dòng)蛋白原二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果表明，該蛋白有13.03%的α螺旋，1.52%的β-折疊和75.45%的環(huán)肽鏈；經(jīng)TMpred預(yù)測(cè)其有一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)(圖2-4)；用SMART(SimpleModμlarArchitectureResearchTool)軟件分析該蛋白含有一個(gè)543到606氨基酸的BRLZ域(亮氨酸拉鏈)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3286037