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綠原酸對金屬蛋白酶致大菱鲆肝細胞氧化損傷保護作用研究

發(fā)布時間:2021-07-15 16:13
  為了證實綠原酸對金屬蛋白酶誘導大菱鲆(Scophthalmus maximus)肝細胞損傷中保護作用,本試驗首次克隆和分析了Nrf2和β-actin基因,檢測Nrf2在不同組織中的表達。同時,在體外條件下,將金屬蛋白酶低濃度組(2μg/ml)、中濃度組(10μg/ml)和高濃度組(50μg/ml)作用于大菱鲆肝細胞2h、4h、8h和16h。通過酶活測定、RT-qPCR及流式細胞等技術,首先通過測定SOD、CAT活力MDA含量及Nrf2和HO-1基因的相對表達水平,同時測定肝細胞活性氧(ROS)和凋亡情況,獲得了金屬蛋白酶致大菱鲆肝細胞氧化損傷的程度;進一步研究了綠原酸(9μg/ml、18μg/ml和36μg/ml)對金屬蛋白酶脅迫肝細胞后上述的抗氧化指標及基因的相對表達情況,明確了綠原酸對金屬蛋白酶致大菱鲆肝細胞氧化損傷的保護作用。大菱鲆Nrf2基因cDNA全長2448bp,開放閱讀框(ORF)為1983bp,編碼660個氨基酸,5′-非編碼區(qū)(UTR)為44bp,3′-UTR為421bp。大菱鲆Nrf2基因與高體鰤(Seriola dumerili)的同源性最高為83.5%,與雞(G... 

【文章來源】:河北科技師范學院河北省

【文章頁數(shù)】:87 頁

【學位級別】:碩士

【圖文】:

綠原酸對金屬蛋白酶致大菱鲆肝細胞氧化損傷保護作用研究


大菱鲆Nrf2基因5′RACE和3′RACEFig.2-1Nrf2genecloning,3′,5′rapidamplificationofcDNAendsM.Marker2000;1.3′端;2.5′端

氨基酸序列,大菱鲆,核苷酸序列,氨基酸序列


第二章大菱鲆Nrf2基因的克隆及表達分析23660個氨基酸,5′-UTR為44bp,3′-UTR為421bp(圖2-2);ProtParam軟件預測出該蛋白分子量為63.7kD,理論等電點為4.6;富含亮氨酸含量最高為10.0%,絲氨酸次之為9.7%,組氨酸含量最低為2.3%(圖2-3);SignalP4.1Server程序預測該蛋白不含信號肽;NetNGlyc1.0軟件分析第145、166、267、307、350、374、594位為N-糖基化位點。圖2-2大菱鲆Nrf2基因cDNA核苷酸序列和推導的氨基酸序列Fig.2-2NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofNrf2cDNA陰影部分ATG、TAA和AATAAA分別代表起始密碼子、終止密碼子和加尾信號,下劃線代表CNC結構域,下劃虛線代表DNA結合區(qū)域,方框中代表Nrf2與抑制蛋白Keap1

大菱鲆,氨基酸,蛋白


第二章大菱鲆Nrf2基因的克隆及表達分析24結合所必需的的DLG和ETGE基序。圖2-3大菱鲆Nrf2氨基酸組成Fig.2-3AminoacidcompositionofturbotNrf22.4.3大菱鲆Nrf2蛋白二級結構及功能域分析使用PredictProtein軟件對大菱鲆肌動蛋白原二級結構預測結果表明,該蛋白有13.03%的α螺旋,1.52%的β-折疊和75.45%的環(huán)肽鏈;經(jīng)TMpred預測其有一個跨膜結構(圖2-4);用SMART(SimpleModμlarArchitectureResearchTool)軟件分析該蛋白含有一個543到606氨基酸的BRLZ域(亮氨酸拉鏈)。

【參考文獻】:
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本文編號:3286037

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