為了證實綠原酸對金屬蛋白酶誘導大菱鲆（Scophthalmus maximus）肝細胞損傷中保護作用,本試驗首次克隆和分析了Nrf2和β-actin基因,檢測Nrf2在不同組織中的表達。同時,在體外條件下,將金屬蛋白酶低濃度組（2μg/ml）、中濃度組（10μg/ml）和高濃度組（50μg/ml）作用于大菱鲆肝細胞2h、4h、8h和16h。通過酶活測定、RT-qPCR及流式細胞等技術,首先通過測定SOD、CAT活力MDA含量及Nrf2和HO-1基因的相對表達水平,同時測定肝細胞活性氧（ROS）和凋亡情況,獲得了金屬蛋白酶致大菱鲆肝細胞氧化損傷的程度;進一步研究了綠原酸（9μg/ml、18μg/ml和36μg/ml）對金屬蛋白酶脅迫肝細胞后上述的抗氧化指標及基因的相對表達情況,明確了綠原酸對金屬蛋白酶致大菱鲆肝細胞氧化損傷的保護作用。大菱鲆Nrf2基因cDNA全長2448bp,開放閱讀框（ORF）為1983bp,編碼660個氨基酸,5′-非編碼區(qū)（UTR）為44bp,3′-UTR為421bp。大菱鲆Nrf2基因與高體鰤（Seriola dumerili）的同源性最高為83.5%,與雞（G... 

【文章來源】：河北科技師范學院河北省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【圖文】：

大菱鲆Nrf2基因5′RACE和3′RACEFig.2-1Nrf2genecloning,3′,5′rapidamplificationofcDNAendsM.Marker2000；1.3′端；2.5′端

第二章大菱鲆Nrf2基因的克隆及表達分析23660個氨基酸，5′-UTR為44bp，3′-UTR為421bp(圖2-2)；ProtParam軟件預測出該蛋白分子量為63.7kD，理論等電點為4.6；富含亮氨酸含量最高為10.0%，絲氨酸次之為9.7%，組氨酸含量最低為2.3%（圖2-3）；SignalP4.1Server程序預測該蛋白不含信號肽；NetNGlyc1.0軟件分析第145、166、267、307、350、374、594位為N-糖基化位點。圖2-2大菱鲆Nrf2基因cDNA核苷酸序列和推導的氨基酸序列Fig.2-2NucleotideanddeducedaminoacidsequenceofNrf2cDNA陰影部分ATG、TAA和AATAAA分別代表起始密碼子、終止密碼子和加尾信號，下劃線代表CNC結構域，下劃虛線代表DNA結合區(qū)域，方框中代表Nrf2與抑制蛋白Keap1

第二章大菱鲆Nrf2基因的克隆及表達分析24結合所必需的的DLG和ETGE基序。圖2-3大菱鲆Nrf2氨基酸組成Fig.2-3AminoacidcompositionofturbotNrf22.4.3大菱鲆Nrf2蛋白二級結構及功能域分析使用PredictProtein軟件對大菱鲆肌動蛋白原二級結構預測結果表明，該蛋白有13.03%的α螺旋，1.52%的β-折疊和75.45%的環(huán)肽鏈；經(jīng)TMpred預測其有一個跨膜結構(圖2-4)；用SMART(SimpleModμlarArchitectureResearchTool)軟件分析該蛋白含有一個543到606氨基酸的BRLZ域(亮氨酸拉鏈)。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]綠原酸體外抗新型鴨呼腸孤病毒作用的研究[J]. 潘力,馬秀麗,黃中利,李桂明,唐亮,于可響,林樹乾.  農(nóng)業(yè)生物技術學報. 2020(04)
[2]綠原酸的生物學功能及在養(yǎng)殖業(yè)中應用研究[J]. 韋良開,李瑞,陳鳳鳴,文偉,黃興國.  飼料工業(yè). 2019(01)
[3]三種綠原酸提取物的抑菌和抗氧化效果比較[J]. 胡居吾,韓曉丹,付建平,王慧賓,李雄輝.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2017(11)
[4]草魚核因子E2相關因子2基因克隆分析及其對呼吸爆發(fā)的調(diào)控作用[J]. 馮燕,秦真東,代云佳,張玉蕾,劉小玲,周洋,蘭江風,趙麗娟,林蠡.  水產(chǎn)學報. 2018(02)
[5]綠原酸的生物活性及其作用機制[J]. 王文龍,文超越,郭秋平,段葉輝,李穎慧,何善平,李鳳娜.  動物營養(yǎng)學報. 2017(07)
[6]BDE-47對斑馬魚胚胎氧化應激與DNA損傷的毒性研究[J]. 趙雪松,任新,楊春維,尤宏,任百祥.  農(nóng)業(yè)環(huán)境科學學報. 2015(12)
[7]綠原酸對小鼠腹腔巨噬細胞免疫調(diào)節(jié)作用的研究[J]. 戴藝,徐明生,上官新晨,趙曼云.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2015(12)
[8]大菱鲆（Scophthalmus maximus）種業(yè)發(fā)展及相關前沿技術應用[J]. 馬愛軍,王新安.  海洋與湖沼. 2015(06)
[9]內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1基因T839G多態(tài)性與散發(fā)型先天性心臟病的關系[J]. 周凱,王宇,楊磊,秦玉明,莫緒明.  廣東醫(yī)學. 2014(14)
[10]綠原酸對草魚魚種生長、非特異性免疫和肉質(zhì)的影響[J]. 李乃順,冷向軍,李小勤,劉波,柴仙琦,李忠銘,鄭小淼.  水生生物學報. 2014(04)

博士論文
[1]黃芪甲苷對氨誘導的奶牛乳腺上皮細胞氧化應激和凋亡的緩解作用及其機制研究[D]. 王鳳鴿.吉林大學 2019
[2]綠原酸對地塞米松誘導小鼠MC3T3-E1成骨細胞凋亡的保護機制[D]. 韓丹丹.中國農(nóng)業(yè)大學 2018
[3]建鯉急性肝損傷模型的構建及幾種中草藥飼料添加劑對肝臟的保護作用[D]. 曹麗萍.揚州大學 2018
[4]喹烯酮致HepG2細胞毒性與凋亡的分子調(diào)控機理研究[D]. 張朝明.中國農(nóng)業(yè)大學 2014
[5]L-肉堿對H2O2誘導氧化應激的兩種魚細胞抗氧化功能影響及其機理研究[D]. 王秋舉.吉林農(nóng)業(yè)大學 2015
[6]油葵中綠原酸和咖啡酸的提取及對oxLDL誘導損傷內(nèi)皮細胞的保護作用[D]. 陳少洲.中國農(nóng)業(yè)大學 2003

碩士論文
[1]綠原酸及其包合物對肺損傷保護作用的研究[D]. 葛媛媛.安徽醫(yī)科大學 2019
[2]鰻弧菌金屬蛋白酶誘導大菱鲆頭腎細胞凋亡的作用機制研究[D]. 李杜文.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2019
[3]覆盆子提取物的抗氧化性及其對HepG2細胞氧化損傷的保護作用和機制的研究[D]. 李康.福建農(nóng)林大學 2019
[4]LPS/AC致雞肝細胞損傷及CAG保護機理研究[D]. 吳峰.南京農(nóng)業(yè)大學 2017
[5]過氧化氫誘導斜帶石斑魚肝細胞氧化損傷的轉(zhuǎn)錄組學研究[D]. 張潤蔚.集美大學 2017
[6]金銀花綠原酸的提取及其對熱應激肉�？寡趸δ艿挠绊懷芯縖D]. 符運斌.江西農(nóng)業(yè)大學 2016
[7]黃芩甙對四氯化碳致鯽魚肝損傷的保護作用[D]. 申玉金.南京農(nóng)業(yè)大學 2015
[8]EPC抗氧化應激通路Nrf2/ARE對鯉春病毒的響應[D]. 楊毅.華中農(nóng)業(yè)大學 2014
[9]Nrf2-ARE通路對異煙肼致小鼠肝臟損傷作用的研究[D]. 張中瑞.河北聯(lián)合大學 2014
[10]金絲桃苷對Nrf2-ARE途徑的影響及其對肝細胞氧化應激損傷的保護作用[D]. 張倩.西南大學 2014



本文編號：3286037