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牙鲆兩種免疫基因的克隆與表達分析

發(fā)布時間:2021-07-06 18:09
  精氨酸酶Ⅱ(arginaseⅡ,Arg-Ⅱ)是精氨酸酶家族中的一種,目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的精氨酸酶有Ⅰ和Ⅱ兩種亞型,兩者具有相似的結構特征和酶特性,它們主要參與了有機體的尿素循環(huán),其區(qū)別在于各自的亞細胞定位、組織分布和免疫反應不同。近期研究發(fā)現(xiàn)精氨酸酶Ⅱ在免疫反應中也發(fā)揮了重要作用。核受體超家族由甾體激素、甲狀腺激素、維甲酸等化學信號的受體及配體未明的多種孤兒受體組成,該家族成員的主要功能是作為配體激活的轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控代謝、發(fā)育、生殖相關基因的表達。肝X受體(liver X receptor,LXR)屬于核受體超家族成員,不僅在脂質(zhì)代謝中發(fā)揮重要的作用,而且在調(diào)控巨噬細胞的炎癥反應和免疫應答中發(fā)揮著重要作用。ArgⅡ是巨噬細胞中LXRs的靶基因,LXRs上調(diào)精氨酸酶Ⅱ,ArgⅡ可以與iNOS競爭性催化底物精氨酸,減少一氧化氮的合成,發(fā)揮抗炎效果。牙鲆(Paralichthys olivaceus)俗稱牙片、比目魚、偏口等,是中國重要的海水養(yǎng)殖魚類之一。因其具有極好的營養(yǎng)價值與經(jīng)濟價值而受到大家的喜愛。但是,由于過度捕撈使野生牙鲆數(shù)量銳減,同時工廠化養(yǎng)殖近親繁殖嚴重,使得種質(zhì)資源嚴重退化。而傳染... 

【文章來源】:上海海洋大學上海市

【文章頁數(shù)】:65 頁

【學位級別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻綜述
    1 核受體超家族概況
        1.1 核受體超家族結構及其分類
        1.2 肝受體X(LXRs)
    2 精氨酸酶概況
        2.1 精氨酸酶結構及其分類
        2.2 精氨酸酶Ⅱ
    3 硬骨魚中肝受體X(LXRs)及其靶基因精氨酸酶Ⅱ的研究進展
        3.1 魚類中LXRs的研究
        3.2 魚類中精氨酸酶Ⅱ的研究
    4 肝X受體(LXRs)和精氨酸酶Ⅱ的功能研究
        4.1 肝 X 受體(LXRs)在免疫中的作用
        4.2 肝受體X LXRs在生理和病理反應中的作用
        4.3 精氨酸酶在免疫中的作用
        4.4 精氨酸酶在生理和病理反應中的作用
第二章 牙鲆LXR基因的克隆、鑒定與表達分析
    1 實驗材料
        1.1 實驗用魚
        1.2 主要試劑和儀器
    2 實驗方法
        2.1 遲緩愛德華氏菌感染健康牙鲆實驗
        2.2 牙鲆各組織采樣
        2.3 牙鲆吞噬細胞和淋巴細胞的體外培養(yǎng)
        2.4 遲緩愛德華氏菌體外感染吞噬細胞和淋巴細胞實驗
        2.5 健康牙鲆各組織rna的提取和cdna的合成
        2.6 牙鲆吞噬細胞和淋巴細胞的rna的提取
        2.7 c DNA第一鏈的合成
        2.8 LXR基因cDNA克隆驗證
            2.8.1 中間序列炎癥RCP引物和RACE引物合成
            2.8.2 LXR中間序列驗證
            2.8.3 PCR產(chǎn)物純化
            2.8.4 目的片段的連接與轉(zhuǎn)化
            2.8.5 陽性克隆的檢測和測序
            2.8.6 3‘RACE-ready cDNA和 5‘RACE-ready cDNA的制備
            2.8.7 牙鲆 LXR 基因的 c DNA 5'和 3'末端的快速擴增(RACE)
        2.9 序列和進化分析
        2.10 實時熒光定量PCR
    3 結果與分析
        3.1 牙鲆LXR基因的克隆
        3.2 牙鲆LXR基因的序列比對和同源性分析
        3.3 實時熒光定量PCR檢測結果
    4.討論
第三章 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆、鑒定與表達分析
    1 實驗材料
        1.1 實驗用魚
        1.2 總RNA的提取以及cDNA的合成
        1.3 總DNA的提取
        1.4 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆
        1.5 序列分析和系統(tǒng)進化樹分析
        1.6 精氨酸酶Ⅱ基因的組織表達
        1.7 精氨酸酶Ⅱ基因在遲緩愛德華氏菌感染后的表達
        1.8 數(shù)據(jù)分析
    2 結果與分析
        2.1 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的克隆分析
        2.2 牙鲆精氨酸酶Ⅱ基因的序列比對和同源性分析
        2.3 實時熒光定量PCR檢測結果分析
    3.討論
總結與展望
參考文獻
碩士階段發(fā)表的論文
課題資助項目
致謝


【參考文獻】:
期刊論文
[1]牙鲆精氨酸酶基因片段的克隆及序列分析[J]. 劉華,施婷婷,施志儀.  廣東農(nóng)業(yè)科學. 2016(12)
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[3]香魚精氨酸酶Ⅱ基因的cDNA克隆及其表達與鰻弧菌感染的相關性[J]. 丁斐斐,李長紅,陳炯,張琪.  生物技術通報. 2016(02)
[4]精氨酸酶Ⅰ在HIV感染者外周淺表淋巴結中表達的研究[J]. 張乃春,黃磊,王松山,鄧建寧,盧祥嬋,吳峰耀,趙敏.  中華實驗和臨床病毒學雜志. 2015 (01)
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[6]精氨酸對動物的營養(yǎng)生理及免疫作用[J]. 孫紅暖,楊海明,王志躍,張得才,張芬芬,楊芷.  動物營養(yǎng)學報. 2014(01)
[7]飼糧添加不同水平L-精氨酸對泌乳母豬生產(chǎn)性能、血清氨基酸濃度和免疫生化指標的影響[J]. 楊慧,林登峰,林伯全,王恬,張力.  動物營養(yǎng)學報. 2012(11)
[8]飼糧中添加不同水平L-精氨酸對妊娠母豬繁殖性能及血液生化指標的影響[J]. 楊慧,林登峰,王恬,林伯全,李賀來.  動物營養(yǎng)學報. 2012(10)
[9]L-精氨酸和乳酸菌對早期斷奶仔豬生長性能、血液生化指標和小腸黏膜形態(tài)的影響[J]. 楊慧,林伯全,張力,王恬,杜海江.  福建農(nóng)林大學學報(自然科學版). 2012(04)
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碩士論文
[1]UT-B基因敲除小鼠腦中精氨酸酶Ⅰ的表達變化及炎癥反應的發(fā)生[D]. 王琦.重慶醫(yī)科大學 2015
[2]精氨酸酶Ⅰ和誘導型一氧化氮合成酶在肝細胞癌中的表達及其相關性研究[D]. 陶璇.福建醫(yī)科大學 2012
[3]精氨酸對肉鴨生長性能、免疫機能、胴體品質(zhì)和血液脂質(zhì)的影響[D]. 方勇軍.武漢工業(yè)學院 2009



本文編號:3268725

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