為進(jìn)一步掌握細(xì)粒棘球蚴病在新疆阿勒泰、昌吉、伊犁和喀什四個(gè)地區(qū)（州）牛羊中的流行狀況,明確流行株的遺傳差異性,本研究通過PCR擴(kuò)增細(xì)粒棘球絳蟲線粒體基因組cox1基因片段和nad5基因片段,然后對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序和基因多態(tài)性分析,旨在獲取相應(yīng)遺傳學(xué)差異信息。對新疆阿勒泰、昌吉、伊犁和喀什四地區(qū)（州）的部分牛羊屠宰場進(jìn)行細(xì)粒棘球蚴病流行病學(xué)調(diào)查,篩查了352頭牛和5202只綿羊,共采集4頭牛和116只綿羊的疑似感染包囊樣本,其中1頭牛和35只綿羊可分離原頭蚴,喀什綿羊的感染強(qiáng)度最高,最多1只綿羊采集的包囊樣本可達(dá)到32個(gè)包囊。用長度為1649bp的線粒體基因組cox1基因片段對來自3頭牛和96只綿羊的156個(gè)包囊樣本獲得PCR擴(kuò)增。對目的片段進(jìn)行聚類分析發(fā)現(xiàn),這些包囊樣本均為細(xì)粒棘球絳蟲G1基因型（Echinococcus granulosus G1）,共有53個(gè)不同的單倍型,同源性為99.7%～100%;發(fā)現(xiàn)57個(gè)位點(diǎn)核苷酸發(fā)生堿基置換,約占分析位點(diǎn)總數(shù)的3.46%,序列間差異值在0%～0.3%之間;分離株核苷酸序列所有突變中只存在轉(zhuǎn)換和顛換,沒有缺失或插入,并且轉(zhuǎn)換數(shù)明顯多于顛換數(shù),... 

【文章來源】：塔里木大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

羊肝細(xì)粒棘球蚴（

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章細(xì)粒棘球蚴病形態(tài)學(xué)觀察11囊最少，1頭牛和1只綿羊的2個(gè)包囊可分離到原頭（表2-4）。表2-4不同地區(qū)棘球蚴包囊分離原頭蚴情況Table2-4Separationofprotoscolexfromhydatidcystsindifferentareas地區(qū)可育囊（宿主）可育囊（包囊）阿勒泰22昌吉59伊犁33喀什25203總計(jì)36217有原頭蚴的包囊即是可育囊，無原頭蚴的包囊則是不育囊。一個(gè)可育囊囊液中有無數(shù)的原頭蚴，若將囊液在離心管內(nèi)靜置幾分鐘后，管底可見沉淀物，即棘球沙。棘球蚴顯微鏡觀察呈橢圓形，有向內(nèi)翻轉(zhuǎn)收縮的頭節(jié)，頂突和4個(gè)吸盤內(nèi)陷（圖2-2）。圖2-2細(xì)粒棘球蚴原頭蚴（10×10）Figure2-2ProtoscolexofEchinococcusgranulosus（10×10）2.3討論通過對新疆阿勒泰、昌吉、伊犁和喀什等4個(gè)地區(qū)（州）屠宰場屠宰牛和綿羊細(xì)粒棘球蚴感染情況調(diào)查，發(fā)現(xiàn)綿羊存在棘球蚴病流行狀況，牛被棘球蚴病感染很少見。本調(diào)查總共對5202只綿羊和352頭牛進(jìn)行檢查，其中116只綿羊和4頭牛感染棘球蚴玻結(jié)合宰后檢查結(jié)果，發(fā)現(xiàn)存在細(xì)粒棘球蚴輕度感染或在感染初期的綿羊都不會(huì)表現(xiàn)出明顯癥狀，感染嚴(yán)重后，病例會(huì)出現(xiàn)營養(yǎng)不良、被毛逆立脫落、呼吸困難伴咳嗽等癥狀，若病羊的肝臟體積異常增大會(huì)眼觀右側(cè)腹部膨出。屠宰后可在肝臟、肺臟檢查到包蟲病包囊。包囊數(shù)量和直徑與綿羊年齡無明顯相關(guān)性，可能與綿羊營養(yǎng)狀況有關(guān)。另外，牛不是細(xì)粒棘球蚴病最適宜的宿主，因此很少感染，感染后一般也不會(huì)表現(xiàn)臨床癥狀。

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第3章細(xì)粒棘球蚴cox1基因序列分析163.2結(jié)果3.2.1cox1基因擴(kuò)增電泳結(jié)果PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳，發(fā)現(xiàn)共96只羊和3頭牛的156個(gè)包囊樣本利用凝膠成像系統(tǒng)能觀察到目的條帶（1800bp處）（圖3-1）。圖3-1cox1基因PCR擴(kuò)增圖片F(xiàn)igure3-1PCRamplificationpictureofcox1gene3.2.2cox1基因測序及序列比對結(jié)果將手工拼接的序列經(jīng)過BLAST比對，新疆昌吉、阿勒泰、伊犁和喀什4個(gè)地區(qū)（州）所收集的96只綿羊和3頭牛的156個(gè)包囊樣本cox1基因測序結(jié)果均為G1基因型（表3-2）。表3-2不同地區(qū)的cox1基因擴(kuò)增情況Table3-2cox1geneamplificationindifferentregions地區(qū)屠宰數(shù)cox1基因擴(kuò)增宿主數(shù)cox1基因擴(kuò)增包囊數(shù)阿勒泰736510昌吉6232337伊犁14382122喀什27565087總計(jì)5554991563.2.3細(xì)粒棘球絳蟲cox1基因單倍型特征利用Dnasp分析，本試驗(yàn)中PCR擴(kuò)增成功的156個(gè)包囊樣本的cox1基因序列可歸為53個(gè)單倍型，將它們命名為Hap1至Hap53，并將它們連同其它基因型和其它蟲種一起構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖3-2）。如圖所示，所有的單倍型和G1基因型參考序列在同一樹枝上，跟G3基因型為姊妹關(guān)系，跟其他基因型和棘球絳蟲不在一個(gè)樹枝上。


本文編號：3261762