發(fā)布時(shí)間：2021-06-20 13:33

　　本研究采用RNA干擾技術(shù),對(duì)大麥條紋病菌（Pyrenophora graminea）中的基因Pgmiox進(jìn)行功能研究。從野生株QWC中克隆該基因,構(gòu)建其RNA干擾載體,經(jīng)過PEG介導(dǎo)遺傳轉(zhuǎn)化,以潮霉素抗性篩選獲得54株轉(zhuǎn)化子,隨機(jī)選擇6個(gè)突變菌株進(jìn)行功能分析,明確Pgmiox基因在大麥條紋病菌中致病性的功能機(jī)制,為該病原菌的基因調(diào)控機(jī)理和致病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)論如下所示:1.本試驗(yàn)克隆到大麥條紋病菌基因Pgmiox,并對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果得出:該基因沒有內(nèi)含子,基因全長(zhǎng)981bp,Pgmiox基因編碼326個(gè)氨基酸,將基因提交注冊(cè)到GenBank,序列號(hào)為MK302448;軟件分析該基因編碼蛋白的等電點(diǎn)約為4.93,得出該蛋白為酸性蛋白;預(yù)測(cè)其二級(jí)結(jié)構(gòu),以α-螺旋（Alpha helix,Hh）為主占到46.93%;蛋白結(jié)構(gòu)域分析得出該基因有一個(gè)Pfam域miox結(jié)構(gòu)域;構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹得出,大麥條紋病菌（P.graminea）和小麥褐斑長(zhǎng)蠕孢霉菌（Pyrenophora tritici-repentis）的肌醇加氧酶基因蛋白序列聚合在一起。2.運(yùn)用干擾片段Pgmiox1、片... 

【文章來源】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡觀察大麥條紋病菌的分生孢子（何智宏，2014）

Pgmiox基因全長(zhǎng)DNA（1）和cDNA（2）擴(kuò)增結(jié)果

大麥條紋病菌致病性候選基因Pgmiox功能研究19圖2-2Pgmiox基因的蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)圖Figure2-2PredictionofproteinsecondarystructureofPgmioxgene圖2-3Pgmiox基因的蛋白質(zhì)跨膜區(qū)預(yù)測(cè)圖Figure2-3PredictionmapofproteintransmembraneregionofPgmioxgene用ProtScale軟件進(jìn)行親疏水性分析，如圖2-4所示，0以上的峰值表示蛋白為疏水性，以下的峰值表示蛋白為親水性，同時(shí)結(jié)合脂肪指數(shù)（Aliphaticindex）和親水性平均值（GRAVY）推斷得出，Pgmiox編碼的蛋白為親水性蛋白。NetPhos3.1Server軟件預(yù)測(cè)分析磷酸化位點(diǎn)得出；Pgmiox基因編碼蛋白存在絡(luò)氨酸（Tyrosine，Tyr），蘇氨酸（Threonine，Thr）和絲氨酸（Serine，Ser）磷酸化位點(diǎn)，具體的位點(diǎn)如圖2-5所示。SMART工具進(jìn)行蛋白結(jié)構(gòu)域分析得出該基因有一個(gè)Pfam域miox結(jié)構(gòu)域（Myo-inositoloxygenase；78AA~326AA）（圖2-6）。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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[3]大麥條紋病菌種群遺傳結(jié)構(gòu)分析及抗性種質(zhì)鑒定[D]. 吳寬然.浙江師范大學(xué) 2013
[4]大麥條紋病病原生物學(xué)及藥劑防治研究[D]. 楊瑞.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
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本文編號(hào)：3239292