本文關(guān)鍵詞：免疫組化方法示蹤PRV感染肛門括約肌的神經(jīng)傳導(dǎo)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：偽狂犬病病毒是畜牧生產(chǎn)上一個(gè)重要的病毒,嚴(yán)重危害著養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展,同時(shí)作為神經(jīng)示蹤研究中的一種新興的模式病毒,也被科學(xué)家們廣泛關(guān)注和研究。本研究測(cè)定了實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的偽狂犬病毒株SA215-T的病毒滴度,并用該毒株感染SD大鼠,建立了SA215-T人工感染大鼠的病理模型。感染56小時(shí)后,大鼠出現(xiàn)發(fā)熱,奇癢和共濟(jì)失調(diào)等癥狀,115小時(shí)左右開始死亡,解剖病變主要為肺輕度水腫,腦組織彌漫性出血。PRV SA215-T感染大鼠后平均存活時(shí)間120小時(shí),比PRV Bartha-K61株感染大鼠的平均存活時(shí)間114小時(shí)稍長(zhǎng),PRV SA215-T適合用于建立PRV人工感染大鼠的病理模型。本研究分別用PRV SA215-T與Bartha-K61人工感染大鼠,觀察記錄了大鼠感染偽狂犬病毒后的臨床癥狀及存活情況,在不同時(shí)間解剖大鼠并采集心肝脾肺腎腦等組織器官,通過(guò)PCR檢測(cè)PRV抗原在大鼠體內(nèi)各組織器官的分布規(guī)律。結(jié)果表明,大鼠感染PRV之后的48小時(shí)內(nèi),各組織器官內(nèi)未檢測(cè)到PRV抗原；感染56小時(shí)左右,肺臟PRV抗原呈陽(yáng)性分布；隨著時(shí)間的推移,組織器官中PRV抗原分布越來(lái)越廣,最終幾乎遍布于所有組織器官。本研究建立了間接免疫組化檢測(cè)PRV抗原的方法并優(yōu)化了免疫組化條件。用建立的免疫組化方法可以便捷地檢測(cè)到大鼠組織器官中的PRV抗原。該方法快速簡(jiǎn)單,敏感性高,特異性強(qiáng),染色結(jié)果便于觀察,能用于臨床檢測(cè)。本研究用建立的間接免疫組化方法檢測(cè)并定位了人工感染大鼠后PRVSA215-T在脊髓中的位置,示蹤了PRV感染大鼠肛門括約肌的神經(jīng)傳導(dǎo)通路：感染后48小時(shí)在腰髓4-5節(jié)段初次檢測(cè)到PRV；感染56小時(shí)左右,胸髓11-12節(jié)段檢測(cè)到PRV；感染66小時(shí)左右在頸髓6-7節(jié)段檢測(cè)到PRV；感染72小時(shí)在大腦檢測(cè)到PRV�；蛉笔Ш蟮膫慰袢《揪哂心嫔窠�(jīng)傳導(dǎo)特性,用免疫組化方法可以特異性地追蹤其在神經(jīng)傳導(dǎo)中的路徑。本研究通過(guò)建立的大鼠病理模型,探明了PRV感染大鼠肛門括約肌的神經(jīng)傳導(dǎo)通路,為進(jìn)一步研究先天性肛門閉鎖癥的發(fā)病機(jī)制及發(fā)展規(guī)律奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：偽狂犬病病毒 先天性肛門閉鎖 神經(jīng)傳導(dǎo)與示蹤 免疫組化 抗原分布
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.28
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 縮略詞表7-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-24
• 1.1 偽狂犬病病毒的分類、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能10-12
• 1.1.1 偽狂犬病病毒的發(fā)現(xiàn)與命名10-12
• 1.2 偽狂犬病病毒的生物學(xué)特性12-19
• 1.2.1 偽狂犬病病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)12-13
• 1.2.2 偽狂犬病病毒的基因組特征13-14
• 1.2.3 偽狂犬病毒的蛋白14-17
• 1.2.4 PRV的復(fù)制及其與細(xì)胞之間的相互作用17-19
• 1.3 偽狂犬病毒與神經(jīng)傳導(dǎo)19-21
• 1.4 先天性肛門閉鎖21-22
• 1.5 免疫組化概述及應(yīng)用22-23
• 1.6 研究的目的和意義23-24
• 第二章 PRV人工感染大鼠病理模型的建立24-41
• 2.1 引言24-25
• 2.2 材料、試劑與儀器25-27
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、毒株及細(xì)胞25
• 2.2.2 主要材料及試劑25-26
• 2.2.3 主要儀器26-27
• 2.3 方法27-32
• 2.3.1 PRV SA215-T的TCID_(50)測(cè)定27
• 2.3.2 PRV SA215-T的LD_(50)測(cè)定27
• 2.3.3 大鼠病理模型試驗(yàn)病毒攻毒劑量的確定27-28
• 2.3.4 PRV SA215-T和Bartha-K61人工感染大鼠試驗(yàn)及病料采集28
• 2.3.5 病料中PRV抗原的PCR方法鑒定28-29
• 2.3.6 免疫組化檢測(cè)PRV方法的建立29-31
• 2.3.7 免疫組化結(jié)果與PCR結(jié)果比較31-32
• 2.4 結(jié)果32-38
• 2.4.1 PRV SA215-T的TCID_(50)測(cè)定32
• 2.4.2 PRV SA215-T的LD_(50)測(cè)定32-33
• 2.4.3 PRV人工感染SD大鼠劑量確定及感染后臨床癥狀33
• 2.4.4 大鼠內(nèi)臟組織器官的PCR檢測(cè)結(jié)果及統(tǒng)計(jì)33-35
• 2.4.5 免疫組化條件的優(yōu)化35-37
• 2.4.6 免疫組化結(jié)果與PCR結(jié)果的比較37-38
• 2.5 討論38-41
• 第三章 免疫組化方法示蹤PRV感染大鼠肛門括約肌的神經(jīng)傳導(dǎo)實(shí)驗(yàn)41-48
• 3.1 引言41-42
• 3.2 材料、試劑與儀器42-43
• 3.2.1 材料42
• 3.2.2 主要試劑42
• 3.2.3 主要儀器42-43
• 3.3 方法43
• 3.4 結(jié)果43-46
• 3.5 分析討論46-48
• 全文結(jié)論48-49
• 參考文獻(xiàn)49-57
• 致謝57-58

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  本文關(guān)鍵詞：免疫組化方法示蹤PRV感染肛門括約肌的神經(jīng)傳導(dǎo)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：323640