植物病毒病害對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成非常嚴(yán)重的危害。植物感染病毒后,植株發(fā)育不良而矮小、葉片出現(xiàn)萎縮,甚至造成腐爛,導(dǎo)致作物品質(zhì)下降、產(chǎn)量降低。據(jù)統(tǒng)計,全世界每年因病毒病對作物造成的損失就高達(dá)百億美元。而植物病毒與宿主間蛋白的互作是決定病毒能否入侵宿主,并在宿主中有效復(fù)制和傳播的關(guān)鍵。植物病毒與宿主間互作的研究,將為我們制定有效的防控病毒策略提供重要依據(jù)。水稻作為一種重要的糧食作物其遭受的病毒病害比較嚴(yán)重,其中纖細(xì)病毒屬的水稻條紋病毒（Rice stripe virus,RSV）,可借助介體灰飛虱通過卵傳的方式進行持久傳播,嚴(yán)重危害水稻的產(chǎn)量和品質(zhì)。本研究首先以RSV編碼的NS3為誘餌,篩選水稻cDNA文庫,發(fā)現(xiàn)NS3能夠與水稻生長素通路抑制子兼共受體Aux/IAA家族蛋白OsIAA25互作。在此基礎(chǔ)上,我們構(gòu)建了NS3、OsIAA25單基因和NS3/OsIAA25雙基因的RNAi載體,轉(zhuǎn)化水稻,獲得了抗RSV的轉(zhuǎn)基因水稻新材料。主要研究結(jié)果如下:（1）NS3與水稻Aux/IAA家族蛋白OsIAA25互作以NS3為誘餌蛋白釣取水稻的cDNA文庫,發(fā)現(xiàn)OsIAA25能夠與NS3互作,進而我們又分別... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

NS3為誘餌蛋白篩選水稻互作蛋白Fig.3-1RiceinteractionproteinswerescreenedwithNS3asbaitprotein表3-1水稻中與NS3互作的蛋白

干擾水稻條紋病毒NS3與水稻OsIAA25互作培育抗病毒水稻36圖3-2NS3病毒蛋白與OsIAA25蛋白互作驗證（A）酵母雙雜驗證NS3與OsIAA25互作；（B）體外免疫共沉淀實驗Pull-down驗證NS3與OsIAA25互作；（C）雙分子熒光互補實驗BIFC驗證NS3與OsIAA25互作；Fig.3-2InteractionanalysisofNS3virusproteinandOsIAA25protein(A)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyY2H,(B)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbypull-down,(C)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyBiFC.3.3NS3與OsIAAs家族蛋白的互作檢測OsIAA25是水稻生長素通路抑制子兼共受體Aux/IAA家族成員之一，Aux/IAA基因家族有31個成員，為了檢測NS3是否與Aux/IAA家族其他成員存在互作現(xiàn)象，我們又構(gòu)建了NS3和Aux/IAA基因家族其他成員的酵母雙雜載體，將其轉(zhuǎn)入酵母細(xì)胞后，分別在DDO（SD/-Leu/-Trp）培養(yǎng)板上和QDO（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）培養(yǎng)板上點樣驗證互作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有共表達(dá)了NS3與OsIAA25的酵母細(xì)胞能在四缺培養(yǎng)基QDO（SD-Ade/His/Trp/Leu/x-α-gal/AbA）正常生長且能變藍(lán)色（圖3-3）；表明NS3只與OsIAA25存在互作，與Aux/IAA基因家族其他成員不互作。圖3-3NS3與OsIAAs蛋白互作篩選Fig.3-3InteractionscreeningofNS3andOsIAAsproteins

干擾水稻條紋病毒NS3與水稻OsIAA25互作培育抗病毒水稻36圖3-2NS3病毒蛋白與OsIAA25蛋白互作驗證（A）酵母雙雜驗證NS3與OsIAA25互作；（B）體外免疫共沉淀實驗Pull-down驗證NS3與OsIAA25互作；（C）雙分子熒光互補實驗BIFC驗證NS3與OsIAA25互作；Fig.3-2InteractionanalysisofNS3virusproteinandOsIAA25protein(A)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyY2H,(B)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbypull-down,(C)TheinteractionbetweenNS3andOsIAA25wasverifiedbyBiFC.3.3NS3與OsIAAs家族蛋白的互作檢測OsIAA25是水稻生長素通路抑制子兼共受體Aux/IAA家族成員之一，Aux/IAA基因家族有31個成員，為了檢測NS3是否與Aux/IAA家族其他成員存在互作現(xiàn)象，我們又構(gòu)建了NS3和Aux/IAA基因家族其他成員的酵母雙雜載體，將其轉(zhuǎn)入酵母細(xì)胞后，分別在DDO（SD/-Leu/-Trp）培養(yǎng)板上和QDO（SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade）培養(yǎng)板上點樣驗證互作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有共表達(dá)了NS3與OsIAA25的酵母細(xì)胞能在四缺培養(yǎng)基QDO（SD-Ade/His/Trp/Leu/x-α-gal/AbA）正常生長且能變藍(lán)色（圖3-3）；表明NS3只與OsIAA25存在互作，與Aux/IAA基因家族其他成員不互作。圖3-3NS3與OsIAAs蛋白互作篩選Fig.3-3InteractionscreeningofNS3andOsIAAsproteins

【參考文獻】：
期刊論文
[1]酵母雙雜交篩選灰飛虱體內(nèi)水稻黑條矮縮病毒p10的互作蛋白[J]. 徐秋芳,陳晴晴,張金鳳,李碩,倪海平,周益軍.  中國水稻科學(xué). 2013(06)
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[3]中國水稻條紋葉枯病研究進展[J]. 周益軍,李碩,程兆榜,周彤,范永堅.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報. 2012(05)
[4]酵母雙雜交系統(tǒng)篩選與水稻黑條矮縮病毒P6互作的水稻蛋白[J]. 肖冬來,鄧慧穎,謝荔巖,吳祖建,謝聯(lián)輝.  熱帶作物學(xué)報. 2010(03)
[5]水稻條紋葉枯病的研究進展[J]. 白雪亮,王金菊,周維,陶漢林,朱曄榮,王勇.  生物學(xué)通報. 2007(08)
[6]不同抗性品種與水稻條紋葉枯病的關(guān)系[J]. 高東明,秦文勝,李愛民,陳紅方.  中國水稻科學(xué). 1993(01)

博士論文
[1]與傳播水稻條紋病毒相關(guān)的灰飛虱蛋白質(zhì)鑒定與功能研究[D]. 劉文文.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013

碩士論文
[1]水稻條紋病毒與水稻蛋白質(zhì)互作研究[D]. 陳兵華.貴州大學(xué) 2015



本文編號：3232437