遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)已經(jīng)成為生物學(xué)研究的重要手段之一,玉米高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立對(duì)于玉米在生物學(xué)方面的研究具有重要的意義。玉米高效遺傳轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建可以從優(yōu)化培養(yǎng)體系、構(gòu)建高效遺傳轉(zhuǎn)化載體、篩選高效受體材料等方面入手。本研究對(duì)實(shí)驗(yàn)室收集的64個(gè)玉米自交系進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)過程中取材以及侵染階段的操作步驟均參考本實(shí)驗(yàn)室最常用的實(shí)驗(yàn)方法;實(shí)驗(yàn)過程中使用的培養(yǎng)體系是本實(shí)驗(yàn)室之前篩選出的適用于大多數(shù)玉米自交系的培養(yǎng)體系。本研究在對(duì)所有玉米自交系進(jìn)行完整的遺傳轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)以后,對(duì)轉(zhuǎn)化效率和獲得綠苗所用培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析,篩選出了113、130和166（具體材料名稱見補(bǔ)充表1）三種可用于玉米高效遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建的受體材料,其轉(zhuǎn)化效率分別為11.99%、8.78%和9.09%,對(duì)照材料B104和Z31的轉(zhuǎn)化效率分別是13.16%和10.39%,三種材料的轉(zhuǎn)化效率與對(duì)照材料沒有明顯差距;三種材料獲得綠苗所用組織培養(yǎng)時(shí)間分別是51天、48天和45天,自交系B104和Z31的培養(yǎng)時(shí)間分別是55天和52天,三種材料的組織培養(yǎng)時(shí)間均較對(duì)照材料有所縮短。在本研究中,為了找出遺傳轉(zhuǎn)化過程中主要性狀與轉(zhuǎn)化... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

-1對(duì)照材料與供試材料的轉(zhuǎn)化效率

象。根據(jù)轉(zhuǎn)化效率統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看，不同基因型材料的轉(zhuǎn)化效率差距十分明顯。其中自交系113的轉(zhuǎn)化效率為11.99%，低于B104的轉(zhuǎn)化效率，高于Z31的轉(zhuǎn)化效率，其有很大概率可用作玉米遺傳轉(zhuǎn)化的高效受體材料。為從實(shí)驗(yàn)材料中篩選出更多的適合用于玉米遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料，將19份自交系的轉(zhuǎn)化效率與B104的轉(zhuǎn)化效率進(jìn)行差異顯著性分析如表3-1，其中沒有明顯差異的自交系共有5種，分別是111、113、130、135、166，轉(zhuǎn)化效率分別是6.06%、11.99%、8.78%、8.33%、9.09%，這5種材料將被進(jìn)一步分析其用作高效玉米遺傳轉(zhuǎn)化受體材料的能力。圖3-1-2鑒定陽(yáng)性苗的部分Bar試紙條使用情況Fig.3-1-2SituationofpartialofBarstripsforidentifyingpositiveseedlings3.1.2組織培養(yǎng)時(shí)間的統(tǒng)計(jì)分析相對(duì)于不經(jīng)過愈傷組織的玉米遺傳轉(zhuǎn)化體系，用幼胚作為受體誘導(dǎo)愈傷組織形成的體系試驗(yàn)周期長(zhǎng)，因此選用組織培養(yǎng)時(shí)間短的材料是縮短實(shí)驗(yàn)周期的一種有效方法。本研究對(duì)所有材料從侵染過程到獲得再生綠苗（以第一株長(zhǎng)度為3cm的健壯綠苗為準(zhǔn)）所用的培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，結(jié)果如表3-2，不同基因型材料的培養(yǎng)時(shí)間從42天到64天不等，可見基因型對(duì)于材料獲得再生綠苗的培養(yǎng)時(shí)間具有明顯的影響。對(duì)于轉(zhuǎn)化效率較高的5種材料，除111和135自交系外，其余自交系獲得綠苗所用培養(yǎng)時(shí)間均比B104和Z31的培養(yǎng)時(shí)間短，其中以166的培養(yǎng)時(shí)間最短，與B104和Z31相比分別縮短了10天和7天。從轉(zhuǎn)化效率和獲得綠苗所用培養(yǎng)時(shí)間兩個(gè)因素來看，本實(shí)驗(yàn)篩選到的可用于高效玉米遺傳轉(zhuǎn)化的受體材料有3個(gè)，分別是113、130和166，其中以113的轉(zhuǎn)化效率最高，166的組織培養(yǎng)時(shí)間最短。

玉米高效遺傳轉(zhuǎn)化受體材料的篩選30為了驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)篩選到的三種材料分別在海南地區(qū)和在我國(guó)北方地區(qū)種植是否會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)化效率產(chǎn)生影響，我們將B104、Z31和113、130、166五種材料分別在海南和山東泰安種植后的轉(zhuǎn)化效率進(jìn)行了顯著性分析和相關(guān)性分析，結(jié)果見表3-3，我們發(fā)現(xiàn)這五種材料在海南地區(qū)和泰安地區(qū)種植后的轉(zhuǎn)化效率之間均不存在顯著差異，所以本表中相關(guān)性分析的R值不具有參考價(jià)值，但從顯著性分析可以看出這五種材料在海南地區(qū)和泰安地區(qū)種植后的轉(zhuǎn)化效率差異并不明顯。3.2遺傳轉(zhuǎn)化過程中的主要性狀對(duì)材料轉(zhuǎn)化效率的影響以材料的轉(zhuǎn)化效率作為受體材料轉(zhuǎn)化能力的主要參考依據(jù)保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，但要測(cè)得所有實(shí)驗(yàn)材料的轉(zhuǎn)化效率卻會(huì)耗費(fèi)大量的人力、物力和時(shí)間，為了能夠降低篩選高效玉米遺傳轉(zhuǎn)化受體材料的成本投入，本實(shí)驗(yàn)將所有材料的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化能力、穩(wěn)定轉(zhuǎn)化能力、初級(jí)愈傷組織誘導(dǎo)能力、胚性愈傷組織誘導(dǎo)能力和綠苗分化能力五個(gè)性狀進(jìn)行了分析，并評(píng)估了其與材料轉(zhuǎn)化效率之間的關(guān)系。3.2.1瞬時(shí)轉(zhuǎn)化能力對(duì)轉(zhuǎn)化效率的影響圖3-2對(duì)照材料與供試材料的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化率3DAI進(jìn)行GUS染色，對(duì)照材料與供試材料的瞬時(shí)轉(zhuǎn)化率測(cè)定結(jié)果統(tǒng)計(jì)。誤差線表示的是三個(gè)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3231165