燕麥淀粉含量測(cè)定及顆粒結(jié)合型淀粉合成酶基因(GBSS Ⅰ)片段克隆
本文關(guān)鍵詞:燕麥淀粉含量測(cè)定及顆粒結(jié)合型淀粉合成酶基因(GBSS Ⅰ)片段克隆,,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
【摘要】:燕麥?zhǔn)呛瘫究蒲帑湆?Avena L.)草本植物,為世界八大糧食作物之一,具有耐寒,抗旱,耐土地脊薄,耐適度鹽堿,不與小麥稻谷爭(zhēng)奪耕地,及農(nóng)業(yè)風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)低的優(yōu)點(diǎn)。是一種特殊的多用途作物。發(fā)展燕麥種植加工對(duì)于促進(jìn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。淀粉是燕麥中主要被人類(lèi)用作食物的部分,有直鏈淀粉和支鏈淀粉之分,前人研究表明GBSSI基因在決定淀粉糯性方面具有重要作用。淀粉種類(lèi)與作物性能和應(yīng)用前景直接相關(guān),且其含量的高低在評(píng)價(jià)燕麥品質(zhì)和選種、育種時(shí)具有實(shí)際意義。本研究對(duì)特選的燕麥材料進(jìn)行淀粉含量測(cè)定及其可能的主要功能基因的基因片段克隆分析,以期獲得燕麥淀粉總體含量情況、直鏈與支鏈淀粉各占比重情況,討論供試材料的對(duì)生活和生產(chǎn)指導(dǎo)價(jià)值;利用獲得的GBSSI基因片段為燕麥系統(tǒng)發(fā)育情況提供新的證據(jù);獲得與淀粉相關(guān)特定功能基因片段及其與淀粉含量間的相互關(guān)系。主要研究結(jié)果如下:1)用雙波長(zhǎng)法對(duì)來(lái)自世界各地的107個(gè)居群(25個(gè)物種)燕麥材料進(jìn)行支鏈、直連淀粉含量的測(cè)定,結(jié)果表明所測(cè)材料之間淀粉含量差異顯著。所測(cè)107個(gè)居群中,供試燕麥物種間進(jìn)行的頻率分布統(tǒng)計(jì)顯示,燕麥各個(gè)物種直鏈淀粉含量在5%~10%高頻率分布,支鏈淀粉含量在45%-50%高頻率分布。本次供選材料中沒(méi)有直鏈淀粉含量在15%~20%之間的燕麥物種。根據(jù)谷物胚乳淀粉一般情況,直鏈淀粉含量接近零,即低于1%的為糯性,所試驗(yàn)材料中編號(hào)CN25869的A. agadiriana為糯性燕麥材料,直鏈淀粉含量為0.7%,據(jù)此判斷燕麥種質(zhì)資源中存在自然全糯質(zhì)類(lèi)型;其他直鏈淀粉含量較低的居群有編號(hào)CN25863、CN21388和CN22633,試驗(yàn)編號(hào)分別為Aaga7AB,Acla31Cp,Ahir46As。總體看來(lái),燕麥屬中直鏈淀粉含量較低的物種有4個(gè),分別是A. clauda4.88%、A. hirtula6%、A. eriantha6.1%和A. agadiriana6.28%。不同倍性的燕麥物種中,Cp基因組二倍體直鏈淀粉含量平均值最低,而直鏈淀粉含量低于1%的A. agadiriana編號(hào)CN25869的居群屬于AB基因組四倍體。所有供試的六倍體栽培燕麥(A. sativa)的直鏈淀粉含量普遍高于8%。2)對(duì)供試27個(gè)物種52個(gè)居群進(jìn)行GBSSI基因克隆,共得到165條序列。通過(guò)比較后去除同一材料的相同序列,最終將能代表供試材料的的82條GBSSI基因序列進(jìn)行分析。序列比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)燕麥屬GBSSI基因序列在不同物種間差異較大。居群內(nèi)的差異在不同物種中表現(xiàn)不同:燕麥屬A基因組、C基因組二倍體多個(gè)居群都檢測(cè)到了多種變異類(lèi)型。3)燕麥屬C基因組二倍體GBSS Ⅰ基因序列進(jìn)化差異較A基因組明顯,同種基因組間序列差異顯著。另外,C基因組中A. clauda的其中一種拷貝類(lèi)型和A基因組序列類(lèi)型的關(guān)系較近,推測(cè)該物種基因型可能處于A、C基因組間的位置,在基因組進(jìn)化中具有特殊意義。四倍體物種中,A. barbata與A. hirtula親緣關(guān)系較近。另外,四倍體物種A. murphy A基因組與二倍體物種A. hispanica親緣關(guān)系較近,而六倍體物種A.fatua和兩組二倍體物種均顯示了較近的親緣關(guān)系,一組是A. hirtula和A. lusitanica,另一組是A. hirtula和A. atlantica。4)分析所測(cè)序的基因序列片段與直鏈淀粉含量關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn),二倍體A基因組物種直鏈淀粉含量高于二倍體C基因組物種,進(jìn)而發(fā)現(xiàn)二倍體外顯子片段第30 bp處有較為規(guī)律的單堿基差異,但由于燕麥二倍體A、C基因組間差異本就很大,所以依舊無(wú)法確定GBSS Ⅰ基因直鏈淀粉含量和本次克隆片段有所關(guān)聯(lián)。
【關(guān)鍵詞】:燕麥(Avena) 淀粉 GBSSI基因 系統(tǒng)發(fā)育
【學(xué)位授予單位】:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類(lèi)號(hào)】:S512.6
【目錄】:
- 摘要4-6
- Abstract6-10
- 1 文獻(xiàn)綜述10-18
- 1.1 燕麥淀粉的研究進(jìn)展11-15
- 1.1.1 淀粉糯性的研究進(jìn)展11-13
- 1.1.2 淀粉的合成途徑13-14
- 1.1.3 淀粉的含量測(cè)定方法研究進(jìn)展14-15
- 1.2 GBSSⅠ基因的研究現(xiàn)狀15-16
- 1.3 燕麥屬物種系統(tǒng)進(jìn)化研究16-18
- 1.3.1 物種進(jìn)化16-17
- 1.3.2 基因組進(jìn)化17
- 1.3.3 燕麥屬研究中存在的問(wèn)題17-18
- 1.4 研究目的18
- 2 材料與方法18-27
- 2.1 實(shí)驗(yàn)材料18-24
- 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-26
- 2.2.1 燕麥中淀粉含量測(cè)定24-25
- 2.2.2 GBSS Ⅰ基因克隆25-26
- 2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理26-27
- 2.3.1 淀粉含量數(shù)據(jù)處理26
- 2.3.2 DNA序列分析及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建26-27
- 3 結(jié)果與分析27-41
- 3.1 燕麥種質(zhì)的淀粉含量測(cè)定27-32
- 3.1.1 不同燕麥材料的淀粉含量分析27-28
- 3.1.2 燕麥屬不同物種淀粉含量分析28-32
- 3.1.3 栽培燕麥的淀粉含量評(píng)價(jià)32
- 3.2 燕麥種質(zhì)的GBSSⅠ序列分析32-41
- 3.2.1 GBSSⅠ基因序列分析32-34
- 3.2.2 二倍體基因組的進(jìn)化34-38
- 3.2.3 四倍體AB基因組的進(jìn)化38-40
- 3.2.4 多倍體A基因組的起源40-41
- 3.3 克隆GBSSⅠ基因與供試燕麥淀粉含量的關(guān)系41
- 4 討論41-46
- 4.1 燕麥淀粉含量41-42
- 4.2 燕麥屬系統(tǒng)的進(jìn)化42-44
- 4.3 克隆GBSSⅠ基因與供試燕麥直鏈淀粉含量的關(guān)系44-46
- 參考文獻(xiàn)46-53
- 致謝53
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本文編號(hào):322665
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