生長素在番茄果實發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用,調(diào)控果實發(fā)育的各個階段,如坐果、膨大和成熟等。生長素酰胺水解酶（IAA-Leucine Resistant,ILR）可以將螯合態(tài)生長素催化水解得到具有活性的游離態(tài)生長素（植物體內(nèi)95%IAA以結(jié)合態(tài)的形式存在）,生長素在番茄果實發(fā)育過程中的調(diào)控機制已有一定的理論基礎(chǔ),但生長素酰胺水解酶（ILR）對此過程的調(diào)控作用尚不清楚。本研究從生長素水解的角度出發(fā),意在闡明生長素的水解在番茄果實膨大過程中的作用。主要的研究結(jié)果為:1、通過qRT-PCR技術(shù)分析ILR家族基因在番茄果實不同組織中的特異性發(fā)現(xiàn),SlILR5、6、7在種子中表達水平最高,并且在快速膨大期達到峰值。2、利用VIGS技術(shù)手段,分別沉默SlILR5、6、7,結(jié)果顯示,SlILR5沉默后,果實顯著小于對照組,qRT-PCR結(jié)果顯示,沉默SlILR5對其余SlILRs基因的表達無影響,說明SlILR5參與調(diào)控果實膨大過程。并構(gòu)建了pTRV-SlTGA2.3沉默載體利用農(nóng)桿菌GV3101侵染花柄遠(yuǎn)軸端獲得沉默果實,結(jié)果顯示,SlTGA2.3沉默后,其對果實大小的影響與沉默SlILR5對果實大... 

【文章來源】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 生長素與果實發(fā)育
        1.1.1 果實中生長素的生物合成與失活
        1.1.2 果實中生長素的運輸機制
        1.1.3 生長素對果實膨大的影響
    1.2 生長素酰胺水解酶的研究進展
        1.2.1 擬南芥中的生長素酰胺水解酶
        1.2.2 西瓜中的生長素酰胺水解酶
        1.2.3 桃中的生長素酰胺水解酶
    1.3 轉(zhuǎn)錄因子TGA
    1.4 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 番茄果實不同組織的RNA提取
        2.1.1 材料
        2.1.2 提取RNA及反轉(zhuǎn)錄
        2.1.3 實時熒光定量
            2.1.3.1 試驗儀器及試劑
            2.1.3.2 試驗材料及引物
            2.1.3.3 反應(yīng)體系及反應(yīng)程序
    2.2 病毒誘導(dǎo)基因沉默(VIGS)
        2.2.1 pTRV-SlILRs沉默果實的獲得
        2.2.2 pTRV-SlTGA2.3 沉默果實的獲得
            2.2.2.1 載體及菌液
            2.2.2.2 載體質(zhì)粒提取及雙酶切驗證
            2.2.2.3 重組質(zhì)粒pTRV-SlTGA2.3 的構(gòu)建
            2.2.2.4 目的SlTGA2.3 質(zhì)粒DNA與載體TRV2 雙酶切
            2.2.2.5 雙酶切產(chǎn)物的連接
            2.2.2.6 重組質(zhì)粒的大腸桿菌轉(zhuǎn)化
            2.2.2.7 重組質(zhì)粒TRV-SlTGA2.3 大腸桿菌菌液PCR驗證
            2.2.2.8 重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
            2.2.2.9 重組質(zhì)粒TRV-SlTGA2.3 農(nóng)桿菌菌液PCR驗證
            2.2.2.10 病毒誘導(dǎo)基因SlTGA2.3 沉默
    2.3 VIGS沉默效率檢測
    2.4 果實大小、單果鮮重及IAA含量測定
        2.4.1 果實大小測定方法
        2.4.2 果實單果鮮重的測量
        2.4.3 液相-質(zhì)譜法測活性生長素IAA和細(xì)胞分裂素CTK含量
    2.5 酵母單雜交
        2.5.1 Y1H-gold酵母菌轉(zhuǎn)化
        2.5.2 AbA抑制濃度的篩選
        2.5.3 SlILR5與SlTGA2.3 的互作驗證
3 結(jié)果與分析
    3.1 ILR家族基因在番茄果實不同組織中的表達分析
    3.2 pTR-SlILR5、6、7 沉默果實的沉默效率檢測
    3.3 沉默果實大小及單果重的測量
        3.3.1 沉默果實橫縱徑的測量
        3.3.2 沉默果實單果鮮重的測量
    3.4 沉默基因SlILR5 對其他SlILRs表達的影響
    3.5 沉默SlILR5 對果實內(nèi)生長素含量的影響
    3.6 與生長素酰胺水解酶SlILR5 具共表達模式的轉(zhuǎn)錄因子SlTGA
    3.7 石蠟切片觀察果皮細(xì)胞變化
    3.8 沉默SlILR5 對果實內(nèi)細(xì)胞分裂素含量的影響
    3.9 酵母單雜驗證SlTGA2.3在SlILR5 的上游起作用
        3.9.1 啟動子序列分析
        3.9.2 Aureobasidin A(AbA)濃度的篩選
        3.9.3 SlILR5 與轉(zhuǎn)錄因子SlTGA2.3 的結(jié)合驗證
    3.10 病毒誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子SlTGA2.3 沉默
        3.10.1 pTRV-SlTGA2.3 沉默果實的沉默效率檢測
        3.10.2 沉默SlTGA2.3 對大小的影響
        3.10.3 沉默SlTGA2.3 對基因SlILR5 表達的影響
4 討論與結(jié)論
    4.1 番茄SlILRs生物基因組學(xué)的功能分析
    4.2 轉(zhuǎn)錄因子SlTGA2.3 對果實大小的影響與SlILR5 結(jié)果一致
    4.3 SlILR5 參與了生長素IAA調(diào)控的番茄果實膨大
    4.4 SlILR5 通過調(diào)控細(xì)胞分裂影響果實最終大小
    4.5 SlTGA2.3 促進SlILR5 參與調(diào)控番茄果實膨大過程
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]SlPIN1,SlPIN3與SlPIN4在番茄花柄脫落中的作用[D]. 韓新奇.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[2]番茄生長素酰胺水解酶ILR在花柄脫落過程中作用研究[D]. 付欣.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017



本文編號：3204641