豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）是單股負(fù)鏈DNA病毒,直徑約17 nm,是現(xiàn)階段最小的動(dòng)物病毒。由PCV2病毒引起的斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（Post-weaning Multisystemic Wasting Syndrome,PMWS）發(fā)病迅速,流傳廣泛,病豬難以治愈且死亡率高,對(duì)國(guó)內(nèi)乃至全世界的養(yǎng)豬業(yè)危害極大。PCV2常常與某些病毒混合感染,如豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬細(xì)小病毒、弓形體、附紅細(xì)胞體等,可促進(jìn)相關(guān)疾病的發(fā)作。PMWS典型癥狀包括進(jìn)行性消瘦,呼吸困難,厭食,精神不振,毛發(fā)蓬亂,黃疸等。肉眼檢查腸系膜及腹股溝淋巴異常腫大和肺部灰褐色炎癥病變最常見(jiàn),其它一些器官如肝、脾、胰、胃、小腸和結(jié)腸也常見(jiàn)腫大及壞死病變。由于PCV2嚴(yán)重破壞豬的免疫系統(tǒng),引起免疫力低下,一旦豬體內(nèi)存在其他病毒或細(xì)菌、原蟲(chóng)感染,就會(huì)暴發(fā)流行,目前該病已廣泛流行于美國(guó)、法國(guó)、中國(guó)、韓國(guó)等國(guó)家,給世界各國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成的損失巨大。目前,PCV2的診斷主要依靠免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)和分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)。但是這些檢測(cè)方法普遍存在一定的局限性,靈敏度低、成本高、操作過(guò)程復(fù)雜等因... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 豬流行性病毒簡(jiǎn)介
    1.2 四種主要流行病毒的癥狀和危害
        1.2.1 豬瘟病毒
        1.2.2 豬偽狂犬病病毒
        1.2.3 豬繁殖與呼吸綜合癥病毒
        1.2.4 豬圓環(huán)病毒病
    1.3 豬圓環(huán)病毒2型背景知識(shí)
    1.4 豬圓環(huán)病毒2型的傳播
    1.5 常規(guī)分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)
        1.5.1 PCR檢測(cè)技術(shù)
        1.5.2 ELISA檢測(cè)技術(shù)
        1.5.3 基因芯片
    1.6 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法發(fā)展及展望
    1.7 研究的目的和意義
    1.8 創(chuàng)新點(diǎn)
    1.9 技術(shù)路線
第二章 豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)LAMP現(xiàn)場(chǎng)可視化快速檢測(cè)試劑盒主要原材料的研究
    2.1 材料
        2.1.1 材料來(lái)源
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 PCV2靶基因序列的選擇
        2.1.5 引物設(shè)計(jì)
    2.2 方法
        2.2.1 豬圓環(huán)病毒2型DNA的提取
        2.2.2 PCR反應(yīng)體系
        2.2.3 PCR產(chǎn)物的克隆與測(cè)序
            2.2.3.1 膠回收
            2.2.3.2 膠回收產(chǎn)物檢測(cè)
            2.2.3.3 連接
            2.2.3.4 轉(zhuǎn)化
            2.2.3.5 PCR方法鑒定陽(yáng)性克隆
            2.2.3.6 陽(yáng)性克隆菌液擴(kuò)大培養(yǎng)
            2.2.3.7 測(cè)序
        2.2.4 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品陽(yáng)性質(zhì)粒模板的制備
        2.2.5 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒樣品模板的制備
        2.2.6 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒的組裝和使用
        2.2.7 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照的制備
        2.2.8 空白對(duì)照制備
        2.2.9 Bst酶和LAMP反應(yīng)緩沖液的比對(duì)研究
        2.2.10 Bst酶和LAMP反應(yīng)緩沖液質(zhì)量鑒定研究
        2.2.11 試劑盒陰性參考品和陽(yáng)性參考品的制備與試驗(yàn)
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 PCV2的PCR產(chǎn)物檢測(cè)
        2.3.2 PCR產(chǎn)物的克隆與測(cè)序檢測(cè)
            2.3.2.1 PCR膠回收產(chǎn)物
            2.3.2.2 克隆產(chǎn)物的檢測(cè)
            2.3.2.3 測(cè)序結(jié)果
        2.3.3 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒的組裝和使用
        2.3.4 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照的制備
        2.3.5 Bst酶和LAMP反應(yīng)緩沖液的比對(duì)研究
        2.3.6 Bst酶和LAMP反應(yīng)緩沖液質(zhì)量鑒定研究
        2.3.7 試劑盒陽(yáng)性參考品研究
        2.3.8 試劑盒陰性參考品研究
    2.4 討論
第三章 豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)LAMP現(xiàn)場(chǎng)可視化快速檢測(cè)試劑盒工藝及反應(yīng)體系的研究
    3.1 材料
        3.1.1 材料來(lái)源
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品陽(yáng)性質(zhì)粒模板的制備
        3.2.2 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒樣品模板的制備
        3.2.3 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒的組裝和使用
        3.2.4 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照的制備
        3.2.5 空白對(duì)照制備
        3.2.6 樣本儲(chǔ)存時(shí)間研究
        3.2.7 樣本凍融次數(shù)研究
        3.2.8 樣本運(yùn)輸儲(chǔ)存時(shí)間研究
        3.2.9 試劑用量研究
        3.2.10 溫度影響研究
        3.2.11 陽(yáng)性對(duì)照分裝環(huán)境研究
        3.2.12 確定試劑盒臨界值研究
        3.2.13 豬圓環(huán)病毒2型LAMP檢測(cè)試劑盒的特異性研究
        3.2.14 生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)控點(diǎn)的設(shè)置
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒的組裝和使用
        3.3.2 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照的制備
        3.3.3 樣本儲(chǔ)存時(shí)間研究
        3.3.4 樣本凍融次數(shù)研究
        3.3.5 樣本運(yùn)輸儲(chǔ)存時(shí)間研究
        3.3.6 試劑用量研究
        3.3.7 溫度影響研究
        3.3.8 陽(yáng)性對(duì)照分裝環(huán)境研究
        3.3.9 確定試劑盒臨界值研究
        3.3.10 試劑盒特異性實(shí)驗(yàn)
        3.3.11 生產(chǎn)過(guò)程質(zhì)控點(diǎn)的設(shè)置
    3.4 討論
第四章 豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)LAMP現(xiàn)場(chǎng)可視化快速檢測(cè)試劑盒分析性能研究
    4.1 材料
        4.1.1 材料來(lái)源
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 主要儀器
    4.2 方法
        4.2.1 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品陽(yáng)性質(zhì)粒模板的制備
        4.2.2 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒樣品模板的制備
        4.2.3 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒的組裝和使用
        4.2.4 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照的制備
        4.2.5 空白對(duì)照制備
        4.2.6 靈敏度評(píng)價(jià)
        4.2.7 特異性評(píng)估
        4.2.8 準(zhǔn)確性評(píng)估
        4.2.9 樣本基質(zhì)的干擾實(shí)驗(yàn)
        4.2.10 藥物的干擾試驗(yàn)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 PCV2 LAMP檢測(cè)試劑盒的組裝和使用
        4.3.2 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照的制備
        4.3.3 靈敏度評(píng)價(jià)
        4.3.4 特異性評(píng)估
        4.3.5 準(zhǔn)確性評(píng)估
        4.3.6 樣本基質(zhì)的干擾實(shí)驗(yàn)
        4.3.7 藥物的干擾實(shí)驗(yàn)
    4.4 討論
第五章 全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]豬圓環(huán)病毒2型Cap基因多拷貝質(zhì)粒的構(gòu)建及病毒樣顆粒的表達(dá)[J]. 尹曼曼,劉漢平,樓覺(jué)人.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2019(09)
[2]CSFV、PRRSV和PCV2多重PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J]. 蘭世捷,陳亮,苗艷,馮萬(wàn)宇,王志強(qiáng),朱慶賀,金振華,李陽(yáng),徐馨,李丹.  中國(guó)豬業(yè). 2019(06)
[3]豬偽狂犬病病毒檢測(cè)基因芯片的構(gòu)建[J]. 吳鳳筍,呂玉金,劉玲玲,劉勝利,張中華,柳增善.  畜牧與獸醫(yī). 2018(10)
[4]GST pull-down結(jié)合質(zhì)譜篩選豬圓環(huán)病毒2型ORF4潛在互作蛋白[J]. 林翠,唐雯,顧金燕,金玉蘭,董偉仁,廖敏,周繼勇.  生物工程學(xué)報(bào). 2019(01)
[5]豬圓環(huán)病毒3型LAMP檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J]. 姜辰龍,嚴(yán)秀文,張日騰,李勇,姜平,白娟.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2018(06)
[6]豬圓環(huán)病毒2型天津及周邊地區(qū)分離株的遺傳演化分析[J]. 王利麗,鄭麗,路超,任衛(wèi)科,張莉,李富強(qiáng),鄢明華.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2018(05)
[7]豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）協(xié)同感染細(xì)菌性疾病的分析研究[J]. 李明波,庫(kù)旭鋼,趙海忠,宋忠旭,孫華,梅書(shū)棋.  中國(guó)畜牧獸醫(yī). 2018(03)
[8]表達(dá)豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的重組豬瘟兔化弱毒疫苗株的構(gòu)建與鑒定[J]. 張玲楷,李永鋒,謝利豹,孫元,王曉,仇華吉.  生物工程學(xué)報(bào). 2018(02)
[9]豬圓環(huán)病毒Ⅱ型可視化LAMP檢測(cè)方法的應(yīng)用[J]. 許宗麗,黃溢泓,李志源,周師師,覃艷然,邱潔,盤(pán)美妮,劉針伶.  養(yǎng)殖與飼料. 2017(11)
[10]基因芯片技術(shù)及其在畜牧獸醫(yī)業(yè)中的應(yīng)用概述[J]. 陸曼,李博巖,王旭平,柳誠(chéng)剛,譚斌,楊汝才.  生物學(xué)教學(xué). 2017(09)

碩士論文
[1]種豬群豬圓環(huán)病毒病的凈化技術(shù)研究[D]. 管亮.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[2]同時(shí)檢測(cè)豬瘟和北美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒的復(fù)合熒光定量RT-PCR方法的建立[D]. 成丹.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008



本文編號(hào)：3181222