黃萎�。╒erticillium20wilt）是影響棉花產(chǎn)量和品質(zhì)的最嚴(yán)重病害之一。一般在3～5片真葉期開始顯癥,現(xiàn)蕾后田間大量發(fā)病,可導(dǎo)致整個植株萎蔫或枯死。主要由大麗輪枝菌和黑白輪枝菌引起。通過克隆抗病相關(guān)基因,解析棉花黃萎病抗性機制,進行抗病分子改良,進一步選育棉花抗病品種是防治黃萎病最環(huán)保、有效的方法。谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因是生物體中的多基因家族,通過催化谷胱甘肽與胞質(zhì)內(nèi)有害物質(zhì)結(jié)合,而后將該復(fù)合物排出體外達到解毒細(xì)胞的目的。前期研究結(jié)果初步證實陸地棉谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因參與了棉花對黃萎病的抗性反應(yīng)。但對海島棉谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因家族鑒定及關(guān)鍵直系同源基因在海陸棉種中的抗病功能還需進一步研究。本研究通過對海島棉GST基因家族成員進行鑒定,包括基因數(shù)目鑒定、染色體定位、基因結(jié)構(gòu)分析,解析海島棉GST基因家族遺傳進化機制。對海島棉D(zhuǎn)亞組09號染色體上的GbGST1206930基因進行沉默,初步明確該基因的抗黃萎病功能。并對陸地棉中該基因的直系同源基因GhGST1510進行黃萎病抗性研究,從表型和基因表達等方面解析GhGST1510抗黃萎病分子機制,為棉花抗病遺傳改良提供基因資源。主要... 

【文章來源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
本文所用縮略詞及中文對照
1 引言
    1.1 棉花黃萎病
    1.2 棉花黃萎病致病機制
    1.3 棉花抗黃萎病的研究進展
    1.4 谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因研究進展
    1.5 病毒誘導(dǎo)的基因沉默技術(shù)
    1.6 酵母雙雜交
    1.7 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 載體與菌株
        2.1.3 生化試劑
    2.2 試驗方法
        2.2.1 基因組數(shù)據(jù)來源
        2.2.2 生物信息學(xué)分析
        2.2.3 植物材料的種植
        2.2.4 RNA提取及RT-PCR檢測
        2.2.5 pTR V2-GbGST16930載體的構(gòu)建
        2.2.6 VIGS沉默GbGST16930基因
        2.2.7 35s:GhGST1510載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化擬南芥
        2.2.8 超表達擬南芥純系的獲得及抗性鑒定
        2.2.9 GhGST1510蛋白的原核表達
        2.2.10 GhGST1510蛋白的亞細(xì)胞定位
        2.2.11 酵母雙雜交
3 實驗結(jié)果
    3.1 棉花GST基因家族的生物信息學(xué)分析
        3.1.1 海島棉GST基因的鑒定
        3.1.2 海島棉GST基因的染色體定位分析
        3.1.3 海島棉GST基因的串聯(lián)重復(fù)分析
        3.1.4 海島棉GST基因結(jié)構(gòu)分析
        3.1.5 Tau類GST基因的系統(tǒng)進化分析
        3.1.6 海島棉GST基因家族Circle mapping分析
    3.2 沉默GbGST16930基因?qū)γ藁S萎病抗性的鑒定
    3.3 GhGST1510基因生物信息學(xué)分析
    3.4 超表達載體的構(gòu)建及純系的獲得
    3.5 超表達擬南芥抗性鑒定
    3.6 GhGST1510原核表達結(jié)果與分析
    3.7 GhGST1510亞細(xì)胞定位結(jié)果與分析
    3.8 GhGST1510蛋白酵母雙雜交結(jié)果與分析
        3.8.1 誘餌載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化
        3.8.2 自激活及毒性檢測
        3.8.3 GhGST1510互作蛋白篩選
    3.9 互作基因的KEGG和GO分析
4 討論
    4.1 海島棉D(zhuǎn)09號染色體tau類cluster的遺傳進化
    4.2 陸地棉中GhGST1510基因的抗病功能與分子機制
    4.3 棉花體內(nèi)抗黃萎病代謝途徑分析
5 結(jié)論
參考文獻
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【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3177871