葡萄在我國眾多經濟作物中占據至關重要的地位,其栽培面積和產量均位于世界前列,但我國部分種植地區(qū)不利的生態(tài)環(huán)境給葡萄生產帶來了很多問題,其中土壤鹽漬化是主要的限制因素。選育耐鹽葡萄砧木進行嫁接栽培,是解決這一問題的有效途徑之一。與常規(guī)育種相比,通過基因工程培育耐鹽葡萄砧木具有省時、高效的特點,因此,篩選、鑒定耐鹽基因并研究其功能和作用機理具有重要意義。促分裂原活化蛋白激酶（MAPKs）途徑在植物抵御多種不良環(huán)境過程中發(fā)揮著重要作用。我們前期研究中發(fā)現(xiàn)了一個高度響應鹽脅迫基因VvMAPKK3,進一步研究發(fā)現(xiàn)VvMAPK9與其互作且受到鹽脅迫誘導,但其響應鹽脅迫的分子機制目前還不清楚。因此,本研究以本團隊選育的耐鹽性較強的葡萄砧木A35（‘左山一’×SO4）為試材,克隆得到VvMAPK9基因,并對該基因的序列特征、表達模式和抗鹽功能進行了分析。主要研究結果如下:（1）VvMAPK9基因的生物信息學分析。該基因的開放閱讀框全長為1128 bp,編碼含有375個氨基酸殘基的多肽,預測分子量為42.615 kDa,等電點為6.24。亞細胞定位分析發(fā)現(xiàn)VvMAPK9定位于細胞核和細胞質。系統(tǒng)進化分析... 

【文章來源】：山東農業(yè)大學山東省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

葡萄砧木VvMAPK9基因的PCR擴增電泳圖

black.ThephosphorylatedTEYmotifandtheCDdomainaremarkedbyredframe.Theabbreviationofthespeciesname:Vv,Vitisvinifera;At,Arabidopsisthaliana;Bn,Brassicanapus;Zm,Zeamays;Os,oryzasativa.3.2VvMAPK9在葡萄砧木中的表達特征分析3.2.1VvMAPK9基因在葡萄砧木不同組織中的表達特征分析為了研究VvMAPK9在葡萄中的轉錄方式，我們利用qRT-PCR技術檢測了VvMAPK9在葡萄砧木A35各組織中的表達水平。結果表明，VvMAPK9在不同器官中的表達存在差異，主要在葡萄幼葉、成熟葉和根中表達，在葉柄和莖中的表達量相對較低（圖3-3）。圖3-3VvMAPK9在葡萄不同組織中的表達Fig.3-3TheexpressionofVvMAPK9invariousorgansofgrape3.2.2多種非生物脅迫下VvMAPK9基因表達模式分析大量研究發(fā)現(xiàn)植物MAPK參與多種脅迫抗性，為了研究VvMAPK9基因能否響應非生物脅迫，我們檢測了不同非生物脅迫處理對VvMAPK9基因轉錄水平的影響，結果發(fā)現(xiàn)四種非生物脅迫均可使VvMAPK9基因的轉錄表達出現(xiàn)不同程度的上調（圖3-4）。鹽處理葡萄砧木VvMAPK9的表達量顯著上調，轉錄表達水平在12h達到頂峰，是未處理的7.32倍；干旱處理后VvMAPK9的表達量呈先上升后下降再上升的趨勢，并在6h達到高峰，是未處理的4.84倍；高溫處理后VvMAPK9的表達量在4h達到高峰，是未處理的1.66倍，其余時間均為本底水平；低溫處理后VvMAPK9的表達量上調較小，最

葡萄VvMAPK9在鹽脅迫響應中的功能研究30高上調1.36倍。上述結果說明VvMAPK9基因的轉錄表達受到多種非生物脅迫的調節(jié)，因此，推測其參與多種非生物脅迫。另外VvMAPK9基因還受ABA誘導。圖3-4不同非生物脅迫和ABA處理下葡萄砧木VvMAPK9的表達模式Fig.3-4ExpressionpatternofVvMAPK9inGrapestockA35underdifferentabioticstressesandABAtreatment3.3VvMAPK9蛋白的亞細胞定位構建35S-VvMAPK9-GFP載體（3-5A），運用農桿菌GV3101介導的瞬時轉化法將其轉入煙草葉片的表皮細胞。撕取葉片下表皮制成玻片后放在激光共聚焦顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)VvMAPK9-GFP融合蛋白在細胞質和細胞核中都產生了綠色熒光（圖3-5B），這說明VvMAPK9主要定位于細胞質和細胞核。

【參考文獻】：
期刊論文
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