本文關(guān)鍵詞：Ⅰ型鴨肝炎病毒的分離鑒定及高免卵黃抗體的研制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：鴨病毒性肝炎(Duckviral hepatitis, DVH)是雛鴨的一種高度致死性的、傳播迅速的病毒性傳染病。臨床上以神經(jīng)癥狀和肝臟腫大,表面有出血為特點(diǎn)。主要侵害6周齡以內(nèi)雛鴨,特別是2日到3周齡的雛鴨最為易感,成年鴨有抵抗力。不同日齡的雛鴨發(fā)病后,死亡率各不相同,有的高達(dá)95%,有的低于15%。耐過(guò)的鴨成為僵鴨,生長(zhǎng)和發(fā)育受到障礙。該病是危害養(yǎng)鴨業(yè)最為嚴(yán)重的傳染病之一。雖然鴨肝炎雞胚化弱毒苗和滅活苗已在全國(guó)范圍內(nèi)大面積推廣,但是在實(shí)際生產(chǎn)中,鴨肝炎仍時(shí)有暴發(fā),給養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重危害。而在鴨肝炎的預(yù)防和治療上,目前養(yǎng)殖戶主要依靠注射高免卵黃抗體,但是由于卵黃抗體生產(chǎn)不規(guī)范,致使卵黃抗體的質(zhì)量參差不齊,效果得不到保證。本試驗(yàn)從臨床發(fā)病雛鴨群中分離出的一株疑似鴨肝炎病毒進(jìn)行了生物學(xué)鑒定和毒力的測(cè)定。利用Ⅰ型鴨肝炎病毒鑒定引物對(duì)提取的病毒RNA進(jìn)行了巢式RT-PCR擴(kuò)增。根據(jù)測(cè)定的病毒ELD50,將分離的毒株與Ⅰ型鴨肝炎病毒陽(yáng)性血清進(jìn)行中和試驗(yàn)。進(jìn)行了雛鴨攻毒試驗(yàn)并用病變肝臟制作了超薄切片,觀察其病毒顆粒的形態(tài)特征。用該毒株接種易感雛鴨,取病死鴨肝臟,制備組織滅活苗,并加以不同的疫苗佐劑,設(shè)置蜂膠組、黃芪組及不加佐劑的對(duì)照組三組。按照免疫程序免疫高產(chǎn)蛋雞,收集高免蛋。對(duì)三組卵黃抗體的制備條件進(jìn)行了摸索確定,通過(guò)中和試驗(yàn)對(duì)三組卵黃抗體的效價(jià)進(jìn)行了測(cè)定,選擇效價(jià)較高的卵黃抗體將其應(yīng)用于臨床發(fā)病雛鴨的治療。試驗(yàn)結(jié)果表明,電鏡下可觀察到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中30nm左右圓形無(wú)囊膜的病毒顆粒。該毒株的ELD5o為10-5.659/0.2mL,分離出的病毒能夠被Ⅰ型鴨肝炎病毒標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中和,中和效價(jià)是1：79。巢式RT-PCR擴(kuò)增的條帶與預(yù)期相符,同源性分析與四株山東株的同源性較低。免疫后將收集三組卵黃通過(guò)中和試驗(yàn)進(jìn)行抗體效價(jià)的測(cè)定,依次為黃芪組210.8,蜂膠組29,對(duì)照組27.82,對(duì)照組的抗體效價(jià)明顯低于其他兩組。卵黃抗體制備的最適pH為6.1,最適稀釋度為1：10,此條件下卵黃抗體中的蛋白含量相對(duì)較高,同時(shí)發(fā)現(xiàn)三組卵黃抗體中的蛋白含量在在最適條件下黃芪組最高,蜂膠組次之,對(duì)照組最低。將抗體效價(jià)較高的黃芪組卵黃抗體進(jìn)行大量生產(chǎn)并應(yīng)用于臨床中,發(fā)現(xiàn)該高免卵黃抗體對(duì)Ⅰ型鴨病毒性肝炎的治愈率很高,對(duì)發(fā)病雛鴨有很好的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)從臨床上常發(fā)雛鴨病毒性肝炎病例出發(fā),為高效的組織滅活苗和卵黃抗體的研制奠定了基礎(chǔ),為有效地預(yù)防和控制鴨病毒性肝炎的流行提供了一些技術(shù)手段和理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：Ⅰ型鴨肝炎 分離鑒定 卵黃抗體制備
【學(xué)位授予單位】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S858.32
【目錄】：

• 符號(hào)說(shuō)明4-8
• 中文摘要8-10
• Abstract10-12
• 1 前言12-28
• 1.1 Ⅰ型鴨病毒性肝炎病原學(xué)特點(diǎn)12-13
• 1.2 Ⅰ型鴨肝炎流行病學(xué)13-15
• 1.2.1 傳染來(lái)源及途徑13-14
• 1.2.2 易感宿主14
• 1.2.3 流行特征14-15
• 1.3 Ⅰ型鴨肝炎的臨床癥狀15
• 1.4 Ⅰ型鴨肝炎病理變化15-16
• 1.5 Ⅰ型鴨肝炎診斷技術(shù)16-19
• 1.5.1 臨床綜合診斷16
• 1.5.2 病毒分離16-17
• 1.5.3 血清學(xué)診斷17
• 1.5.4 分子生物學(xué)診斷17-18
• 1.5.5 鑒別診斷18-19
• 1.6 Ⅰ型鴨肝炎的防疫措施19-20
• 1.7 Ⅱ型鴨肝炎20-21
• 1.8 Ⅲ型鴨肝炎病毒21-23
• 1.9 新型鴨肝炎病毒23-24
• 1.10 鴨病毒性肝炎疫苗24-25
• 1.10.1 鴨肝炎弱毒苗24
• 1.10.2. 鴨肝炎滅活苗24
• 1.10.3 鴨肝炎活疫苗24-25
• 1.10.4 聯(lián)苗25
• 1.10.5 新型鴨肝炎疫苗25
• 1.10.6 基因工程疫苗25
• 1.11 卵黃抗體25-27
• 1.11.1 卵黃抗體技術(shù)發(fā)展簡(jiǎn)史26
• 1.11.2 卵黃抗體優(yōu)勢(shì)分析26-27
• 1.11.3 卵黃抗體技術(shù)在預(yù)防及治療鴨病毒性肝炎的應(yīng)用27
• 1.12 研究目的27-28
• 2 材料與方法28-40
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 2.1.1 毒株28
• 2.1.2 主要試劑28
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備28
• 2.1.4 主要溶液及其配制28-29
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法29-40
• 2.2.1 病毒的分離29-30
• 2.2.2 巢式RT-PCR鑒定30-35
• 2.2.3 動(dòng)物回歸試驗(yàn)35
• 2.2.4 雛鴨保護(hù)試驗(yàn)35
• 2.2.5 血凝試驗(yàn)(HA)35
• 2.2.6 病毒的電鏡觀察35-36
• 2.2.7 雞胚半數(shù)致死量試驗(yàn)36
• 2.2.8 血清中和試驗(yàn)36
• 2.2.9 Ⅰ型鴨肝炎組織滅活苗的制備36-37
• 2.2.10 卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定37
• 2.2.11 卵黃抗體溶液制備條件的確定37-38
• 2.2.12 高免卵黃抗體的制備及治療效果38-40
• 3 結(jié)果與分析40-53
• 3.1 發(fā)病情況40
• 3.2 病毒的分離結(jié)果40-41
• 3.2.1 細(xì)菌分離結(jié)果40
• 3.2.2 病毒分離與傳代結(jié)果40-41
• 3.3 巢式RT-PCR鑒定結(jié)果41-43
• 3.4 動(dòng)物回歸與雛鴨保護(hù)試驗(yàn)43
• 3.5 血凝試驗(yàn)結(jié)果43
• 3.6 病毒的電鏡觀察43-44
• 3.7 半數(shù)致死量試驗(yàn)結(jié)果44-45
• 3.8 中和試驗(yàn)結(jié)果45
• 3.9 組織滅活苗的制備45-46
• 3.10 卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定46-48
• 3.10.1 免疫46
• 3.10.2 卵黃抗體效價(jià)的測(cè)定46-48
• 3.11 卵黃抗體溶液制備條件的確定48-51
• 3.11.1 蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線48-49
• 3.11.2 最佳pH值確定49-50
• 3.11.3 最佳稀釋倍數(shù)確定50-51
• 3.12 高免卵黃抗體的制備及治療DVH效果51-53
• 4 討論53-56
• 4.1 病毒的分離53
• 4.2 病毒的鑒定53
• 4.3 中和試驗(yàn)53-54
• 4.4 巢氏RT-PCR54
• 4.5 疫苗佐劑的選擇54-55
• 4.6 高免卵黃抗體的制備55
• 4.7 鴨病毒性肝炎防治新方法55-56
• 5 結(jié)論56-57
• 參考文獻(xiàn)57-63
• 致謝63-64
• 研究生期間發(fā)表論文64

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