發(fā)布時(shí)間：2021-03-27 23:47

　　藏羊是我國(guó)三大原始綿羊品種之一,長(zhǎng)期生活在我國(guó)西北高原地區(qū),耐低氧、耐高寒。動(dòng)物長(zhǎng)期處于低氧低壓環(huán)境,易出現(xiàn)肺動(dòng)脈高壓、右心肥厚等病理現(xiàn)象,而藏羊?qū)Ω吆脱醐h(huán)境表現(xiàn)出了很強(qiáng)的適應(yīng)性,為了研究藏羊心肺組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其高原低氧適應(yīng)特性,采集不同海拔藏羊與小尾寒羊心臟左右心房/心室,各級(jí)支氣管及附近肺臟組織。分別采用HE法、PATH法、Gommer醛品紅法及Masson三色法染色,觀察藏羊與小尾寒羊心臟和肺臟組織結(jié)構(gòu)及心臟傳導(dǎo)系的特點(diǎn);利用免疫組織化學(xué)與實(shí)時(shí)熒光定量PCR法,檢測(cè)藏羊和小尾寒羊心臟和肺臟中低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）、熱休克蛋白70（HSP70）和水通道蛋白1（AQP1）及相關(guān)基因的表達(dá)差異。結(jié)果如下:1.藏羊左心室與右心房心壁厚度（1.58±0.12、0.35±0.01cm,）心腔面積（49.34±2.18、16.42±1.24cm²）心肌纖維長(zhǎng)度（123.3±9.42、32.4±3.54μm）與直徑（21.2±1.56、7.45±1.45μm）均顯著高于小尾寒羊（P<0.05）。藏羊左心室（255.25±17.84μm）、右心室（150.9... 

【文章來(lái)源】：西北民族大學(xué)甘肅省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

免疫組化原理示意圖

西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院碩士學(xué)位論文-7-圖1-4HIF1蛋白結(jié)構(gòu)模式圖Fig1-4StructuralpatternofHIF1proteinAQP蛋白在肺組織中的異常聚集等現(xiàn)象，由此可見AQP可能參與肺水腫的調(diào)節(jié)過(guò)程。3.1HIF低氧誘導(dǎo)因子的研究低氧誘導(dǎo)因子（Hypoxiainduciblefator，HIF）為機(jī)體最核心的低氧適應(yīng)相關(guān)蛋白，其結(jié)構(gòu)由功能性α和結(jié)構(gòu)性β兩個(gè)亞基組成，其中α亞基又為調(diào)節(jié)性亞基。目前HIF家族中已知常見的有[85]HIF-1，HIF-2，HIF-3，研究表明[86]，HIF-1、2在低氧反應(yīng)中起正向調(diào)節(jié)作用，HIF-3則反之，且在缺氧條件下HIF-1在動(dòng)物體內(nèi)最為廣泛。研究表明[87]，HIF-1可調(diào)控包括促紅細(xì)胞生成素(EPO)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在內(nèi)的多種低氧適應(yīng)相關(guān)的基因，這些被調(diào)控的基因序列在其增強(qiáng)子或啟動(dòng)子上有1個(gè)低氧反應(yīng)元件，是由HIF1結(jié)合點(diǎn)及其兩側(cè)的功能序列構(gòu)成的，這些結(jié)構(gòu)成為HIF1啟動(dòng)各個(gè)基因轉(zhuǎn)錄的結(jié)合靶點(diǎn)，因此HIF1發(fā)揮了啟動(dòng)機(jī)體低氧適應(yīng)“鑰匙”作用。而具有活性的HIF1是由HIF-1α與HIF-1β兩個(gè)亞基結(jié)合而成，其中HIF-1β正常存在于細(xì)胞漿中，HIF-1α則受氧濃度調(diào)節(jié)，常氧氣狀態(tài)下翻譯后的HIF-1α在其序列氧依賴降解結(jié)構(gòu)域（Oxygendependentdegradationdomain,ODDD）中保守脯氨酸殘基的羥化作用下被迅速降解，而在低氧條件下脯氨酸羥化反應(yīng)被抑制，hif-1α轉(zhuǎn)錄生成HIF-1α的與細(xì)胞質(zhì)中HIF-1β結(jié)合成為具有活性HIF-1進(jìn)入細(xì)胞核與HIF-1啟動(dòng)子的增強(qiáng)子部位的HRE結(jié)合，促進(jìn)靶基因的表達(dá)，由此可見，檢測(cè)HIF-1α的表達(dá)即可說(shuō)明機(jī)體的低氧適應(yīng)狀態(tài)。3.2HSP熱休克蛋白的研究熱休克蛋白(heatshockprotein)HSP是一類廣泛存在于生物體內(nèi)且結(jié)構(gòu)上高度保守的蛋白質(zhì)。在應(yīng)激條件下，機(jī)體會(huì)誘導(dǎo)其表達(dá)，因此HSP又被稱為應(yīng)激蛋白。機(jī)體

西北民族大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院碩士學(xué)位論文-8-圖1-5HSP蛋白結(jié)構(gòu)模式圖Fig1-5StructurepatternofHSPprotein細(xì)胞蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)的所有方面。HSP70由45kDa氮末端核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域(nucleotidebindingdomain,NBD)和25kDa的碳末端底物結(jié)合結(jié)構(gòu)域(substratebindingdomain,SBD)組成。HSP70作為細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的中心組分[88]與共伴侶發(fā)揮諸多生物學(xué)功能。包括增強(qiáng)細(xì)胞活力與耐受性或促進(jìn)損傷蛋白修復(fù)，從而延長(zhǎng)生物壽命；具有細(xì)胞保護(hù)和免疫調(diào)節(jié)等功能[89]。細(xì)胞凋亡通�？煞譃榫�粒體依賴性凋亡和死亡受體凋亡兩種，HSP70作為一類強(qiáng)大的抗細(xì)胞凋亡蛋白在兩此外種凋亡途徑中均有參與[90]。在應(yīng)激條件下[91]，細(xì)胞通過(guò)增強(qiáng)體內(nèi)的熱休克蛋白表達(dá)來(lái)抵抗外界的過(guò)程稱為熱休克應(yīng)答(heatshockresponse,HSR)，HSR是一種復(fù)雜的細(xì)胞保護(hù)機(jī)制[92]，是減少細(xì)胞應(yīng)激損傷的防御系統(tǒng)。參與HSP70調(diào)控的，有熱休克因子(heatshockfactor,HSF)和熱休克元件(heatshockelement,HSE)，而轉(zhuǎn)錄后的調(diào)節(jié)與microRNA有關(guān)，另外HSP70的翻譯過(guò)程與mRNA的穩(wěn)定性增強(qiáng)等相關(guān)。綜上可見，HSP70對(duì)于動(dòng)物細(xì)胞組織在抵抗低氧環(huán)境所帶來(lái)的損傷而導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡及后期的損傷修復(fù)、抗應(yīng)激適應(yīng)等方面均有重大的意義。3.3AQP水通道蛋白的研究水通道蛋白（AQP）在1988年被Agre等人發(fā)現(xiàn)[93]，當(dāng)時(shí)被稱為CHIP28，后經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，該蛋白具有水通道調(diào)控能力，因此被命名為水通道蛋白（AQP）。目前在哺乳動(dòng)物體內(nèi)共發(fā)現(xiàn)11中AQP蛋白。AQP位于細(xì)胞膜表面，可對(duì)水分子的跨膜運(yùn)輸進(jìn)行調(diào)節(jié)，屬于主體內(nèi)在蛋白。其分子量一般在26-34Kd間，目前對(duì)于AQP1蛋白的相關(guān)構(gòu)型研究最為明確，其一級(jí)結(jié)構(gòu)為269個(gè)氨基酸，二級(jí)結(jié)構(gòu)為6個(gè)α螺旋共同構(gòu)成一個(gè)大的右手螺旋結(jié)構(gòu)，AQP1由4個(gè)單?


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