子宮內(nèi)膜炎是奶牛常見的繁殖疾病,給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失。導致奶牛子宮內(nèi)膜炎的因素很多,但主要因素有兩個:一是奶牛營養(yǎng)狀況不良,自身免疫力低下;二是奶牛受到致病菌的感染。如何預防和控制奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生一直是科研人員研究的重點,目前的主要方法為使用抗生素進行治療,但抗生素頻繁使用會導致細菌等產(chǎn)生抗藥性。蝦青素（Astaxanthin,AST）是一種具有強抗氧化效果的營養(yǎng)素,能顯著改善動物的免疫性能,其是否能用于預防和治療奶牛子宮內(nèi)膜炎?本研究通過構建子宮內(nèi)膜體外炎癥模型,將AST作用于建立的炎癥模型,探索了其對細胞炎性反應的作用和機制。試驗一:子宮內(nèi)膜體外炎癥模型的建立利用1μg/mL脂多糖（LPS）分別刺激奶牛子宮內(nèi)膜細胞3 h、6 h、9 h和12 h,通過ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中白細胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的含量,檢測Claudin1、CDH1、TJP1等緊密連接基因的表達,確定LPS的最佳作用時間為6 h,建立了子宮內(nèi)膜細胞炎癥模型。試驗二:AST通過保護黏膜屏障對LPS誘導的牛子宮內(nèi)膜細胞炎癥的影響利用試驗一建立的子宮內(nèi)膜細胞炎癥模型... 

【文章來源】：山東師范大學山東省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

AST的化學結構

山東師范大學碩士學位論文162.2結果2.2.1炎癥因子分泌通過ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中IL-6和TNF-α的含量，由圖2-1可知，利用1μg/mLLPS作用牛子宮內(nèi)膜細胞6h，細胞分泌的IL-6和TNF-α蛋白含量顯著提高（P<0.05）。說明LPS處理子宮內(nèi)膜細胞6h，作用效果最為明顯。圖2-1LPS誘導細胞炎癥因子IL-6、TNF-α分泌量Fig.2-1IL-6,TNF-αInflammatoryfactorsecretionthroughLPS2.2.2緊密連接相關基因表達利用LPS處理牛子宮內(nèi)膜細胞后，利用熒光定量RT-PCR法檢測緊密連接相關基因Claudin1、CDH1、TJP1表達水平，由表2-5可知，LPS處理子宮內(nèi)膜細胞6h后，緊密連接相關基因Claudin1、CDH1、TJP1的mRNA表達水平顯著降低（P<0.05）說明在mRNA水平上，LPS處理子宮內(nèi)膜細胞6h效果最為顯著。表2-5LPS誘導的子宮內(nèi)膜細胞基因Claudin1、CDH1、TJP1表達的影響Table2-5EffectofastaxanthinonmRNAexpressionsofClaudin1,CDH1andTJP1LPS-inducedendometrialcellsLPS(1μg/mL)mRNAClaudin1CDH1TJP10h1.00±0.09a1.00±0.01a1.00±0.08a3h0.86±0.03a0.69±0.20ab0.37±0.10c6h0.51±0.14b0.51±0.07b0.44±0.06c9h1.09±0.09a0.78±0.14ab0.73±0.06b12h1.15±0.03a0.94±0.01a1.17±0.07a注：a表示差異顯著，b、c表示差異不顯著。

山東師范大學碩士學位論文23注：■AST濃度為10-7mol/L，▲AST濃度為10-6mol/L，▼AST濃度為10-5mol/L。圖3-1AST誘導細胞炎癥因子IL-6、TNF-α分泌量Fig.3-1IL-6,TNF-αInflammatoryfactorsecretionthroughAST表3-1AST誘導的子宮內(nèi)膜細胞基因表達的影響Table3-1EffectofastaxanthinonmRNAexpressionsAST-inducedendometrialcellsAST（mol/L）mRNAClaudin1CDH1TJP1Control01.04±0.18abcd1.06±0.25abcd1.13±0.42abcde3h1×10-50.96±0.07abcd1.44±0.25d1.91±0.27fg1×10-61.08±0.19abcd1.22±0.18cd1.67±0.58efg1×10-71.17±0.16abcd1.51±0.13d0.98±0.12abcde6h1×10-50.75±0.04abc0.94±0.07abcd0.86±0.15abcd1×10-61.32±0.42cd1.24±0.37cd1.33±0.31cdefg1×10-70.89±0.11abcd0.74±0.06abc0.63±0.05abc9h1×10-50.56±0.07a0.51±0.11a0.46±0.04a1×10-60.57±0.09ab0.54±0.09a0.56±0.03ab1×10-70.76±0.08abc0.73±0.08abc0.64±0.03abc12h1×10-50.81±0.18abc0.58±0.06ab0.77±0.10abcd1×10-61.06±0.15abcd0.79±0.11abc0.89±0.05abcd1×10-70.93±0.09abcd0.75±0.15abc0.79±0.13abcd24h1×10-51.19±0.19bcd1.18±0.19bcd0.96±0.09abde1×10-63.77±0.10f3.76±0.10f2.03±0.25g1×10-72.27±0.23e2.26±0.23e1.39±0.05defg48h1×10-51.26±0.11cd1.53±0.08d1.10±0.08abcde1×10-61.32±0.25cd1.30±0.33cd1.47±0.18defg1×10-71.49±0.26d1.42±0.21d1.23±0.16bcdef注：a表示差異顯著，b、c、d、e、f、


本文編號：3102609