本文關(guān)鍵詞：外源基因neo表達(dá)對(duì)轉(zhuǎn)基因豬腸道菌群耐藥性與非期望效應(yīng)的影響評(píng)估，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：neo基因作為標(biāo)記基因被廣泛應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)、植物研究中,neo基因的表達(dá)可能導(dǎo)致的各種副作用及安全隱患也越來(lái)越引起大眾的關(guān)注和擔(dān)憂。本實(shí)驗(yàn)將半同胞的兩窩F1代陰性豬和轉(zhuǎn)neo基因豬隨機(jī)分為兩組。A組在1.5月齡時(shí)飼喂7天(一個(gè)療程)添加硫酸新霉素的基礎(chǔ)日糧,并分別在0D,8D,23D和45D四個(gè)階段取其直腸內(nèi)容物。B組從斷奶后飼喂基礎(chǔ)日糧,并在3月齡時(shí)屠宰取各腸段腸道內(nèi)容物。對(duì)A、B兩組樣品進(jìn)行高通量測(cè)序分析。同時(shí),對(duì)腸道微生物進(jìn)行neo基因漂移檢測(cè),多重PCR結(jié)果表明,外源基因neo沒(méi)有水平漂移到微生物基因組中。A組數(shù)據(jù)表明,neo基因的表達(dá)產(chǎn)物NPTⅡ蛋白對(duì)腸道微生物的耐藥性有一定的影響。NPTⅡ蛋白主要來(lái)自于死亡和脫落的上皮細(xì)胞以及相關(guān)的微生物。我們通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬飼喂硫酸新霉素前后不同時(shí)間點(diǎn),在門(mén)和屬水平上的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),低水平的NPTⅡ蛋白能夠中和一定量的硫酸新霉素,盡管其具體的機(jī)制我們還不清楚。因此,在一定程度上,可以得出以下結(jié)論:轉(zhuǎn)基因豬由于neo基因的表達(dá)對(duì)腸道微生物的耐藥性產(chǎn)生了影響。通過(guò)對(duì)B組陰性豬和轉(zhuǎn)基因豬各相同腸段中菌群分布的比較分析,發(fā)現(xiàn)陰性豬與轉(zhuǎn)基因豬在門(mén)和屬水平上總體差異不大,但還是在某些門(mén)和屬上,甚至是某些主要門(mén)和屬上出現(xiàn)了非期望效應(yīng)。在門(mén)和屬水平上,通過(guò)對(duì)A組1.5月齡和B組3月齡陰性豬與轉(zhuǎn)基因豬之間的菌群動(dòng)態(tài)變化比較分析中,發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間的推移,陰性豬與轉(zhuǎn)基因豬主要菌群分布比例出現(xiàn)相反的變化趨勢(shì),產(chǎn)生了非期望效應(yīng)。上訴轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬中的細(xì)菌在門(mén)和屬水平上的變化表明,低水平的NPTⅡ蛋白對(duì)轉(zhuǎn)基因豬腸道菌群產(chǎn)生非期望效應(yīng),其機(jī)制有待進(jìn)一步研究�？傊�,本文的研究表明,外源基因neo的表達(dá)在一定程度上可提高轉(zhuǎn)基因豬的耐藥性,可導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因豬腸道微生物某些菌群產(chǎn)生非期望效應(yīng),同時(shí)也可能會(huì)對(duì)轉(zhuǎn)基因豬的健康產(chǎn)生一定的影響。此研究為我們?cè)谵D(zhuǎn)基因研究尤其是轉(zhuǎn)基因產(chǎn)業(yè)化開(kāi)發(fā)中慎用neo基因提供了科學(xué)的警示,同時(shí)此研究通過(guò)利用高通量測(cè)序技術(shù)也為豬的各腸段微生物在時(shí)間和空間上的分布及其動(dòng)態(tài)變化積累了寶貴的原始數(shù)據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：neo轉(zhuǎn)基因豬 基因水平漂移 微生物耐藥性 非期望效應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S852.6
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-10
• 英文縮略表10-11
• 第一章引 言11-16
• 1.1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究與應(yīng)用11-12
• 1.1.1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究11
• 1.1.2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用11-12
• 1.2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物安全的研究與評(píng)價(jià)12-13
• 1.2.1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物安全評(píng)價(jià)12
• 1.2.2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)環(huán)境安全評(píng)價(jià)12-13
• 1.3 NEO基因的簡(jiǎn)介與應(yīng)用13
• 1.4454平臺(tái)對(duì)研究腸道微生物的應(yīng)用13-14
• 1.5 細(xì)菌耐藥性14
• 1.6 非期望效應(yīng)14-15
• 1.7 目的意義和本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)路線15-16
• 1.7.1 研究目的與意義15
• 1.7.2 本實(shí)驗(yàn)的技術(shù)路線15-16
• 第二章 NEO轉(zhuǎn)基因豬分子鑒定16-21
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-17
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及樣品16
• 2.1.2 主要儀器和設(shè)備16
• 2.1.3 主要試劑、耗材16
• 2.1.4 所用引物序列16-17
• 2.2 試驗(yàn)方法17-18
• 2.2.1 DNA的提取17
• 2.2.2 PCR檢測(cè)17
• 2.2.3 Southern Blot檢測(cè)17-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-20
• 2.3.1 DNA質(zhì)量檢測(cè)18
• 2.3.2 酶切檢測(cè)18-19
• 2.3.3 PCR鑒定結(jié)果19
• 2.3.4 Southern Blot鑒定結(jié)果19-20
• 2.4 討論與分析20-21
• 第三章 NEO基因表達(dá)產(chǎn)物在腸道組織和腸道內(nèi)容物中的鑒定21-26
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料21-22
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)樣品21
• 3.1.2 主要儀器和設(shè)備21
• 3.1.3 主要試劑、耗材21-22
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法22-23
• 3.2.1 Western blot檢測(cè)22
• 3.2.2 ELISA檢測(cè)22-23
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-24
• 3.3.1 Western Blot檢測(cè)結(jié)果23-24
• 3.3.2 Elisa檢測(cè)結(jié)果24
• 3.4 討論24-26
• 第四章 NEO轉(zhuǎn)基因豬外源基因水平漂移評(píng)估26-30
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料26
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)主要試劑26
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法26-27
• 4.2.1 糞便DNA的提取26-27
• 4.2.2 多重PCR技術(shù)27
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-28
• 4.4 討論分析28-30
• 第五章外源基因NEO表達(dá)對(duì)豬腸道微生物耐藥性的影響30-41
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料30
• 5.1.1 樣品采集30
• 5.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑30
• 5.2 實(shí)驗(yàn)步驟30-32
• 5.2.1.剪切、連接30
• 5.2.2.單鏈DNA模板的分離30-31
• 5.2.3.emPCR31
• 5.2.4.測(cè)序反應(yīng)31
• 5.2.5. 生物信息分析流程31-32
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-39
• 5.3.1 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理32-35
• 5.3.2 A組轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬微生物在門(mén)水平上不同程度和規(guī)模的改變35-36
• 5.3.3 A組轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬微生物在屬水平上不同程度和規(guī)模的改變36-39
• 5.4 分析與討論39-41
• 第六章外源基因NEO表達(dá)對(duì)豬腸道微生物產(chǎn)生的非期望效應(yīng)41-54
• 6.1 實(shí)驗(yàn)材料41
• 6.1.1 樣品采集41
• 6.1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑41
• 6.2 實(shí)驗(yàn)步驟41
• 6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-53
• 6.3.1 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理41-44
• 6.3.2 B組轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬不同腸段細(xì)菌在門(mén)水平上的變化44-46
• 6.3.3 B組轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬不同腸段細(xì)菌在屬水平上的變化46-50
• 6.3.4 1.5月齡到3月齡時(shí)，，A組和B組轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬腸道細(xì)菌在門(mén)水平上的動(dòng)態(tài)變化50-51
• 6.3.5 1.5月齡到3月齡時(shí)，A組和B組轉(zhuǎn)基因豬和陰性豬腸道細(xì)菌在屬水平上的動(dòng)態(tài)變化51-53
• 6.4 分析與討論53-54
• 第七章全文結(jié)論54-55
• 參考文獻(xiàn)55-61
• 致謝61-62
• 作者簡(jiǎn)歷62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 李明,魏輔文,饒剛,方盛國(guó),馮祚建;非損傷性取樣法在保護(hù)遺傳學(xué)研究中的應(yīng)用[J];動(dòng)物學(xué)報(bào);2001年03期

2 崔澤林;郭曉奎;;食物鏈中抗生素耐藥性基因的轉(zhuǎn)移[J];中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志;2011年01期

3 顧兵;童明慶;劉根焰;倪芳;趙旺勝;梅亞寧;文怡;魏源華;黃s顂

本文編號(hào)：305162