發(fā)布時(shí)間：2021-02-24 03:35

　　普通菜豆味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富,是人們喜愛(ài)的蔬菜作物。然而在菜豆的生長(zhǎng)地域一再遭受著干旱、高鹽、低溫等非生物脅迫的侵襲,這嚴(yán)重影響著普通菜豆的生長(zhǎng)發(fā)育和產(chǎn)量。培育抗逆性強(qiáng)的普通菜豆新品種對(duì)普通菜豆的生產(chǎn)極其重要。而挖掘普通菜豆中的抗逆相關(guān)基因,通過(guò)分子育種提高普通菜豆抗逆性是解決策略之一。實(shí)驗(yàn)室前期挖掘到了9個(gè)普通菜豆14-3-3蛋白基因,且發(fā)現(xiàn)它們不同程度的受到非生物脅迫的誘導(dǎo)。為了研究它們?cè)谵D(zhuǎn)基因后是否引起植物脅迫耐受能力的變化,在本項(xiàng)研究中主要對(duì)其中兩個(gè)異型體Pv GF14n和Pv GF14d在干旱和鹽脅迫下的功能進(jìn)行深入的分析,研究結(jié)果如下:1.我們通過(guò)生物信息學(xué)的方法分析了PvGF14n/d與其他植物14-3-3蛋白的同源性與進(jìn)化關(guān)系,發(fā)現(xiàn)Pv GF14n與番茄14-3-3蛋白TFT4的同源性較高,Pv GF14d與大豆14-3-3蛋白基因SGF14d的同源性最高,我們推測(cè)它們可能具有相似的功能。2.我們從普通菜豆中克隆到PvGF14n/d基因的全長(zhǎng),利用Gateway技術(shù)克隆構(gòu)建到表達(dá)載體p Early Gate101中。通過(guò)花芽浸泡法將目的基因在擬南芥過(guò)表達(dá),通過(guò)DNA-PC... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 1433 蛋白的發(fā)現(xiàn)
    1.2 1433 蛋白的結(jié)構(gòu)與異型體的特異性
        1.2.1 1433 蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 1433 蛋白的異型體的特異性
    1.3 1433 蛋白在植物中的功能
        1.3.1 1433 蛋白在植物生長(zhǎng)發(fā)育中的功能
        1.3.2 1433 蛋白在植物激素信號(hào)中的功能
        1.3.3 1433 蛋白在植物非生物脅迫中的功能
    1.4 研究目的和意義
第2章 PvGF14n/d的克隆及表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種與載體
    2.2 試驗(yàn)藥品及試劑
        2.2.1 主要試劑
        2.2.2 培養(yǎng)基的配制
    2.3 試驗(yàn)儀器
    2.4 試驗(yàn)方法
        2.4.1 目的基因片段的擴(kuò)增
        2.4.2 目的基因與表達(dá)載體連接
        2.4.3 連接產(chǎn)物的大腸桿菌轉(zhuǎn)化
        2.4.4 大腸桿菌菌液PCR檢測(cè)
        2.4.5 大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取
        2.4.6 重組質(zhì)粒的PCR檢測(cè)
        2.4.7 連接產(chǎn)物的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        2.4.8 農(nóng)桿菌菌液PCR檢測(cè)
        2.4.9 農(nóng)桿菌質(zhì)粒DNA的提取
        2.4.10 重組質(zhì)粒的PCR檢測(cè)
        2.4.11 生物信息學(xué)分析
    2.5 試驗(yàn)結(jié)果
        2.5.1 目的基因的克隆
        2.5.2 目的基因的生物信息學(xué)分析
        2.5.3 表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.6 討論與結(jié)論
第3章 過(guò)表達(dá)擬南芥植株的獲得
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 菌種與載體
    3.2 試驗(yàn)藥品及試劑
        3.2.1 培養(yǎng)基的配置
        3.2.2 試驗(yàn)藥品
    3.3 試驗(yàn)儀器
    3.4 試驗(yàn)方法
        3.4.1 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.4.2 轉(zhuǎn)基因植株的篩選
        3.4.4 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
            3.4.4.1 DNA的提取
            3.4.4.2 RNA的提取
            3.4.4.3 cDNA的合成
    3.5 試驗(yàn)結(jié)果
        3.5.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的篩選
        3.5.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥DNA-PCR擴(kuò)增
        3.5.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥RT-PCR擴(kuò)增
    3.6 討論與結(jié)論
第4章 過(guò)表達(dá)擬南芥植株在干旱脅迫條件下的表型分析
    4.1 試驗(yàn)材料
    4.2 試驗(yàn)試劑
        4.2.1 培養(yǎng)基的配置
        4.2.2 主要試劑
    4.3 試驗(yàn)儀器
    4.4 試驗(yàn)方法
        4.4.1 甘露醇模擬干旱脅迫的種子萌發(fā)分析
        4.4.2 土壤干旱脅迫下轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型分析
    4.5 結(jié)果與分析
        4.5.1 甘露醇模擬干旱脅迫對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥萌發(fā)的影響
        4.5.2 甘露醇模擬干旱脅迫對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥的綠苗率的影響
        4.5.3 土壤干旱脅迫對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥植株生長(zhǎng)的影響
    4.6 討論
第5章 過(guò)表達(dá)擬南芥植株在鹽脅迫條件下的表型分析
    5.1 試驗(yàn)材料
    5.2 試驗(yàn)試劑
        5.2.1 培養(yǎng)基的配置
        5.2.2 主要試劑
    5.3 試驗(yàn)儀器
    5.4 試驗(yàn)方法
        5.4.1 氯化鈉模擬鹽脅迫的種子萌發(fā)分析
        5.4.2 土壤鹽脅迫下轉(zhuǎn)基因擬南芥的表型分析
        5.4.3 鹽脅迫下轉(zhuǎn)基因擬南芥中的葉綠素測(cè)定
    5.5 結(jié)果與分析
        5.5.1 氯化鈉模擬鹽脅迫對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥的萌發(fā)率的影響
        5.5.2 氯化鈉模擬鹽脅迫對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥的綠苗率的影響
        5.5.3 土壤鹽脅迫對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥植株生長(zhǎng)的影響
    5.6 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3048721