越南參變種內(nèi)參基因的篩選及鯊烯環(huán)氧酶基因的功能研究
發(fā)布時間：2021-02-05 23:41
目的篩選并驗(yàn)證越南參變種不同組織部位適宜的內(nèi)參基因,為越南參變種中的基因表達(dá)相關(guān)研究提供參考,同時對越南參變種的鯊烯環(huán)氧酶進(jìn)行功能研究。方法基于前期研究中所獲得的越南參變種轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),從中篩選候選內(nèi)參基因,設(shè)計特異性引物,利用qRT-PCR技術(shù)檢測候選內(nèi)參基因在越南參變種不同組織部位（根、根莖、莖和葉）的表達(dá)水平,并利用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3個分析軟件綜合分析候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性。在前期的研究基礎(chǔ)上,重新設(shè)計PvfSE2、PvfSE2d的特異性引物,與pMal-c2X構(gòu)建原核表達(dá)載體,以His-SmCPR質(zhì)粒為模板,構(gòu)建丹參P450還原酶（SmCPR）的原核表達(dá)載體pET-28a-SmCPR、pET-28a-SmCPRd,將重組質(zhì)粒在大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá)蛋白,SDS-PAGE電泳檢測蛋白表達(dá)情況,并利用qRT-PCR技術(shù)檢測鯊烯環(huán)氧酶基因在越南參變種不同組織部位的表達(dá)水平。結(jié)果1.基于越南參變種轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),總共篩選出13個候選內(nèi)參基因（ACT1、ACT2、bTUB1、bTUB2、aTU...
【文章來源】：云南中醫(yī)藥大學(xué)云南省
【文章頁數(shù)】：80 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
越南參變種RNA瓊脂糖凝膠電泳圖
越南參變種內(nèi)參基因的篩選及鯊烯環(huán)氧酶基因的功能研究21參基因的擴(kuò)增效率E均在90.41%~104.61%之間，R2>0.9800（表2-1）。以上結(jié)果表明，13個候選內(nèi)參基因的引物特異性和擴(kuò)增效率良好。圖2-2候選內(nèi)參基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.2-2AgarosegelelectrophoresisanalysisofPCRproductsofcandidatereferencegenesM:DL2000DNAmarker1:ACT12:ACT23:bTUB14:bTUB25:GADPH6:F-box7:CYP8:elF9:aTUB10:UBQ11:QCR12:TCTP13:EF-1a圖2-3候選內(nèi)參基因熔解曲線圖Fig.2-3Meltingcurvesofcandidatereferencegenes2.3.3內(nèi)參基因Ct值分析Ct值與基因的表達(dá)量成反比，即Ct值越大，表達(dá)量越校qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，13個候選內(nèi)參基因的Ct均在19～30之間，其中CYP的Ct值最小，在19~24之間；F-box的Ct值最大，在26~30之間；其他基因的Ct主要集中在20~28之間。各候選內(nèi)參基因的表達(dá)量差異較大，ACT1、ACT2、TCTP、aTUB和UBQ的Ct值在不同樣本間變化范圍相對較小，表達(dá)較穩(wěn)定，bTUB1、bTUB2、GADPH和elF的Ct值變化范圍相對較大，表達(dá)差異較大（圖2-4）。
越南參變種內(nèi)參基因的篩選及鯊烯環(huán)氧酶基因的功能研究21參基因的擴(kuò)增效率E均在90.41%~104.61%之間，R2>0.9800（表2-1）。以上結(jié)果表明，13個候選內(nèi)參基因的引物特異性和擴(kuò)增效率良好。圖2-2候選內(nèi)參基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.2-2AgarosegelelectrophoresisanalysisofPCRproductsofcandidatereferencegenesM:DL2000DNAmarker1:ACT12:ACT23:bTUB14:bTUB25:GADPH6:F-box7:CYP8:elF9:aTUB10:UBQ11:QCR12:TCTP13:EF-1a圖2-3候選內(nèi)參基因熔解曲線圖Fig.2-3Meltingcurvesofcandidatereferencegenes2.3.3內(nèi)參基因Ct值分析Ct值與基因的表達(dá)量成反比，即Ct值越大，表達(dá)量越校qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，13個候選內(nèi)參基因的Ct均在19～30之間，其中CYP的Ct值最小，在19~24之間；F-box的Ct值最大，在26~30之間；其他基因的Ct主要集中在20~28之間。各候選內(nèi)參基因的表達(dá)量差異較大，ACT1、ACT2、TCTP、aTUB和UBQ的Ct值在不同樣本間變化范圍相對較小，表達(dá)較穩(wěn)定，bTUB1、bTUB2、GADPH和elF的Ct值變化范圍相對較大，表達(dá)差異較大（圖2-4）。
本文編號：3019777
【文章來源】：云南中醫(yī)藥大學(xué)云南省
【文章頁數(shù)】：80 頁
【學(xué)位級別】：碩士
【部分圖文】：
越南參變種RNA瓊脂糖凝膠電泳圖
越南參變種內(nèi)參基因的篩選及鯊烯環(huán)氧酶基因的功能研究21參基因的擴(kuò)增效率E均在90.41%~104.61%之間，R2>0.9800（表2-1）。以上結(jié)果表明，13個候選內(nèi)參基因的引物特異性和擴(kuò)增效率良好。圖2-2候選內(nèi)參基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.2-2AgarosegelelectrophoresisanalysisofPCRproductsofcandidatereferencegenesM:DL2000DNAmarker1:ACT12:ACT23:bTUB14:bTUB25:GADPH6:F-box7:CYP8:elF9:aTUB10:UBQ11:QCR12:TCTP13:EF-1a圖2-3候選內(nèi)參基因熔解曲線圖Fig.2-3Meltingcurvesofcandidatereferencegenes2.3.3內(nèi)參基因Ct值分析Ct值與基因的表達(dá)量成反比，即Ct值越大，表達(dá)量越校qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，13個候選內(nèi)參基因的Ct均在19～30之間，其中CYP的Ct值最小，在19~24之間；F-box的Ct值最大，在26~30之間；其他基因的Ct主要集中在20~28之間。各候選內(nèi)參基因的表達(dá)量差異較大，ACT1、ACT2、TCTP、aTUB和UBQ的Ct值在不同樣本間變化范圍相對較小，表達(dá)較穩(wěn)定，bTUB1、bTUB2、GADPH和elF的Ct值變化范圍相對較大，表達(dá)差異較大（圖2-4）。
越南參變種內(nèi)參基因的篩選及鯊烯環(huán)氧酶基因的功能研究21參基因的擴(kuò)增效率E均在90.41%~104.61%之間，R2>0.9800（表2-1）。以上結(jié)果表明，13個候選內(nèi)參基因的引物特異性和擴(kuò)增效率良好。圖2-2候選內(nèi)參基因PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.2-2AgarosegelelectrophoresisanalysisofPCRproductsofcandidatereferencegenesM:DL2000DNAmarker1:ACT12:ACT23:bTUB14:bTUB25:GADPH6:F-box7:CYP8:elF9:aTUB10:UBQ11:QCR12:TCTP13:EF-1a圖2-3候選內(nèi)參基因熔解曲線圖Fig.2-3Meltingcurvesofcandidatereferencegenes2.3.3內(nèi)參基因Ct值分析Ct值與基因的表達(dá)量成反比，即Ct值越大，表達(dá)量越校qRT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，13個候選內(nèi)參基因的Ct均在19～30之間，其中CYP的Ct值最小，在19~24之間；F-box的Ct值最大，在26~30之間；其他基因的Ct主要集中在20~28之間。各候選內(nèi)參基因的表達(dá)量差異較大，ACT1、ACT2、TCTP、aTUB和UBQ的Ct值在不同樣本間變化范圍相對較小，表達(dá)較穩(wěn)定，bTUB1、bTUB2、GADPH和elF的Ct值變化范圍相對較大，表達(dá)差異較大（圖2-4）。
本文編號：3019777
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