水稻作為典型C₃作物,其光合作用效率及產(chǎn)量比玉米等C₄植物低。利用基因工程技術(shù)將C₄型光合作用導(dǎo)入水稻,將為提高水稻的實(shí)際產(chǎn)量和生產(chǎn)潛力提供可能性。植物轉(zhuǎn)錄因子（TFs）作為基因表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,對(duì)于調(diào)控基因表達(dá)至關(guān)重要。本研究采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法將玉米中26個(gè)Aux/IAA家族轉(zhuǎn)錄因子基因轉(zhuǎn)化到“日本晴”水稻,對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行維管束鞘細(xì)胞淀粉累積株系的篩選與鑒定,為其水稻光合作用及其產(chǎn)物運(yùn)輸機(jī)制的研究,提供材料和技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下:1.利用Gateway克隆技術(shù)構(gòu)建了26個(gè)玉米Aux/IAA基因家族轉(zhuǎn)錄因子基因的過(guò)表達(dá)載體。2.通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻轉(zhuǎn)化試驗(yàn)將表達(dá)載體上的目的基因?qū)搿叭毡厩纭彼?愈傷誘導(dǎo)率約為94.66%,分化率約為84.56%;對(duì)T₀代株系進(jìn)行目的基因檢測(cè),陽(yáng)性率為100%。3.所得轉(zhuǎn)基因苗取分蘗期葉片切片后,經(jīng)碘-碘化鉀（I₂-KI）染色,獲得維管束鞘細(xì)胞淀粉積累的株系共計(jì)2個(gè),分別為aux3、aux8。4.農(nóng)藝性狀調(diào)查結(jié)果表明,與野生型... 

【文章來(lái)源】：河北科技大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Gateway目標(biāo)載體示意圖

13（續(xù)表）2950:303550:304721:005返回步驟230個(gè)循環(huán)6725:007結(jié)束步驟反應(yīng)溫度/℃時(shí)間/（min:s）表2-8引物序列名稱引物序列AC65-F(5’-3’)GGGATCCTCTAGAGTCGACCTGAC65-R(3’-5’)GCATAGTCAGGAACATCGTATGG挑選電泳后條帶正確的菌落，在含壯觀霉素抗性的固體LB培養(yǎng)基劃線3-5條，每條線都要換槍頭，將其封好放于37℃培養(yǎng)箱中，倒置培養(yǎng)過(guò)夜；用槍頭取線末端菌群（一般取第一條線，若第一條線未長(zhǎng)起來(lái)則取第二條線，以此類推），放于500μL含壯觀霉素抗性的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，置于37℃搖床，200-220rpm，過(guò)夜。2.3結(jié)果與分析2.3.1家族進(jìn)化分析為了了解本試驗(yàn)中26個(gè)Aux/IAA家族成員之間的親緣關(guān)系，對(duì)他們的核酸序列進(jìn)行對(duì)比如圖2-2，并構(gòu)建了系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)如圖2-3。圖2-2Aux/IAA家族成員比對(duì)部分結(jié)果

14圖2-3Aux/IAA家族成員部分系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)2.3.2表達(dá)載體的檢測(cè)將目的基因構(gòu)建到表達(dá)載體，并轉(zhuǎn)化大腸桿菌，在含有抗性的LB固體培養(yǎng)基上涂菌，待單菌落長(zhǎng)出后，首先挑單菌落進(jìn)行PCR驗(yàn)證。圖2-4以編號(hào)為aux3的載體為例，展示了載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌之后，抗性培養(yǎng)基上的單菌落生長(zhǎng)狀況。獲得外源基因的大腸桿菌菌落PCR電泳檢測(cè)部分結(jié)果如圖2-5。最終26個(gè)植物表達(dá)載體均構(gòu)建成功。圖2-4轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α抗性篩選結(jié)果注：圖中M為DL2000DNAMarker，1-8、9-16、17-24分別針對(duì)不同目的基因進(jìn)行PCR檢測(cè)結(jié)果。圖2-5大腸桿菌單菌落PCR驗(yàn)證電泳圖750bp2000bpM123456789101112131415161718192021222324

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3004443