荔枝草和三種多酚類單體物質(zhì)對(duì)斑馬魚肝損傷的修復(fù)作用機(jī)理研究
發(fā)布時(shí)間：2021-01-24 08:32
斑馬魚具有許多獨(dú)特的特征,如體積小,外部受精,快速發(fā)育和對(duì)藥物施用的極端敏感性等,這是篩選和評(píng)估藥物的理想模型。在疾病研究中肝損傷和炎癥反應(yīng)是發(fā)生率較高的疾病,研究關(guān)于治療肝損傷及抗炎的藥物有很大的研究前景。本文利用硫代乙酰胺（TAA）誘導(dǎo)斑馬魚肝損傷模型和脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的斑馬魚炎癥模型評(píng)價(jià)了荔枝草乙醇提取物（SPEE）、黃芩素（BA）、槲皮素（Que）和綠原酸（CGA）的抗氧化、抗炎及保肝作用。采用了酶活測(cè)定、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）定量分析、免疫熒光染色、蛋白質(zhì)印跡（Western blot）、瓊脂糖凝膠電泳、PCR及Q-PCR等方法。主要研究結(jié)果如下:1.荔枝草對(duì)LPS刺激的斑馬魚胚胎具有抗氧化作用和抗炎作用。其次,SPEE可顯著減輕成年斑馬魚TAA誘導(dǎo)的肝空泡,脂質(zhì)積聚和肝纖維化。同時(shí),SPEE暴露后NO含量和脂質(zhì)代謝相關(guān)基因ApoE和PPAR-γ含量顯著下調(diào)。從機(jī)制上講,SPEE可以減少肝細(xì)胞凋亡,促進(jìn)TAA誘導(dǎo)模型中轉(zhuǎn)錄因子（Nrf2）從細(xì)胞核向細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)。最后,SPEE可以在H2O2刺激的條件下調(diào)節(jié)各種炎性細(xì)胞...
【文章來(lái)源】：江西師范大學(xué)江西省
【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
荔枝草提取物總離子流圖
23用，發(fā)現(xiàn)TNF-α和IL-1β的相對(duì)mRNA水平以濃度依賴的方式顯著下調(diào)（圖2-6-D）。相反，應(yīng)激誘導(dǎo)的血紅素加氧酶-1（HO-1），在SPEE處理后其表達(dá)水平大大上調(diào)。綜上所述，以上數(shù)據(jù)表明SPEE在斑馬魚胚胎中具有強(qiáng)大的抗氧化劑和抗炎特性。圖2-6SPEE在LPS誘導(dǎo)的斑馬魚胚胎中的抗氧化和抗炎作用Figure2-6Theantioxidantandanti-inflammatoryeffectsofSPEEinLPS-inducedzebrafishembryos2.2.3SPEE對(duì)TAA誘導(dǎo)的成年斑馬魚的肝保護(hù)作用為了進(jìn)一步評(píng)估SPEE對(duì)硫代乙酰胺（TAA）在成年斑馬魚中引起的急性肝損傷的保護(hù)作用。如圖2-7-A所示，通過使用蘇木精和伊紅（H＆E）染色，TAA（5mg/mL）處理72h引起肝損傷顯著增加，肝細(xì)胞中的大脂肪液泡數(shù)目明顯多于對(duì)照組。此外，斑馬魚進(jìn)一步暴露于0.5mg/mLSPEE達(dá)24小時(shí)，其大脂肪液泡和壞死面積明顯減少。另一方面，組織病理學(xué)分析顯示通過油紅O染色，在TAA誘導(dǎo)的組的肝組織中已經(jīng)沉積了大量脂質(zhì)滴。與上述結(jié)果相似，TAA+
24SPEE組中的脂滴數(shù)與TAA刺激組相比顯著下降（圖2-7-B）。此外，本研究還通過Gemori染色檢查了肝纖維化程度，TAA誘導(dǎo)的肝纖維化水平顯著增加，而SPEE大大改善了成年斑馬魚的肝脂肪變性（圖2-7-C）。本研究還檢測(cè)了一氧化氮（NO）的相對(duì)含量。結(jié)果顯示，與對(duì)照組或SPEE暴露組相比，TAA組的NO產(chǎn)量大大增加，TAA+SPEE組的NO水平被顯著抑制（圖2-7-D）。本研究還檢查了SPEE是否影響脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果表明，TAA誘導(dǎo)的斑馬魚經(jīng)SPEE處理后，CytoP450，ApoE和PPAR-γ等基因的相對(duì)mRNA水平也顯著降低（圖2-7-E）�？傊@些結(jié)果進(jìn)一步表明，SPEE對(duì)成年斑馬魚具有有效的抗炎和保肝作用。圖2-7SPEE對(duì)TAA誘導(dǎo)的成年斑馬魚的肝保護(hù)作用Figure2-7HepatoprotectiveeffectsofSPEEintheTAA-inducedadultzebrafish2.2.4SPEE處理后細(xì)胞凋亡和免疫基因表達(dá)為了測(cè)試SPEE是否影響斑馬魚肝臟中的細(xì)胞凋亡，將成年魚暴露于對(duì)照組，SPEE，TAA和TAA+SPEE組，通過TUNEL染色檢測(cè)了凋亡細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)SPEE可以抑制細(xì)胞凋亡，而TAA可以顯著增加肝細(xì)胞的凋亡水平。最重要的是，SPEE可以降低TAA+SPEE組中由TAA誘導(dǎo)的凋亡水平（圖2-8-A）。
本文編號(hào)：2996941
【文章來(lái)源】：江西師范大學(xué)江西省
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【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
荔枝草提取物總離子流圖
23用，發(fā)現(xiàn)TNF-α和IL-1β的相對(duì)mRNA水平以濃度依賴的方式顯著下調(diào)（圖2-6-D）。相反，應(yīng)激誘導(dǎo)的血紅素加氧酶-1（HO-1），在SPEE處理后其表達(dá)水平大大上調(diào)。綜上所述，以上數(shù)據(jù)表明SPEE在斑馬魚胚胎中具有強(qiáng)大的抗氧化劑和抗炎特性。圖2-6SPEE在LPS誘導(dǎo)的斑馬魚胚胎中的抗氧化和抗炎作用Figure2-6Theantioxidantandanti-inflammatoryeffectsofSPEEinLPS-inducedzebrafishembryos2.2.3SPEE對(duì)TAA誘導(dǎo)的成年斑馬魚的肝保護(hù)作用為了進(jìn)一步評(píng)估SPEE對(duì)硫代乙酰胺（TAA）在成年斑馬魚中引起的急性肝損傷的保護(hù)作用。如圖2-7-A所示，通過使用蘇木精和伊紅（H＆E）染色，TAA（5mg/mL）處理72h引起肝損傷顯著增加，肝細(xì)胞中的大脂肪液泡數(shù)目明顯多于對(duì)照組。此外，斑馬魚進(jìn)一步暴露于0.5mg/mLSPEE達(dá)24小時(shí)，其大脂肪液泡和壞死面積明顯減少。另一方面，組織病理學(xué)分析顯示通過油紅O染色，在TAA誘導(dǎo)的組的肝組織中已經(jīng)沉積了大量脂質(zhì)滴。與上述結(jié)果相似，TAA+
24SPEE組中的脂滴數(shù)與TAA刺激組相比顯著下降（圖2-7-B）。此外，本研究還通過Gemori染色檢查了肝纖維化程度，TAA誘導(dǎo)的肝纖維化水平顯著增加，而SPEE大大改善了成年斑馬魚的肝脂肪變性（圖2-7-C）。本研究還檢測(cè)了一氧化氮（NO）的相對(duì)含量。結(jié)果顯示，與對(duì)照組或SPEE暴露組相比，TAA組的NO產(chǎn)量大大增加，TAA+SPEE組的NO水平被顯著抑制（圖2-7-D）。本研究還檢查了SPEE是否影響脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果表明，TAA誘導(dǎo)的斑馬魚經(jīng)SPEE處理后，CytoP450，ApoE和PPAR-γ等基因的相對(duì)mRNA水平也顯著降低（圖2-7-E）�？傊@些結(jié)果進(jìn)一步表明，SPEE對(duì)成年斑馬魚具有有效的抗炎和保肝作用。圖2-7SPEE對(duì)TAA誘導(dǎo)的成年斑馬魚的肝保護(hù)作用Figure2-7HepatoprotectiveeffectsofSPEEintheTAA-inducedadultzebrafish2.2.4SPEE處理后細(xì)胞凋亡和免疫基因表達(dá)為了測(cè)試SPEE是否影響斑馬魚肝臟中的細(xì)胞凋亡，將成年魚暴露于對(duì)照組，SPEE，TAA和TAA+SPEE組，通過TUNEL染色檢測(cè)了凋亡細(xì)胞。發(fā)現(xiàn)SPEE可以抑制細(xì)胞凋亡，而TAA可以顯著增加肝細(xì)胞的凋亡水平。最重要的是，SPEE可以降低TAA+SPEE組中由TAA誘導(dǎo)的凋亡水平（圖2-8-A）。
本文編號(hào)：2996941
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