發(fā)布時(shí)間：2021-01-24 07:10

　　由于目前環(huán)境急劇惡劣,各種災(zāi)害頻發(fā),水稻產(chǎn)量達(dá)到瓶頸,因此對(duì)抗逆性水稻品種的需求越來越強(qiáng)烈。旱稻作為水稻的變種,需水量小,抗逆性強(qiáng),已越來越受到人們的重視與利用,因此進(jìn)行旱稻育種成為我國農(nóng)業(yè)科研熱點(diǎn)。本課題以前期獲得的轉(zhuǎn)抗逆基因APX、8704和PPA的81個(gè)旱稻陽性株系為試驗(yàn)材料,對(duì)其后代進(jìn)行分子鑒定及功能分析。PCR分子鑒定得到54個(gè)候選純合株系;通過田間性狀調(diào)查、復(fù)篩,篩選得到21個(gè)具有優(yōu)良性狀的候選純合株系,分別為8個(gè)矮桿株系和13個(gè)優(yōu)良穗型株系。對(duì)這21個(gè)具有優(yōu)良性狀的候選純合株系進(jìn)行Southern-Blot雜交試驗(yàn),獲得7個(gè)單拷貝株系。對(duì)得到的7個(gè)單拷貝轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行Tail-PCR擴(kuò)增,并對(duì)其產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析,得到6個(gè)單拷貝轉(zhuǎn)基因株系的插入位點(diǎn)結(jié)果。優(yōu)良穗型材料轉(zhuǎn)APX H1株系F-4,目的基因APX插入點(diǎn)為水稻基因組5號(hào)染色體堿基序列的758392 bp處,插入位點(diǎn)在Os05g0114000基因和Os05g0114100基因之間,Os05g0114000基因編碼類PRLI相互作用因子,Os05g0114100基因編碼類核酸內(nèi)切酶/外切酶/磷酸酶家族蛋白。優(yōu)良穗型材料轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：河北科技大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

除草劑噴施前后前植株生長狀態(tài)對(duì)比圖

第2章轉(zhuǎn)基因植株候選純合體的篩選及優(yōu)良性狀分析15小于100%的轉(zhuǎn)基因株系留取種子進(jìn)行后續(xù)大田種植再次進(jìn)行下一代的抗除草劑能力篩選，以為后期試驗(yàn)提供優(yōu)良材料，獲得純合體植株。注：A為除草劑處理前植株生長狀態(tài)；B為除草劑處理后前植株生長狀態(tài)。1、3為待測(cè)轉(zhuǎn)基因株系，2為野生型株系。圖2-2除草劑噴施前后前植株生長狀態(tài)對(duì)比圖2.4.2單株DNA的提取結(jié)果使用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)提取出的旱稻單株DNA的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果如圖2-3所示，M是指該泳道上樣樣品為Marker；數(shù)字1-23是指該泳道上樣樣品是23個(gè)不同的待測(cè)單株DNA。從圖中可以看出，7、21兩個(gè)泳道內(nèi)條帶的亮度很淺，說明這兩個(gè)單株DNA濃度較低，在PCR擴(kuò)增時(shí)要提高模板量；8、11、12、13、14等五個(gè)泳道內(nèi)的條帶的亮度較高，說明這五個(gè)單株DNA的濃度較大，需要進(jìn)行稀釋后使用；其它16個(gè)單株DNA濃度合適，可以用來做后續(xù)的PCR分子鑒定。注：M為Marker，從大到小依次為：2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp；1-23號(hào)為單株DNA。圖2-3單株材料DNA提取結(jié)果

第2章轉(zhuǎn)基因植株候選純合體的篩選及優(yōu)良性狀分析19注：A圖為植株播種60d生長狀態(tài)；B為植株播種80d生長狀態(tài)；C為植株播種100d生長狀態(tài)；D為植株播種120d生長狀態(tài)。1為轉(zhuǎn)基因株系；2為野生型。圖2-8矮桿性狀株系旱稻的穗型性狀是其品質(zhì)以及生產(chǎn)產(chǎn)量的重要組成部分之一，直接影響著旱稻的產(chǎn)量。如圖2-9所示，1為轉(zhuǎn)基因株系，2為野生型株系。A圖中轉(zhuǎn)基因株系為轉(zhuǎn)APXH1材料F-4，其單穗與野生型的單穗進(jìn)行比較，F(xiàn)-4的穗長比野生型的稍長但是不明顯；從單穗粒數(shù)上看，F(xiàn)-4的穗粒數(shù)比野生型的明顯要多。B圖中轉(zhuǎn)基因株系為轉(zhuǎn)8704H2材料F-24，其單穗與野生型的單穗進(jìn)行比較，F(xiàn)-24的穗長和單穗粒數(shù)的數(shù)值都明顯比野生型的大。C圖中轉(zhuǎn)基因株系為轉(zhuǎn)PPAH2材料H-40，其單穗與野生型的單穗進(jìn)行比較，H-40的穗長和單穗粒數(shù)都比野生型的高。從圖中可看出，轉(zhuǎn)基因株系F-4、F-24、H-40的穗型皆比野生型優(yōu)異，可篩選為優(yōu)良穗型株系。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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