茭白黑粉菌（Ustilago esculenta）與菰草（Zizania latifolia）互作在其上部產(chǎn)生膨大結(jié)構(gòu),稱為茭白。茭白是一種重要的水生蔬菜。茭白黑粉菌以菌絲體的形式長期存活在寄主體內(nèi),通過寄主的無性繁殖轉(zhuǎn)移到新的植株中,具有獨(dú)特的生活史。有時,膨大的組織內(nèi)產(chǎn)生大量的冬孢子堆,稱為灰茭。雖然冬孢子可以萌發(fā)產(chǎn)生擔(dān)孢子,但大量的觀察認(rèn)為不同交配型的擔(dān)孢子不能融合產(chǎn)生雙核菌絲,因而不能侵染寄主。研究認(rèn)為,擔(dān)孢子可融合為雙核菌絲,但還沒有充分的證據(jù)證實。因此,本文通過大量的擔(dān)孢子株系交配基因的測定以及人工合成交配基因編碼的蛋白,評價其功能作用。1.茭白黑粉菌的交配型基因表達(dá)分析。利用local blast在對茭白黑粉菌6條MFA基因和3條PRA基因表達(dá)分析后,發(fā)現(xiàn)關(guān)于交配型的基因全部表達(dá),但在浙茭2號中,茭白黑粉菌只含有a2位點單倍體和a3位點單倍體,灰茭黑粉菌只含有a1位點和a3位點單倍體,PRA的基因類型可以作為浙茭2號交配型的鑒定依據(jù)。2.真菌分離及交配型基因的測定。通過浙茭2號灰茭組織分離,獲得6個株系。通過冬孢子萌發(fā)產(chǎn)生擔(dān)孢子及其單孢分離,獲得50個株系。同樣,通過浙茭... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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灰茭黑粉菌雙核菌絲株系PRA1檢測

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章茭白黑粉菌交配型的研究24以灰茭黑粉菌的6個雙核菌絲株系（DH1~6）的DNA為模板，以PRA2-F/PRA2-R為引物，進(jìn)行PCR檢測，發(fā)現(xiàn)6個株系的條帶都不亮，說明沒有PRA2基因。以灰茭黑粉菌的6個雙核菌絲株系（DH1~6）的DNA為模板，以PRA3-F/PRA3-R為引物，進(jìn)行PCR檢測，發(fā)現(xiàn)6個株系的條帶都亮，公司測序之后均與已知PRA3序列一致（圖3.2），說明說明DH1~6株系都含有PRA3基因。圖3.2灰茭黑粉菌雙核菌絲株系PRA3檢測。M：DL2000Marker，泳道1~6（DH1~6），顯示了2239bp的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。Figure3.2DeterminationofPRA3ofdikaryotichyphaeofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-6(DH1~6)showtheamplificationproductof2239bp.根據(jù)PCR結(jié)果及測序序列比對分析，DH1~6包含交配型基因a1位點和a3位點（表3.3）。表3.3灰茭黑粉菌雙核菌絲株系a位點測定Table3.3DeterminationoflocusaofdikaryotichyphaeinU.esculentafromhuijiaoplantsa位點類型a1a2a3PRA1MFA1.2MFA1.3PRA2MFA2.1MFA2.3PRA3MFA3.1MFA3.2DH1+++－－－+++DH2+++－－－+++DH3+++－－－+++DH4+++－－－+++DH5+++－－－+++DH6+++－－－+++*+表示檢測到基因片段；—表示未檢測到基因片段。3.2.2.2灰茭黑粉菌單孢株系a位點類型PCR檢測以灰茭黑粉菌的50個單孢株系（H1~50）的DNA為模板，以PRA1-F/PRA1-

浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章茭白黑粉菌交配型的研究25R為引物，進(jìn)行PCR檢測，發(fā)現(xiàn)只有H9、H14、H23、H36和H43條帶亮，將條帶亮的樣本送去測序，公司測序結(jié)果均與已知PRA1序列一致（圖3.3），說明含有PRA1基因。圖3.3灰茭黑粉菌單孢株系PRA1檢測。M：DL2000Marker，泳道1-50（H1-50），泳道（9,14,23,36,43）顯示了1277bp的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。Figure3.3DeterminationofPRA1genesfromsingle-sporeisolatesofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-50(H1-50),Lane（9,14,23,36,43）showtheamplificationproductof1127bp.以灰茭黑粉菌的50個單孢株系（H1~50）DNA為模板，以PRA2-F/PRA2-R為引物，進(jìn)行PCR檢測，沒有亮的條帶，說明沒有PRA2基因。以灰茭黑粉菌的50個單孢株系（H1~50）的DNA為模板，以PRA3-F/PRA3-R為引物，進(jìn)行PCR檢測，發(fā)現(xiàn)只有H9、H14、H23、H36和H43條帶不亮，其余條帶都亮，將條帶亮的樣本送去測序，公司測序結(jié)果均與已知PRA3序列一致，說明含有PRA3基因（圖3.4）。圖3.4灰茭黑粉菌單孢株系PRA3檢測。M：DL2000Marker，泳道1-50（H1-50），泳道（1~8,10~13,15~22,24~35,37~42,44~50）顯示了2239bp的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。Figure3.4DeterminationofPRA3genesfromsingle-sporeisolatesofU.esculentafromhuijiaoplants.M:2000bpMarker,Lane1-50(H1-50),Lane（1~8,10~13,15~22,24~35,37~42,44~50）showtheamplificationproductof2239bp.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2984804