水稻（Oryza sativa L.）是重要的糧食作物之一,其抽穗期是影響水稻種植和生產(chǎn)的重要因素之一,它決定著水稻品種種植的生態(tài)區(qū)域和季節(jié)適應(yīng)性。水稻抽穗期是由多種基因控制的數(shù)量性狀,受到水稻本身的遺傳因素以及環(huán)境因子的共同影響。Hdl是水稻抽穗期基因之一,是擬南芥CO的同源基因。與擬南芥中CO基因促進(jìn)開花的作用不同,水稻中的Hdl基因具有雙重作用：在短日照條件下促進(jìn)抽穗,長(zhǎng)日照條件下延遲抽穗。CRISPR/Cas系統(tǒng)是近年來新的基因組編輯技術(shù),是利用RNA引導(dǎo)Cas9蛋白核酸酶在特定的基因組位點(diǎn)上進(jìn)行切割和修飾。與ZFN、TALEN這兩種基因組編輯技術(shù)相比,CRISPR/Cas系統(tǒng)的操作性更高,突變效率更高,而且容易在第一代得到純合的突變體,理論上可在不同的基因位點(diǎn)同時(shí)引入多個(gè)突變。CRISPR/Cas9系統(tǒng)是組分較簡(jiǎn)單的、目前研究的最深入的Type II型CRISPR/Cas系統(tǒng)。本實(shí)驗(yàn)通過構(gòu)建Hdl的CRISPR/Cas9敲除載體,導(dǎo)入特早熟粳稻品種Kitaake、秈稻品種珍汕97以獲得hdl突變體。CRISPR/Cas9的效果是由測(cè)序檢測(cè)轉(zhuǎn)基因植株Hdl基因是否突變,突變方式... 

【文章來源】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)四川省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說明
一 文獻(xiàn)綜述
    1 基因組編輯技術(shù)研究進(jìn)展
        1.1 鋅指核酸酶（ZFN）技術(shù)
        1.2 TALENs基因組編輯技術(shù)
        1.3 CRISPR/Cas基因組編輯技術(shù)
    2 水稻抽穗基因Hd1的研究進(jìn)展
    3 論文研究的目的與意義
二 材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 水稻材料
        1.2 質(zhì)粒載體和菌株種類
        1.3 主要試劑
        1.4 培養(yǎng)基配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 生物信息學(xué)查詢及分析
        2.2 Hd1的CRISPR/Cas9載體構(gòu)建
        2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)水稻pCAMBIA1300表達(dá)載體的轉(zhuǎn)化
        2.4 轉(zhuǎn)基因植株的潮霉素檢測(cè)
        2.5 CRISPR/Cas9的檢測(cè)
三 結(jié)果與分析
    1 Hd1生物信息學(xué)分析及CRISPR引物設(shè)計(jì)
        1.1 Hd1序列分析
        1.2 Hd1中CRISPR位點(diǎn)（sgRNA）的設(shè)計(jì)
    2 表達(dá)載體pCAMBIA1300::Hd1sgRNA::Cas9的構(gòu)建
        2.1 Hd1sgRNA::Cas9載體構(gòu)建
        2.2 pCAMBIA1300::Hd1sgRNA::Cas9表達(dá)載體的構(gòu)建與檢測(cè)
    3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)水稻表達(dá)載體pCAMBIA1300的轉(zhuǎn)化
        3.1 農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化及鑒定
        3.2 水稻轉(zhuǎn)基因植株的獲得
        3.3 轉(zhuǎn)基因植株T0代的潮霉素陽(yáng)性檢測(cè)
        3.4 CRIPSR/Cas9效果檢測(cè)
        3.5 突變體植株的表型鑒定
四 小結(jié)與討論
    1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)珍汕97的遺傳轉(zhuǎn)化
    2 CRISPR/Cas系統(tǒng)在水稻中產(chǎn)生突變的特點(diǎn)、效率、特異性
    3 CRISPR/Cas9系統(tǒng)潛在的脫靶效應(yīng)
    4 突變體植株的表型分析
    5 實(shí)驗(yàn)展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]秈稻珍汕97B成熟胚誘導(dǎo)再生體系的建立及優(yōu)化[J]. 羅天寬,張小玲,裘波音,朱世楊,吳海濤,靳贊革,唐征,劉慶,林恭松.  雜交水稻. 2013(06)
[2]分子標(biāo)記在動(dòng)物育種中的應(yīng)用[J]. 劉雙虎,胡海燕.  養(yǎng)殖技術(shù)顧問. 2013(09)
[3]CRISPR/Cas9新型基因打靶系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J]. 李輝,施振旦.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(04)
[4]TALEN or Cas9-Rapid,Efficient and Specific Choices for Genome Modifications[J]. Chuanxian Wei,Jiyong Liu,Zhongsheng Yu,Bo Zhang,Guanjun Gao,Renjie Jiao.  Journal of Genetics and Genomics. 2013(06)
[5]基因組編輯技術(shù)在植物中的研究進(jìn)展與應(yīng)用前景[J]. 謝科,饒力群,李紅偉,安學(xué)麗,方才臣,萬向元.  中國(guó)生物工程雜志. 2013(06)
[6]人工鋅指核酸酶介導(dǎo)的基因組定點(diǎn)修飾技術(shù)[J]. 肖安,胡瑩瑩,王唯曄,楊志芃,王展翔,黃鵬,佟向軍,張博,林碩.  遺傳. 2011(07)
[7]水稻成熟胚組織培養(yǎng)研究[J]. 張玲,謝崇華,李衛(wèi)鋒.  雜交水稻. 2002(02)
[8]根癌土壤桿菌介導(dǎo)的水稻高效轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)基因植株的高頻再生[J]. 黃健秋,衛(wèi)志明,安海龍,徐淑平,章冰.  植物學(xué)報(bào). 2000(11)



本文編號(hào)：2941053