氯喹,是一種廣泛用于預(yù)防和治療瘧疾以及治療自身免疫性疾病的基礎(chǔ)公共衛(wèi)生體系必備藥物,被發(fā)現(xiàn)具有一定抗病毒作用,同時(shí)還是一種常用的自噬抑制劑,近期更是因其在新冠肺炎病毒治療中的爭(zhēng)議性作用而備受關(guān)注。然而,有關(guān)氯喹在水生生物中的相關(guān)研究還非常有限。對(duì)于水體中氯喹對(duì)魚類不同器官的影響及其作用機(jī)制的研究尚未展開,給系統(tǒng)理解魚類對(duì)氯喹的自噬響應(yīng)機(jī)制及水體中氯喹的潛在環(huán)境威脅帶來巨大障礙。本研究以成年斑馬魚為對(duì)象,探討不同濃度氯喹對(duì)斑馬魚行為學(xué)、存活率的影響,確定96h的半致死濃度LC50,比較不同濃度氯喹對(duì)鰓、脾、精巢和卵巢組織的亞顯微結(jié)構(gòu)影響,同時(shí)比較研究斑馬魚鰓、肝、脾、胃、腸、腎、心、肌、皮、眼、腦、精巢和卵巢13個(gè)組織中自噬相關(guān)基因LC3/BECN1和Cx43對(duì)高中低濃度氯喹的響應(yīng)模式,包括最快響應(yīng)時(shí)刻、表達(dá)峰值出現(xiàn)時(shí)刻以及表達(dá)量升高（降低）倍數(shù)。揭示不同組織對(duì)梯度濃度氯喹的響應(yīng)規(guī)律,獲得最適靶組織及對(duì)應(yīng)最適檢測(cè)時(shí)間。從而從行為學(xué)、存活率、組織學(xué)和分子生物學(xué)層次共同闡明斑馬魚對(duì)氯喹的自噬響應(yīng)機(jī)制,為進(jìn)一步研究氯喹對(duì)魚類的影響提供重要基礎(chǔ)數(shù)據(jù),同時(shí)為闡明水體中氯喹的潛在環(huán)境影響提供科學(xué)依據(jù)... 

【文章來源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：93 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度氯喹處理下斑馬魚的組織電鏡圖

32理1h時(shí)LC3的表達(dá)量顯著升高，于4h達(dá)到峰值（約是0h表達(dá)量的195倍，p＜0.05），后于6h回落至1-2h水平。脾組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量在2.5mg/mL氯喹處理后1h和4h均顯著升高（p＜0.05），并于4h答到峰值（約為0h表達(dá)量的55倍），于6h死亡時(shí)出現(xiàn)下降趨勢(shì)，但不顯著。卵巢組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量在2.5mg/mL氯喹處理后持續(xù)升高，于2h顯著升高，并于4h達(dá)到峰值，約是0h表達(dá)量的936倍（p＜0.05），后于6h出現(xiàn)下降趨勢(shì)但不顯著。精巢組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量總體上呈先升高后下降變化趨勢(shì)。在2.5mg/mL氯喹處理后0.5h顯著升高（p＜0.05），于2h再次顯著升高并達(dá)到峰值，后于4h有所下降，并于6h降至0.5h表達(dá)水平附近。胃組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量總體上呈“M”型變化趨勢(shì)。在2.5mg/mL氯喹處理后0.5h顯著升高，1h回落，后于2h又顯著升高（p＜0.05）并于4h達(dá)到峰值，最后于6h回落至0.5h表達(dá)量水平附近。腸組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量先升高后降低，在2.5mg/mL氯喹處理的第0.5h顯著升高，于2h又顯著升高并達(dá)到峰值（p＜0.05），后于4h回落至初始水平。圖3-22.5mg/mL氯喹處理下斑馬魚鰓、脾、卵巢、精巢、胃和腸組織中LC3的表達(dá)變化（p＜0.05）Fig.3-2RelativemRNAexpressionofLC3ingill,spleen,ovary,testis,stomachandintestineofDanioreriounder2.5mg/mLCQ(p＜0.05)如圖3-3所示，肝組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量也存在先升高后降低的變化趨勢(shì)，僅在1h顯著升高（p＜0.05），后隨即于2h回落至初始水平。腎組織中LC3的相對(duì)表

33達(dá)量先升高后降低，在2.5mg/mL氯喹處理后0.5h顯著升高（p＜0.05），并于2h達(dá)到峰值，后于4h回落至初始水平附近。心組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量在2h顯著升高（p＜0.05），于4h再一次顯著升高并達(dá)到峰值，后在6h出現(xiàn)下降趨勢(shì)但不顯著。肌肉組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量同樣存在先升高后降低模式，在2.5mg/mL氯喹處理后0.5h顯著升高，在1h持續(xù)升高并達(dá)到峰值（p＜0.05），后于2h回落，并在第6h降至初始水平。皮膚組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量在2.5mg/mL氯喹處理后0.5h顯著降低，約為0h表達(dá)量的1/3，于1h繼續(xù)顯著下降（p＜0.05），而后保持相對(duì)穩(wěn)定直至斑馬魚全部死亡。眼組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量在2.5mg/mL氯喹處理后0.5h顯著升高，隨后持續(xù)升高并于4h達(dá)到峰值（p＜0.05），后于6h出現(xiàn)下降趨勢(shì)但不顯著。腦組織中LC3的相對(duì)表達(dá)量總體上呈下降趨勢(shì)。在0.5h略微升高后立即于1h顯著降低至初始水平以下，約為0h表達(dá)量的1/3，而后于2h有所升高（p＜0.05），于4h再次降低直至6h斑馬魚全部死亡。值得一提的是，自1h起LC3的表達(dá)量一直低于初始水平。圖3-32.5mg/mL氯喹處理下斑馬魚肝、腎、心、肌肉、皮膚、眼和腦組織中LC3的表達(dá)變化（p＜0.05）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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