溶藻弧菌廣泛分布于世界各地的海水及河口處,存在于多種海洋動(dòng)物的體表及體內(nèi),是海洋養(yǎng)殖環(huán)境中最常見(jiàn)的條件致病菌之一。近年來(lái),由于氣候變化及海水溫度上升的影響,溶藻弧菌感染的發(fā)病率顯著增加,給我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本課題組早期從自然發(fā)病的養(yǎng)殖大黃魚(yú)中分離出具有較強(qiáng)毒性的溶藻弧菌ND-01菌株,并對(duì)其進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析,發(fā)現(xiàn)了一種具有毒力調(diào)控作用的非編碼RNA Vvrr1（Vibrio virulence regulatory RNA 1）。本研究通過(guò)構(gòu)建Vvrr1過(guò)表達(dá)菌株并進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,發(fā)現(xiàn)多種與毒力相關(guān)的Vvrr1潛在靶基因,其中pykF及l(fā)euO在Vvrr1參與的溶藻弧菌毒力調(diào)控機(jī)制中發(fā)揮著重要的樞紐作用。此外,我們不僅利用GFP報(bào)告基因分析技術(shù)明確了Vvrr1與pykF的作用方式,還利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序及Chip-seq預(yù)測(cè)、篩選了LeuO靶基因及其靶標(biāo)ncRNA,為Vvrr1、pykF、leuO參與調(diào)控溶藻弧菌毒力的機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。通過(guò)以上研究,我們?cè)谌茉寤【锌偨Y(jié)出兩種Vvrr1參與毒力調(diào)控的可能模式:（1）以“Vvrr1-pykF”為主軸的與粘附相關(guān)的毒力調(diào)控... 

【文章來(lái)源】：集美大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：106 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Vvrr1的結(jié)構(gòu)與序列

集美大學(xué)碩士學(xué)位論文新型非編碼RNAVvrr1參與溶藻弧菌毒力調(diào)控的機(jī)制研究34離子及低pH脅迫的菌株中，Vvrr1的表達(dá)水平顯著增加，該結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果相一致（圖3-2）。圖3-2Vvrr1在脅迫條件下的表達(dá)水平注：由溴化乙錠染色的核糖體(r)RNA帶作為負(fù)載對(duì)照（上排泳道）。3.1.3Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建以及粘附能力的檢驗(yàn)根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果可知，Vvrr1表達(dá)水平的升高伴隨著菌株粘附能力的減弱，因此我們認(rèn)為在脅迫條件下，Vvrr1可能介導(dǎo)溶藻弧菌的粘附能力調(diào)控。為了證實(shí)該猜想，我們構(gòu)建了Vvrr1敲除菌株并進(jìn)行PCR驗(yàn)證（圖3-3.a）。同時(shí)我們?cè)谕让{迫條件下，對(duì)溶藻弧菌野生菌株和Vvrr1敲除菌株進(jìn)行粘附能力的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與野生菌株相比，敲除菌株的粘附能力顯著增加（圖3-3.b）。以上結(jié)果顯示Vvrr1無(wú)論是高表達(dá)還是敲除，都會(huì)對(duì)溶藻弧菌的粘附能力產(chǎn)生一定影響，這說(shuō)明Vvrr1在調(diào)控溶藻弧菌的粘附機(jī)制中扮演著重要角色。圖3-3Vvrr1表達(dá)水平的驗(yàn)證及粘附能力的檢測(cè)注：（a）Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建與驗(yàn)證，其中WT及△Vvrr1都使用Vvrr1敲除的上下游引物進(jìn)行擴(kuò)增；（b）對(duì)WT及V△vrr1菌株粘附能力的比較（**P<0.01）。

集美大學(xué)碩士學(xué)位論文新型非編碼RNAVvrr1參與溶藻弧菌毒力調(diào)控的機(jī)制研究34離子及低pH脅迫的菌株中，Vvrr1的表達(dá)水平顯著增加，該結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果相一致（圖3-2）。圖3-2Vvrr1在脅迫條件下的表達(dá)水平注：由溴化乙錠染色的核糖體(r)RNA帶作為負(fù)載對(duì)照（上排泳道）。3.1.3Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建以及粘附能力的檢驗(yàn)根據(jù)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果可知，Vvrr1表達(dá)水平的升高伴隨著菌株粘附能力的減弱，因此我們認(rèn)為在脅迫條件下，Vvrr1可能介導(dǎo)溶藻弧菌的粘附能力調(diào)控。為了證實(shí)該猜想，我們構(gòu)建了Vvrr1敲除菌株并進(jìn)行PCR驗(yàn)證（圖3-3.a）。同時(shí)我們?cè)谕让{迫條件下，對(duì)溶藻弧菌野生菌株和Vvrr1敲除菌株進(jìn)行粘附能力的檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與野生菌株相比，敲除菌株的粘附能力顯著增加（圖3-3.b）。以上結(jié)果顯示Vvrr1無(wú)論是高表達(dá)還是敲除，都會(huì)對(duì)溶藻弧菌的粘附能力產(chǎn)生一定影響，這說(shuō)明Vvrr1在調(diào)控溶藻弧菌的粘附機(jī)制中扮演著重要角色。圖3-3Vvrr1表達(dá)水平的驗(yàn)證及粘附能力的檢測(cè)注：（a）Vvrr1敲除菌株的構(gòu)建與驗(yàn)證，其中WT及△Vvrr1都使用Vvrr1敲除的上下游引物進(jìn)行擴(kuò)增；（b）對(duì)WT及V△vrr1菌株粘附能力的比較（**P<0.01）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]海水養(yǎng)殖中水產(chǎn)動(dòng)物主要致病弧菌研究進(jìn)展[J]. 王鳳青,孫玉增,任利華,姜向陽(yáng),姜芳,崔艷梅,劉麗娟.  中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn). 2018(02)
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[6]致病溶藻弧菌脂多糖對(duì)點(diǎn)帶石斑魚(yú)毒性和免疫原性的影響[J]. 徐先棟,謝珍玉,王世鋒,宣雄智,周永燦.  海洋科學(xué). 2010(03)
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博士論文
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碩士論文
[1]溶藻弧菌攝鐵系統(tǒng)相關(guān)基因的克隆、表達(dá)及功能分析[D]. 薛麗麗.廣東海洋大學(xué) 2014
[2]6種水產(chǎn)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)常見(jiàn)弧菌抗原芯片檢測(cè)技術(shù)的建立[D]. 王欣欣.中國(guó)海洋大學(xué) 2012
[3]溶藻弧菌毒力相關(guān)基因的檢測(cè)與保藏方法的研究[D]. 韓佳麗.廣東海洋大學(xué) 2011
[4]細(xì)菌生物膜的形成和研究注射用雙黃連對(duì)細(xì)菌生物膜的影響[D]. 王坤.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) 2009
[5]致病性溶藻弧菌對(duì)大黃魚(yú)粘液的粘附研究[D]. 陳強(qiáng).中國(guó)海洋大學(xué) 2006



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