硼鋁互作下酸柚葉片cDNA-AFLP分析
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【摘要】:鋁(A1)毒害是許多熱帶和亞熱帶酸性土壤作物生長的最主要的限制因素,對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)造成了巨大危害。越來越多的研究表明外源施用硼(B)肥可有效地緩解植物鋁毒害。但是目前有關(guān)硼誘導(dǎo)緩解植物鋁毒害的分子機制的報道很少。為了探究植物中硼緩解鋁毒的分子機制,本研究以酸柚(Citrus grandis)實生苗為試驗材料,每隔一天施一次營養(yǎng)液,移栽后6周開始進行兩個硼水平(2.5或20 μM H3BO3)和兩個鋁A1水平(0或1.2 rnM AlC13·6H2O)的硼鋁互作處理,處理18周后測定植株生物量和葉片硼鋁含量,采集葉片,提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,最后進行cDNA-AFLP (cDNA-Amplified fragment length polymorphic)分析。主要結(jié)果如下:1、鋁毒導(dǎo)致酸柚實生苗生長受抑制。在不加鋁處理的植株中,供硼不會顯著的影響植株生長;但是在加鋁處理的植株中,供20μM B的植株干重(DW)顯著高于2.5心MμB植株。同時,鋁毒還增加了葉片鋁和硼的含量。在加鋁處理的植株中,供2.5μMB植株葉片的鋁含量顯著高于20μMB的葉片;不加鋁處理的植株,兩個硼水平處理葉片的鋁含量沒有顯著差異。無論是加Al還是不加A1處理的葉片中,供20μMB處理的葉片硼含量均高于2.5μMB處理的葉片。2、鋁毒降低了酸柚葉片CO2同化作用、氣孔導(dǎo)度和蒸騰作用,卻增加了葉片胞間CO2濃度。在加鋁處理的植株中,20μMB處理的葉片與2.5μM B處理的葉片相比具有更高的CO2同化作用和更低的胞間CO2濃度,然而兩個硼水平處理葉片的氣孔導(dǎo)度和蒸騰作用沒有顯著的差異。在不加鋁處理的植株中,2.5 μMB和20μMB處理的酸柚葉片的CO2同化作用、氣孔導(dǎo)度、蒸騰作用和葉片胞間CO2濃度這四項葉片氣體交換相關(guān)參數(shù)都沒有顯著差異。3、我們用cDNA-AFLP技術(shù)從硼鋁互作酸柚實生苗的葉片中成功回收了196條基因片段(TDFs),測序成功179條TDFs,最后得到127條差異表達的TDFs。這些差異基因功能主要涉及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)運、能量代謝、核酸代謝、氨基酸和蛋白代謝、細胞壁和細胞骨架代謝、脂質(zhì)代謝和脅迫響應(yīng)等幾方面。4、B緩解葉片鋁毒害的分子機制可能與下面幾方面相關(guān):(a)觸發(fā)多重信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,如:Ca2+信號和蛋白質(zhì)磷酸化與脫磷酸化以及其他[如:蔗糖誘導(dǎo)受損1(Impaired sucrose inductionl, ISIl)]等;(b)增加葉片轉(zhuǎn)運相關(guān)基因的表達,如:類GTP結(jié)合核酸蛋白Ran-3和柑橘蔗糖轉(zhuǎn)運1;(c)激活能量生產(chǎn)有關(guān)的基因,如:ATP合成酶CFo亞單位I和NADH質(zhì)體醌氧化還原酶等;(d)提高了葉片氨基酸的累積[如:假定的GDU2 (glutamine dumper 2)和類天冬酰胺合成酶(谷氨酰胺水解)1]和蛋白質(zhì)的降解(如:羧基末端肽酶、類AMSH泛素硫脂酶1和類多聚泛素4)。此外,參與核酸代謝的[如:三角狀五肽重復(fù)(PPR)蛋白、類Copia-typepol多聚蛋白和PIF/Ping-Pong家族植物轉(zhuǎn)座酶]以及脅迫響應(yīng)[如:早期脫水響應(yīng)基因(Early-responsive to dehydration, ERD3)和類RPM1互作蛋白4)]的基因也在硼緩解葉片鋁毒中起重要作用。
【關(guān)鍵詞】:鋁毒 硼 酸柚葉片 硼鋁互作 cDNA-AFLP
【學(xué)位授予單位】:福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:S666.3
【目錄】:
- 摘要6-8
- Abstract8-10
- 第一章 引言10-17
- 1 鋁毒對植物生長發(fā)育的影響10-12
- 2 鋁毒對植物生理生化的影響12-13
- 3 硼與植物鋁毒害的關(guān)系13-14
- 4 cDNA-AFLP技術(shù)特點及應(yīng)用14-16
- 5 立題意義16-17
- 第二章 材料與方法17-23
- 1 試驗材料與處理17
- 2 方法17-23
- 2.1 植株干重(DW)和葉片鋁、硼濃度的測定17-18
- 2.2 葉片氣體交換相關(guān)參數(shù)的測定18
- 2.3 RNA的提取,cDNA的合成和cDNA-AFLP分析18-21
- 2.4 熒光定量PCR(qRT-PCR)驗證21-22
- 2.5 試驗設(shè)計和統(tǒng)計分析22-23
- 第三章 結(jié)果與分析23-36
- 1 植物生長和葉片中鋁、硼含量23-25
- 2 葉片氣體交換25
- 3 葉片cDNA-AFLP差異基因表達25-35
- 4 用qRT-PCR驗證cDNA-AFLP分析數(shù)據(jù)35-36
- 第四章 討論36-49
- 1 硼緩解酸柚實生苗鋁毒害36
- 2 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因36-39
- 3 轉(zhuǎn)運基因39-40
- 4 碳水化合物和能量代謝基因40-42
- 5 核酸代謝基因42-43
- 6 氨基酸和蛋白代謝基因43-45
- 7 細胞壁和細胞骨架代謝基因45-46
- 8 脂質(zhì)代謝基因46
- 9 脅迫應(yīng)答基因46-47
- 10 其他基因47-49
- 第五章 結(jié)論49-51
- 參考文獻51-68
- 在學(xué)期間發(fā)表的論文68-69
- 致謝69
【相似文獻】
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本文編號:289175
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