少棘巨蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L.Koch為《中國藥典》收載蜈蚣藥材唯一基原。對(duì)野生資源的依賴導(dǎo)致其出現(xiàn)供不應(yīng)求的局面,人工養(yǎng)殖一直未有成熟技術(shù)報(bào)導(dǎo)。而在市場(chǎng)流通過程中,其體長(zhǎng)是影響蜈蚣藥材價(jià)格的主要因素,多棘巨蜈蚣Scolopendra subspinipes subspinipes因與少棘巨蜈蚣外形相似但體長(zhǎng)較長(zhǎng),在市場(chǎng)流通過程中多混為蜈蚣藥材高價(jià)銷售。少棘巨蜈蚣所在的唇足綱含有三千多個(gè)物種,普遍富含毒液,已成為藥物研發(fā)的重要資源,但唇足綱所屬的各蜈蚣目之間在形態(tài)分類學(xué)存在明顯的爭(zhēng)議,一定程度上限制了毒液資源的合理開發(fā)。另外,少棘巨蜈蚣資源嚴(yán)重減少和部分區(qū)域逐漸枯竭現(xiàn)狀的出現(xiàn),傳統(tǒng)依賴于野生捕捉已難以滿足市場(chǎng)需求,而隨著人工養(yǎng)殖技術(shù)的成熟,優(yōu)良蜈蚣品種的選育、推廣已成為推廣蜈蚣養(yǎng)殖的重要舉措。本研究針對(duì)蜈蚣藥材在鑒定、分類和養(yǎng)殖過程中存在的問題,分別采用以下方法:1)對(duì)蜈蚣野生習(xí)性進(jìn)行細(xì)心觀察,總結(jié)藥農(nóng)多年的養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)并歸納了一套標(biāo)準(zhǔn)化的蜈蚣養(yǎng)殖過程;并進(jìn)一步補(bǔ)齊蜈蚣藥材商品規(guī)格等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的缺失,綜合文獻(xiàn)梳理、產(chǎn)地調(diào)研和市場(chǎng)調(diào)研結(jié)果,理清蜈蚣市場(chǎng)流通現(xiàn)狀和商品規(guī)格等級(jí)沿革,制定標(biāo)準(zhǔn)草案,征求專家意見反饋的方式制定了蜈蚣藥材商品規(guī)格等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。2)對(duì)少棘和多棘巨蜈蚣線粒體COI序列進(jìn)行比對(duì),根據(jù)變異位點(diǎn)情況采用LAMP Designer軟件設(shè)計(jì)了一套少棘巨蜈蚣LAMP引物,在恒溫條件下考察了引物的靈敏度和特異性。3)針對(duì)唇足綱存在的形態(tài)分類學(xué)爭(zhēng)議,采用Illumina二代測(cè)序技術(shù)對(duì)少棘巨蜈蚣線粒體基因組進(jìn)行測(cè)序、組裝,結(jié)合唇足綱已經(jīng)公布的7種其他蜈蚣線粒體基因組進(jìn)行比對(duì)、構(gòu)建基于13個(gè)蛋白編碼基因唇足綱ML系統(tǒng)發(fā)育樹。4)結(jié)合養(yǎng)殖過程中總結(jié)的經(jīng)驗(yàn)和蜈蚣本草考證發(fā)現(xiàn)的蜈蚣存在“紅足”和“黃足”兩種性狀以及市場(chǎng)流通的蜈蚣藥材大部分來源于湖北和浙江的特點(diǎn),收集了來自于湖北和浙江兩個(gè)主產(chǎn)區(qū)的紅足與黃足蜈蚣共9條,采用轉(zhuǎn)錄組聯(lián)合蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)湖北黃足蜈蚣(HY)、湖北紅足蜈蚣(HR)和浙江紅足蜈蚣(ZR)進(jìn)行比較分析,并通過生物信息學(xué)分析挖掘在蜈蚣生長(zhǎng)過程中的抗性蛋白。采用上述方法,獲得的主要結(jié)果和討論如下:1.蜈蚣獨(dú)特的生長(zhǎng)習(xí)性和對(duì)環(huán)境的嚴(yán)格要求是限制人工養(yǎng)殖的主要障礙,蜈蚣作為夜間活動(dòng)動(dòng)物,每年4-5月份交配,7-8月份產(chǎn)卵,9月份孵化成為幼蜈蚣。并且為滿足蜈蚣群居的特性,設(shè)計(jì)了雞蛋托狀專用養(yǎng)殖模具,將新鮮食物釘在固定的木板上有效避免蜈蚣疾病的產(chǎn)生和傳播。根據(jù)文獻(xiàn)梳理、市場(chǎng)調(diào)研和產(chǎn)地調(diào)研結(jié)果,蜈蚣藥材目前有蜈蚣條和蜈蚣皮兩種商品規(guī)格,蜈蚣條根據(jù)體長(zhǎng)分為三個(gè)等級(jí),蜈蚣皮作統(tǒng)貨銷售。2.針對(duì)于少棘巨蜈蚣和偽品多棘巨蜈蚣COI序列變異位點(diǎn),設(shè)計(jì)出一套含有2條外引物、2條內(nèi)引物和2條環(huán)引物的特異性LAMP引物,該引物可在65℃恒溫條件下與少棘巨蜈蚣特異性結(jié)合,30 min內(nèi)少棘巨蜈蚣反應(yīng)體系由紫色變?yōu)樘焖{(lán)色,而偽品多棘巨蜈蚣顯紫色不變,同時(shí),該反應(yīng)靈敏性較高,可以檢測(cè)到的少棘巨蜈蚣DNA達(dá)到皮克級(jí)別。3.采用Illumina二代測(cè)序技術(shù)對(duì)少棘巨蜈蚣線粒體基因組進(jìn)行了成功組裝,線粒體基因組全長(zhǎng)15 011bp,由13個(gè)蛋白編碼基因、14個(gè)tRNA和2個(gè)rRNA基因組成,且發(fā)現(xiàn)9個(gè)短片段重復(fù)序列(SSR)變異位點(diǎn),ML系統(tǒng)發(fā)育樹顯示,蚰蜒目作為獨(dú)立的一支,而在另一支內(nèi)部,石蜈蚣目和地蜈蚣目顯示了更近的親緣關(guān)系,少棘巨蜈蚣所在的蜈蚣目則作為石蜈蚣目與地蜈蚣目的姊妹群存在。4.轉(zhuǎn)錄組比較分析發(fā)現(xiàn),湖北黃足蜈蚣(HY)與湖北紅足蜈蚣(HR)具有更為相似的基因表達(dá)情況,僅存在6個(gè)顯著性差異表達(dá)基因,而湖北紅足蜈蚣(HR)與浙江紅足蜈蚣(ZR)共有1579個(gè)差異表達(dá)基因。蛋白質(zhì)總量顯示湖北紅足蜈蚣(HY)與浙江紅足蜈蚣(ZR)均比湖北黃足蜈蚣(HY)具有更高的蛋白總量;與湖北蜈蚣相比,兩個(gè)病毒防御蛋白在浙江紅足蜈蚣(ZR)具有更高的表達(dá)水平。綜上所述,本研究針對(duì)于少棘巨蜈蚣在流通、應(yīng)用和人工養(yǎng)殖過程中所面臨的問題,總結(jié)了一套標(biāo)準(zhǔn)的、具有大規(guī)模推廣價(jià)值的養(yǎng)殖技術(shù),還制訂了蜈蚣藥材商品規(guī)格等級(jí)中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)用以引導(dǎo)蜈蚣藥材市場(chǎng)流通。將LAMP快速檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用于蜈蚣藥材檢測(cè),有望進(jìn)一步應(yīng)用于市場(chǎng)快速檢測(cè)蜈蚣藥材真?zhèn)巍＞�粒體基因組的組裝和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建為唇足綱分類提出了更為豐富的數(shù)據(jù)支撐。轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組結(jié)果顯示了在少棘巨蜈蚣生長(zhǎng)和進(jìn)化過程中,區(qū)域環(huán)境因素相比于蜈蚣足部顏色具有更大的影響,紅足蜈蚣具有比黃足蜈蚣更高的蛋白含量,病毒防御蛋白的在不同蜈蚣之間的差異表達(dá)對(duì)于指導(dǎo)蜈蚣優(yōu)良品種選育具有重要的參考意義。
【學(xué)位單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：S899.9
【部分圖文】：

蜈蚣標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖與多組學(xué)品質(zhì)評(píng)價(jià)研究日清晨將木板取出，對(duì)木板進(jìn)行清洗消毒，丟棄食物殘?jiān)�。圖1-1蜈蚣養(yǎng)殖池日間記錄Figure1-1TheappearanceofapondwithS.mutilans。圖1-2雞蛋托狀養(yǎng)殖模具示意圖和形態(tài)圖Figure1-2.S.mutilanslieintheirspecialnest.在蜈蚣的活動(dòng)季節(jié)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)蜈蚣的活動(dòng)觀察，在夜間縮小手電筒光圈對(duì)蜈蚣進(jìn)行觀察，觀察其健康狀況（體表顏色、行動(dòng)、進(jìn)食等），交配情況以及飼養(yǎng)池的安全。如發(fā)現(xiàn)蜈蚣個(gè)體異常，應(yīng)及時(shí)記錄并單獨(dú)飼養(yǎng)觀察，待確認(rèn)正常后再放回飼養(yǎng)池。因?yàn)轵隍紝?duì)環(huán)境具有較高的要求，蜈蚣飼養(yǎng)池的溫度應(yīng)保持在22-30℃之間，空氣相對(duì)濕度60%-70%，飼養(yǎng)土濕度維持在15%-20%；尤6

蜈蚣標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖與多組學(xué)品質(zhì)評(píng)價(jià)研究日清晨將木板取出，對(duì)木板進(jìn)行清洗消毒，丟棄食物殘?jiān)D1-1蜈蚣養(yǎng)殖池日間記錄Figure1-1TheappearanceofapondwithS.mutilans。圖1-2雞蛋托狀養(yǎng)殖模具示意圖和形態(tài)圖Figure1-2.S.mutilanslieintheirspecialnest.在蜈蚣的活動(dòng)季節(jié)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)蜈蚣的活動(dòng)觀察，在夜間縮小手電筒光圈對(duì)蜈蚣進(jìn)行觀察，觀察其健康狀況（體表顏色、行動(dòng)、進(jìn)食等），交配情況以及飼養(yǎng)池的安全。如發(fā)現(xiàn)蜈蚣個(gè)體異常，應(yīng)及時(shí)記錄并單獨(dú)飼養(yǎng)觀察，待確認(rèn)正常后再放回飼養(yǎng)池。因?yàn)轵隍紝?duì)環(huán)境具有較高的要求，蜈蚣飼養(yǎng)池的溫度應(yīng)保持在22-30℃之間，空氣相對(duì)濕度60%-70%，飼養(yǎng)土濕度維持在15%-20%；尤6

湖北中醫(yī)藥大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文其在天氣變化劇烈時(shí)節(jié)，應(yīng)通過增加供暖、通風(fēng)、灑水等設(shè)施以維持飼養(yǎng)池的溫度和濕度。2.3.2蜈蚣的繁殖管理在蜈蚣種源引進(jìn)時(shí)，可以選自野外捕捉或從正規(guī)種源廠引種，首選身體完好無損，體表光澤的三齡以上種蜈蚣，雌：雄配種比例為1-3:1。種蜈蚣在進(jìn)入新環(huán)境的2到3天內(nèi)會(huì)有部分蜈蚣不進(jìn)食，此時(shí)不可大量投喂餌料。要檢查蜈蚣池的防逃措施是否完善，待適應(yīng)新環(huán)境時(shí)，再逐步提高投喂餌料量。蜈蚣一般在3-5月份交配，在此期間需消耗大量的體能與營養(yǎng)物質(zhì)，并且交配成功后45天左右的時(shí)間內(nèi)不食不飲。因此，在其繁殖產(chǎn)卵之前，必須供給優(yōu)質(zhì)足量的餌料。繁殖期間可以通過縮小手電筒光圈觀察蜈蚣的生命活動(dòng)和周圍安全情況，發(fā)現(xiàn)問題，及時(shí)解決。圖1-3蜈蚣繁殖過程的不同時(shí)期Figure1-3.ThereproductiveprocessofS.mutilans.蜈蚣通常每年6-7月份產(chǎn)卵，將卵抱入懷中，到8-9月孵化，期間應(yīng)保持安靜，禁止翻動(dòng)養(yǎng)殖池，避免因驚動(dòng)造成流產(chǎn)、吞卵等問題。孵卵期間因部分蜈蚣不再進(jìn)食，可以適當(dāng)減少食物投放量，但必須正常按時(shí)補(bǔ)水；并使養(yǎng)殖池保持在80%左右適宜的濕度，溫度控制在30℃-32℃上下，避7
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 蔡訓(xùn)輝;王如意;范彥君;劉齊元;王瑜;周瑋;;作物線粒體基因組研究進(jìn)展[J];中國農(nóng)學(xué)通報(bào);2018年18期

2 ;非洲土著人線粒體基因組研究表明人類在7萬年前險(xiǎn)些滅絕[J];生物學(xué)教學(xué);2008年10期

3 朱司祺;蔡大偉;張乃凡;邵鑫月;郭雅琦;;新疆塔城松樹溝遺址出土古代馬的線粒體基因組分析[J];邊疆考古研究;2019年02期

4 黎雪梅;李小兵;黃偉;;頂復(fù)門線粒體基因組結(jié)構(gòu)的研究進(jìn)展[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2014年05期

5 趙春霞;盛勃;唐德江;李鵬;趙和生;楊煥民;劉勝軍;;魚組織線粒體基因組提取方法的改進(jìn)[J];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報(bào);2013年02期

6 李雙雙;薛龍飛;蘇愛國;雷彬彬;王玉美;華金平;;高等植物線粒體基因組測(cè)序和序列分析[J];中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年02期

7 李玉秋;趙洪錕;譚化;劉曉東;張春寶;董英山;;八種植物線粒體基因組結(jié)構(gòu)特征分析與比較[J];生物技術(shù)通報(bào);2011年10期

8 黃族豪;劉迺發(fā);;動(dòng)物線粒體基因組變異研究進(jìn)展[J];生命科學(xué)研究;2010年02期

9 張鴻;陳祖玉;李陽生;朱英國;;馬協(xié)型水稻細(xì)胞質(zhì)雄性不育系線粒體基因組的變異與功能的研究[J];武漢植物學(xué)研究;2007年03期

10 郭凱文;線粒體基因組及其在寄生蟲學(xué)中的應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊(cè));2002年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 王遂;白樺全基因組測(cè)序及分析[D];東北林業(yè)大學(xué);2019年

2 張亮亮;中國巨蚓科蚯蚓比較線粒體基因組學(xué)與分子系統(tǒng)發(fā)育研究[D];上海交通大學(xué);2016年

3 明亮;雙峰駝遺傳變異圖譜及線粒體基因組群體遺傳多樣性研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

4 王碩;植物細(xì)胞器基因組變異與進(jìn)化機(jī)制研究[D];昆明理工大學(xué);2016年

5 董佳佳;基于高通量測(cè)序的雛蝗屬線粒體基因組測(cè)定及分子系統(tǒng)學(xué)研究[D];陜西師范大學(xué);2018年

6 李雙雙;棉花線粒體基因組測(cè)序及其細(xì)胞質(zhì)雄性不育機(jī)理的初步研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

7 邱忠營;直翅目昆蟲線粒體基因組比較、譜系及進(jìn)化研究[D];陜西師范大學(xué);2016年

8 錢俊;丹參的葉綠體和線粒體基因組研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

9 池振奮;RecQL4在維持線粒體基因組穩(wěn)定性及調(diào)節(jié)多藥耐藥性中的作用[D];中國科學(xué)院北京基因組研究所;2013年

10 魏書軍;膜翅目線粒體基因組的特征與進(jìn)化及其在系統(tǒng)發(fā)育研究中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 胡超逸;蜈蚣標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖與多組學(xué)品質(zhì)評(píng)價(jià)研究[D];湖北中醫(yī)藥大學(xué);2020年

2 劉月鵬;海南產(chǎn)三個(gè)芋螺種類的線粒體基因組研究[D];海南大學(xué);2018年

3 姜兵;基于線粒體基因組的中國黑蝗亞科系統(tǒng)發(fā)育研究[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2019年

4 王賽賽;新疆雪蓮線粒體基因組組裝與分析[D];石河子大學(xué);2019年

5 何波;油茶主要傳粉蜜蜂的比較線粒體基因組學(xué)及系統(tǒng)發(fā)育研究[D];中南林業(yè)科技大學(xué);2019年

6 梁孟杰;基于糜子BAC文庫測(cè)序法的unmapped reads分析及線粒體基因組組裝[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

7 鄧楚;五株捕食線蟲真菌線粒體基因組的遺傳多樣性和進(jìn)化[D];云南大學(xué);2019年

8 張?jiān)络?異質(zhì)環(huán)境對(duì)彎孢節(jié)叢孢群體分化及有性生殖的影響[D];云南大學(xué);2019年

9 李丹丹;細(xì)腳蟲草基因組學(xué)研究[D];云南大學(xué);2019年

10 楊爽;引入養(yǎng)殖“俄羅斯紅參”（Apostichopus japonicus）生長(zhǎng)、品質(zhì)評(píng)價(jià)及線粒體基因組分析[D];上海海洋大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2883618