發(fā)布時(shí)間：2020-11-08 21:04

　　 當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels干燥根,屬甘肅道地藥材之一,具有活血、補(bǔ)血、抗炎等功效,其活性成分包括揮發(fā)油、有機(jī)酸、多糖等,當(dāng)歸多糖具有調(diào)節(jié)免疫、抗氧化等作用。炭當(dāng)歸(CAS)是當(dāng)歸的炮制品之一,炭當(dāng)歸多糖(CASP)為其主要功能性成分之一。本文通過免疫炎癥因子、病理組織學(xué)分析,結(jié)合串聯(lián)質(zhì)量標(biāo)簽標(biāo)記技術(shù)(TMT)和質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)驗(yàn)證目標(biāo)蛋白,探究頭孢噻呋鈉聯(lián)合LPS所致肝損傷的發(fā)生機(jī)制及炭當(dāng)歸多糖的保護(hù)作用機(jī)制。試驗(yàn)樣本分為前期實(shí)驗(yàn)采取的正常對照組(Control)組、模型組(Model)、炭當(dāng)歸多糖低劑量組(CASPL,0.125 g/kg/d)、炭當(dāng)歸多糖高劑量組(CASPH,0.25 g/kg/d)雞血清和肝臟樣本。通過ELISA法檢測IL-1、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α及TGF-β含量,并進(jìn)行病理學(xué)組織學(xué)檢查,結(jié)合TMT技術(shù)鑒定肝臟蛋白,篩選出差異蛋白并結(jié)合MRM技術(shù)對其進(jìn)行驗(yàn)證。研究結(jié)果如下:1、與Control組比較,Model組IL-1β、IL-6、TNF-α含量極顯著升高(P0.01),IL-4、TGF-β含量顯著降低(P0.05),IL-10含量極顯著降低(P0.01)。與Model組相比,CASPH組IL-1β、TNF-α含量顯著降低(P0.05),IL-6含量極顯著降低(P0.01),IL-4、TGF-β含量顯著升高(P0.05),IL-10含量極顯著升高(P0.01),CASPL組的IL-1β、TNF-α含量顯著降低(P0.05),IL-10含量顯著降低(P0.05)。與Control組相比,Model組肝細(xì)胞壞死,肝小葉辨識困難,空泡變性等。與Model組相比,CASPH組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整,變性壞死顯著減輕,而CASPH組比CASPL組改善更明顯。2、在Control、Model、CASPH組肝臟共鑒定到6662個(gè)蛋白,Model/Control顯著差異蛋白206個(gè),其中128個(gè)上調(diào),78個(gè)下調(diào),CASPH/Model顯著差異蛋白745個(gè),其中535個(gè)上調(diào),210個(gè)下調(diào),主要參與糖代謝、脂質(zhì)代謝、氨基酸代謝及炎癥相關(guān)通路,都主要富集到免疫相關(guān)通路。3、篩選的19個(gè)候選蛋白驗(yàn)證,TMT和MRM定量分析結(jié)果總體趨勢一致性較高,從中篩選出7個(gè)目標(biāo)蛋白(COX7A2L、FCER2、AGXT、CD34、GCAT、CYP2AC1、TBXAS1)與肝損傷、保肝機(jī)制關(guān)系密切,可能是CASP干預(yù)頭孢噻呋鈉聯(lián)合LPS致雞肝損傷的作用機(jī)制的標(biāo)志蛋白。綜上所述,頭孢噻呋鈉聯(lián)合LPS致雞肝損傷的作用機(jī)制與免疫炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、氨基酸代謝、組織修復(fù)等關(guān)系密切。CASP具有緩解肝損傷程度、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)和修復(fù)肝臟損傷的作用,可能通過調(diào)節(jié)炎癥因子,以及下調(diào)肝臟中FCER2和TBXAS1、上調(diào)CD34、AGXT、GCAT、COX7A2L和CYP2AC1蛋白表達(dá),來恢復(fù)免疫相關(guān)通路異常情況,減弱造模因子引起的氧化應(yīng)激損傷程度,恢復(fù)氨基酸代謝紊亂以及調(diào)節(jié)多種相關(guān)酶的分泌來促進(jìn)肝組織修復(fù),發(fā)揮保肝效果。
【學(xué)位單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：S853.74
【部分圖文】：

炭當(dāng)歸多糖干預(yù)頭孢噻呋鈉聯(lián)合LPS致雞肝損傷作用機(jī)制研究13空泡變性，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。與Model組相比，CASPH組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整，肝細(xì)胞變性顯著減輕，排列較規(guī)整，但CASPL組肝細(xì)胞輪廓基本可見，仍可見部分空泡變性，有輕微核固縮，輕度壞死，肝竇有瘀血等組織病變特征。圖2-2炭當(dāng)歸多糖對頭孢噻呋鈉聯(lián)合LPS致雞肝損的病理學(xué)觀察結(jié)果Fig.2-2PathologicalobservationresultsofCASPonliverinjuryinducedbyCScombinedwithLPSinchicken注：黑色箭頭所指為肝臟病變。Note:Theblackarrowsrefertotheobvioushepaticlesions.4討論4.1LPS聯(lián)合頭孢噻呋鈉對雞促炎細(xì)胞因子、抗炎細(xì)胞因子的影響LPS聯(lián)合頭孢噻呋鈉所致雞肝損傷是基于臨床實(shí)際所篩選出的一種雞肝損傷模型，LPS聯(lián)合頭孢噻呋鈉致雞肝損傷發(fā)生后，雞血清中TNF-α、IL-6、IL-1β表達(dá)水平總趨勢均顯著升高，IL-4、IL-10、TGF-β表達(dá)水平總趨勢均顯著降低。LPS引起的肝損傷通常被認(rèn)為是免疫性肝損傷，與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)[75-76]，主要由肝臟Kupffer細(xì)胞清除[77]。LPS隨血液入肝時(shí)，Kupffer細(xì)胞被激活，不僅能夠產(chǎn)生H2O2等活性氧引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，還會大量分泌TNF-α、IL-6等炎癥細(xì)胞因子，造成肝細(xì)胞凋亡與壞死[78]。TNF-α是肝損

炭當(dāng)歸多糖干預(yù)頭孢噻呋鈉聯(lián)合LPS致雞肝損傷作用機(jī)制研究23圖3-1蛋白分子量分布圖Fig.3-1Proteinmolecularweightdistribution注：X軸：蛋白質(zhì)分子量范圍；Y軸：相應(yīng)蛋白比例。Note:Xaxis:proteinmolecularweightrange;Yaxis:correspondingproteinproportion.圖3-2肽段長度分布圖Fig.3-2Peptidelengthdistribution注：X軸：肽段長度；Y軸：相應(yīng)肽段比例。Note:Xaxis:peptidelength;Yaxis:correspondingpeptideproportion.

炭當(dāng)歸多糖干預(yù)頭孢噻呋鈉聯(lián)合LPS致雞肝損傷作用機(jī)制研究23圖3-1蛋白分子量分布圖Fig.3-1Proteinmolecularweightdistribution注：X軸：蛋白質(zhì)分子量范圍；Y軸：相應(yīng)蛋白比例。Note:Xaxis:proteinmolecularweightrange;Yaxis:correspondingproteinproportion.圖3-2肽段長度分布圖Fig.3-2Peptidelengthdistribution注：X軸：肽段長度；Y軸：相應(yīng)肽段比例。Note:Xaxis:peptidelength;Yaxis:correspondingpeptideproportion.
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2875339