發(fā)布時(shí)間：2020-11-07 13:25

　　 雞壞死性腸炎是由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的以腸道黏膜出血性壞死為主要特征的消化道傳染病,具有較高的發(fā)病率和死亡率,給禽類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重?fù)p失。喹賽多作為喹噁啉類(lèi)新品種藥物,對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌有較好的抗菌活性,且灌服給藥后雞消化道內(nèi)藥物濃度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血藥濃度,加之其毒副作用小,休藥期短,適宜用作雞壞死性腸炎的治療藥物,具有巨大開(kāi)發(fā)潛能。本課題研究了喹賽多對(duì)雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的體外和半體內(nèi)抗菌作用及喹賽多在雞消化道內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué),通過(guò)建立喹賽多對(duì)雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的半體內(nèi)PK-PD模型,制定了喹賽多用于治療雞壞死性腸炎的給藥方案,并按照基于PK-PD制定的給藥方案,開(kāi)展了喹賽多對(duì)雞壞死性腸炎的隨機(jī)對(duì)照治療試驗(yàn),為指導(dǎo)喹賽多臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)與基礎(chǔ)實(shí)踐。1.喹賽多對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌的藥效學(xué)研究參考臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)制定的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)文件,采用瓊脂稀釋法測(cè)定喹賽多對(duì)61株雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的最小抑菌濃度(MIC),使用SPSS軟件對(duì)MIC值進(jìn)行統(tǒng)計(jì),計(jì)算得到喹賽多對(duì)雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC50和MIC90。篩選出MIC50附近且致病性較強(qiáng)的菌株,采用微量稀釋法測(cè)定喹賽多在肉湯培養(yǎng)基和雞回腸內(nèi)容物中對(duì)該菌株的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC),通過(guò)平板涂布法將濃縮至1010CFU/mL的產(chǎn)氣莢膜梭菌菌液涂至含喹賽多的瓊脂平板測(cè)定防突變濃度(MPC),采用藥物去除的方法測(cè)定喹賽多對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌的抗菌后效應(yīng)(PAE),分別用含有不同濃度喹賽多的培養(yǎng)基和各時(shí)間點(diǎn)采集的回腸內(nèi)容物進(jìn)行體外和半體外殺菌曲線(xiàn)試驗(yàn)。結(jié)果表明喹賽多對(duì)61株雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌的MIC值介于1～16 μg/mL,MIC50為2.11μg/mL,MIC90為4.40μg/mL,選取MIC50附近且致病性較強(qiáng)的菌株cvcc2030,在體外和半體內(nèi)條件下測(cè)得喹賽多對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌cvcc2030的抗菌活性相同,MIC均為2μg/mL,MBC均為4μg/mL。喹賽多對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌cvcc2030的MPC為20μg/mL,將產(chǎn)氣莢膜梭菌cvcc2030暴露在不同濃度喹賽多溶液中1 h和2 h,誘導(dǎo)產(chǎn)生的PAE分別為0.88 ～ 1.24 h和1.01～1.89 h。體外和半體內(nèi)殺菌曲線(xiàn)試驗(yàn)結(jié)果均顯示喹賽多對(duì)產(chǎn)氣莢膜梭菌的抗菌作用類(lèi)型為濃度依賴(lài)型。2.喹賽多在雞消化道內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究選用110羽4周齡三黃肉雞,隨機(jī)分為2組,每組55只,其中一組攻毒產(chǎn)氣莢膜梭菌cvcc2030,構(gòu)建壞死性腸炎疾病模型。疾病模型構(gòu)建成功后,對(duì)健康組和疾病組雞只均按30 mg/kg體重進(jìn)行單次灌胃給藥。于給藥后0.5 h、0.75 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、6 h、8 h、12 h、24 h每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別取5只雞進(jìn)行定點(diǎn)宰殺,取其回腸內(nèi)容物,采用高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)回腸內(nèi)容物中喹賽多的藥物濃度。將測(cè)得的各時(shí)間點(diǎn)回腸內(nèi)容物中喹賽多的藥物濃度使用Winnonlin軟件進(jìn)行擬合,結(jié)果顯示健康組和患病組的AUC分別為410.75 h·μg/mL和361.82 h·μg/mL,Cmax分別為172.89μg/mL和151.76μg/mL,T1/2λ分別為5.69 h和5.82 h,CL/F分別為72.44 mL/kg/h和82.27mL/kg/h,MRT分別為2.59h和2.49h。表明雞灌服喹賽多后能在腸道達(dá)到較高濃度,但平均滯留時(shí)間較短,且健康組和患病組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)并無(wú)明顯差異。3.半體內(nèi)PK-PD模型擬合與藥給藥方案制定利用Sigmoid Emax方程對(duì)半體內(nèi)殺菌曲線(xiàn)試驗(yàn)中AUC24h、MIC值與產(chǎn)氣莢膜梭菌濃度變化對(duì)數(shù)值進(jìn)行擬合,計(jì)算當(dāng)E = 0、-3、-4時(shí)PK/PD參數(shù)AUC24h/MIC折點(diǎn)值。采用平衡透析法得到喹賽多在雞消化道的游離藥物比例,結(jié)合給藥劑量公式:DOse = CL×(AUC/MIC)Bp×MIC/E×f,利用 pK-PD 參數(shù) AUC24h、MIC 折點(diǎn)值計(jì)算達(dá)到預(yù)防、治療和根除效應(yīng)的日給藥劑量。半體內(nèi)PK/PD模型擬合得到的方程為(?),當(dāng)(?)E=0、-3、-4時(shí)計(jì)算得到的對(duì)應(yīng)的抑菌、殺菌、根除作用的AUC24h/MIC折點(diǎn)值分別為27.71 h、78.93 h、165.14 h。測(cè)得喹賽多在雞消化道的游離藥物比例為0.47,結(jié)合給藥劑量公式,針對(duì)本試驗(yàn)受試菌株,得到的預(yù)防、治療和根除雞壞死性腸炎的日給藥劑量為9.70、27.63、57.81 mg/kg,將日給藥劑量轉(zhuǎn)化為飼料添加劑量分別為100、3 00、600 mg/kg。4.隨機(jī)對(duì)照治療試驗(yàn)將210羽3周齡科寶肉雞隨機(jī)分為6組:健康對(duì)照組35羽,不感染不給藥;陰性對(duì)照組35羽,感染不給藥;陽(yáng)性對(duì)照組35羽,感染給予磷酸泰樂(lè)菌素預(yù)混劑200 mg/kg飼料混飼給藥;試驗(yàn)組根據(jù)基于PK/PD制定的給藥方案,低、中、高劑量組分別按150 mg/kg、300 mg/kg、600 mg/kg飼料混飼給藥,每組35羽。對(duì)各組的療效指標(biāo)、腸道損傷程度及產(chǎn)氣莢膜梭菌活菌菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果顯示喹賽多低、中、高劑量組的死亡率分別為17.14%、11.43%、8.57%,有效率分別為 77.14%、85.71%、91.43%,治愈率分別為 71.43%、85.71%、91.43%,平均日增重分別為53.24 g、62.64 g、65.74 g,料重比分別為2.19、2.00、1.94,腸道病變記分分別為0.97、0.69、0.54,產(chǎn)氣莢膜梭菌活菌菌落數(shù)(LogCFU/g)為6.25、5.45、4.67。喹賽多中、高劑量組各指標(biāo)間無(wú)顯著性差異,綜合各方因素,當(dāng)臨床分離菌株MIC ≤ 2 μg/mL時(shí),推薦以300 mg/kg飼料混飼治療雞壞死性腸炎。本課題闡明了喹賽多對(duì)雞產(chǎn)氣莢膜梭菌的抗菌特性,揭示了喹賽多在健康雞和患病雞消化道內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特點(diǎn),建立了喹賽多對(duì)雞壞死性腸炎的半體內(nèi)PK-PD模型,制定了喹賽多用于預(yù)防、治療、根除雞壞死性腸炎的給藥方案,并開(kāi)展隨機(jī)對(duì)照治療試驗(yàn)對(duì)給藥方案進(jìn)行驗(yàn)證,對(duì)有效控制雞壞死性腸炎,同時(shí)豐富喹賽多的臨床應(yīng)用具有重要意義。
【學(xué)位單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：S858.31
【部分圖文】：

圖 1 喹賽多對(duì) 61 株產(chǎn)氣莢膜梭菌的 MIC 分布Fig. 1 MIC distributions of Cyadox against 61 Clostridium perfringens

24圖 2 喹賽多對(duì) 61 株產(chǎn)氣莢膜梭菌的 MIC 累計(jì)分布Fig. 2 MIC camulative distributions of Cyadox against 61 Clostridium perfringens

圖 3 雞源產(chǎn)氣莢膜梭菌 cvcc2030 在培養(yǎng)基和無(wú)菌回腸內(nèi)容物中的生長(zhǎng)曲Fig. 3 Growth curves of Clostridium perfringens cvcc2030 in medium and ileu.2 體外和半體內(nèi) MIC、MBC 的測(cè)定
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2874010