哺乳動(dòng)物的生殖主要是由下丘腦-垂體-性腺(HPG)軸驅(qū)動(dòng)和引導(dǎo)的,促性腺激素釋放激素(GnRH)被廣泛認(rèn)為是調(diào)控生殖的下丘腦肽。鑒于GnRH對(duì)腺垂體性腺激素分泌過(guò)程具有重要的調(diào)控作用,已有人工合成的GnRH類似物應(yīng)用于動(dòng)物的繁殖調(diào)控和多種生殖疾病的臨床治療。GnRH類似物與前列腺激素(PG)聯(lián)合處理是我國(guó)常用的牛同期發(fā)情技術(shù),GnRH類似物通過(guò)促進(jìn)FSH和LH釋放并作用于卵巢,誘導(dǎo)卵泡發(fā)育以及促進(jìn)排卵,完成同期發(fā)情-定時(shí)輸精,提高受胎率。戈那瑞林是人工合成的GnRH,應(yīng)用戈那瑞林進(jìn)行同期發(fā)情處理可以大大降低生產(chǎn)實(shí)踐中激素使用的成本,并且有助于進(jìn)一步研究GnRH類似物對(duì)FSH的具體調(diào)控機(jī)制。miRNA是一種內(nèi)源性非編碼RNA,研究表明miRNA在各種生理活動(dòng)調(diào)控和癌癥進(jìn)程中都發(fā)揮關(guān)鍵作用,可參與多種激素的分泌調(diào)節(jié)過(guò)程。然而,miRNA是否參與GnRH對(duì)FSH的分泌調(diào)控過(guò)程,進(jìn)而影響哺乳動(dòng)物的生殖仍然是未知的,具有重要的研究?jī)r(jià)值。本研究通過(guò)對(duì)30頭母牛進(jìn)行GnRH類似物(戈那瑞林)和PG聯(lián)合處理,使之同期發(fā)情。檢測(cè)GnRH類似物處理前后母牛卵泡發(fā)育、FSH和LH的分泌變化,發(fā)現(xiàn)GnRH類似物(戈那瑞林)參與FSH分泌的調(diào)控,誘導(dǎo)卵巢上卵泡發(fā)育。為進(jìn)一步探索這種調(diào)控作用的分子機(jī)制,應(yīng)用生物信息學(xué)軟件和雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)預(yù)測(cè)可能參與調(diào)節(jié)FSH分泌的miRNA,然后在大鼠原代腺垂體細(xì)胞上進(jìn)行體外驗(yàn)證,通過(guò)轉(zhuǎn)染miR-488的模擬物和抑制劑后進(jìn)行RTq-PCR、elisa等檢測(cè)實(shí)驗(yàn),證明了miR-488與FSH的靶向作用關(guān)系,并且驗(yàn)證了GnRH與miR-488的作用關(guān)系。結(jié)果表明:1.母牛經(jīng)GnRH類似物處理后,FSH和LH分泌水平顯著上升,促進(jìn)牛的卵巢上卵泡發(fā)育。牛注射戈那瑞林后,在垂體中FSHb和LHb的mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)。利用Targetscan等預(yù)測(cè)軟件,結(jié)合雙熒光素酶報(bào)告篩選GnRH類似物處理后差異表達(dá)的miRNA,預(yù)測(cè)miR-488可能靶向調(diào)節(jié)FSHb基因。2.大鼠進(jìn)行GnRH類似物處理后,FSH和LH分泌量顯著增多,且FSHb mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào),miR-488-3p表達(dá)水平顯著下調(diào)。miR-488-3p在大鼠性成熟前后差異表達(dá),可能參與生殖調(diào)控。體外驗(yàn)證miR-488-3p可以靶向調(diào)節(jié)FSHb基因,進(jìn)而影響FSH分泌。綜上所述,本研究分析了GnRH類似物處理后的促卵泡素和促黃體素分泌變化情況,確定了同期發(fā)情程序,解析GnRH類似物通過(guò)miR-488調(diào)控FSH分泌的分子機(jī)制,為完善牛發(fā)情控制的處理程序提供理論依據(jù),促進(jìn)激素制品的國(guó)產(chǎn)化應(yīng)用。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：S823
【部分圖文】：

第一篇文獻(xiàn)綜述第1章GnRH及其類似物的研究進(jìn)展8圖1.1.GnRH調(diào)控FSHb轉(zhuǎn)錄的信號(hào)通路模型[62]Fig1.1SignalpathwaymodelofGnRHregulatingFSHbtranscription總之GnRH根據(jù)其不同的脈沖模式（幅度和頻率），可以激活復(fù)雜的信號(hào)傳遞通路差異調(diào)節(jié)促性腺激素mRNA的表達(dá)[63,64]，進(jìn)而影響促性腺激素的分泌，調(diào)控動(dòng)物的生長(zhǎng)繁殖。1.4GnRH類似物研究進(jìn)展促性腺激素釋放激素（GnRH）是在下丘腦神經(jīng)元的細(xì)胞體中合成的由十個(gè)氨基酸殘基組成的十肽，也稱為促黃體生成激素釋放激素（LHRH）或下丘腦介導(dǎo)雄性和雌性生殖調(diào)控的神經(jīng)肽[65]。由于這種神經(jīng)肽首先在哺乳動(dòng)物（豬和羊）中被發(fā)現(xiàn)，也被稱為哺乳動(dòng)物GnRH（mGnRH）[43]，由于天然GnRH的效力低且半衰期短，但具有重要的作用功能，因此開(kāi)發(fā)了長(zhǎng)期有效的GnRH類似物來(lái)進(jìn)行臨床治療或?qū)嵺`應(yīng)用[66]。GnRH類似物包括GnRH激動(dòng)劑和GnRH拮抗劑。促性腺激素釋放激素激動(dòng)劑是從天然的促性腺激素釋放激素中衍生出來(lái)的，其方法是在天然GnRH十肽的第6位上將L-氨基酸用D-氨基酸取代，增加其半衰期和受體占用時(shí)間[67]。目前已研究出多種GnRH激動(dòng)劑，其中代表性的幾種分別是戈舍瑞林，亮丙瑞林，那

第二篇研究?jī)?nèi)容第1章GnRH類似物處理同期發(fā)情對(duì)牛FSH及卵泡發(fā)育變化影響28圖1.1GnRH類似物處理后腺垂體中FSH和LH激素分泌量Fig.1.1ThesecretionofFSHandLHhormonesinadenohypophysisafterGnRHanaloguetreatment注：（A）elisa檢測(cè)母牛GnRH同期發(fā)情前后FSH分泌量。（B）elisa檢測(cè)母牛GnRH同期發(fā)情前后LH分泌量。每個(gè)實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次。顯示了數(shù)據(jù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）。進(jìn)行單因素方差分析和卡方檢驗(yàn)以評(píng)估統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。*表示各組之間存在顯著差異（P<0.05）。Note:(A)TheFSHsecretionwasmeasuredviaELISAbeforeandafterGnRHSynchronousestrus.(B)TheLHsecretionwasmeasuredviaELISAbeforeandafterGnRHSynchronousestrus.Repeateachexperimentatleastthreetimes.Showsthemeanandstandarddeviation(SD)ofthedata.OnewayANOVAandchisquaretestwereusedtoevaluatethestatisticalsignificance.*Indicatesasignificantdifference(P<0.05)1.2.2GnRH類似物對(duì)牛卵泡發(fā)育的影響為了探究GnRH處理是否能夠促進(jìn)母牛的發(fā)情以及其對(duì)母牛卵巢卵泡發(fā)育的影響，本研究中我們選擇了30頭不含優(yōu)勢(shì)卵泡，處于發(fā)情間期的母牛，進(jìn)行GnRH同期發(fā)情處理后，應(yīng)用B型超聲波診斷儀對(duì)母牛的卵巢卵泡發(fā)育情況進(jìn)行檢測(cè)，將探頭經(jīng)直腸伸入到達(dá)卵巢位置，觀察卵巢形態(tài)，測(cè)量卵泡直徑大小，以卵泡最大垂直線的平均值為卵泡直徑，統(tǒng)計(jì)30頭母牛第二次注射GnRH后的卵泡發(fā)育情況為下表1.7所示，在GnRH同期發(fā)情處理后卵泡直徑的平均值達(dá)到了1.14cm，說(shuō)明絕大部分卵泡顯著發(fā)育。這些結(jié)果顯示，隨著母牛FSH和LH的激素分泌量的增加促進(jìn)了卵巢上的卵泡發(fā)育和優(yōu)勢(shì)卵泡的形成，即GnRH類似物

第二篇研究?jī)?nèi)容第1章GnRH類似物處理同期發(fā)情對(duì)牛FSH及卵泡發(fā)育變化影響30圖1.2GnRH類似物處理前后腺垂體中FSHb和LHbmRNA表達(dá)水平Fig.1.2ExpressionofFSHbandLHbmRNAinadenohypophysisbeforeandafterGnRHanaloguetreatment注：（A）RT-qPCR方法檢測(cè)牛腺垂體中FSHbmRNA在GnRH同期發(fā)情處理后的表達(dá)。（B）RT-qPCR方法檢測(cè)牛腺垂體中LHbmRNA在GnRH同期發(fā)情后的表達(dá)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次。顯示了數(shù)據(jù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）。進(jìn)行單因素方差分析和卡方檢驗(yàn)以評(píng)估統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。*表示各組之間存在顯著差異（P<0.05）。Note:(A)RT-qPCRwasusedtodetecttheexpressionofFSHbmRNAinbovineadenohypophysisafterSynchronousestrusofGnRH.(B)RT-qPCRwasusedtodetecttheexpressionofLHbmRNAinbovineadenohypophysisafterSynchronousestrusofGnRH.Repeateachexperimentatleastthreetimes.Showsthemeanandstandarddeviation(SD)ofthedata.OnewayANOVAandchisquaretestwereusedtoevaluatethestatisticalsignificance.*Indicatesasignificantdifference(P<0.05).1.2.4預(yù)測(cè)篩選與牛腺垂體FSHb具有靶向作用的miRNA為進(jìn)一步探索GnRH類似物對(duì)促卵泡素的調(diào)控機(jī)制，我們通過(guò)TargetScan預(yù)測(cè)網(wǎng)站（http://www。targetscan。org/）獲取與靶基因FSHb具有潛在結(jié)合作用的miRNA，通過(guò)篩選驗(yàn)證，選擇具有高保守序列的miR-488-3p，其和FSHb3"UTR之間互補(bǔ)序列的信息（圖1.3A）。然后，為進(jìn)一步證實(shí)miR-488-3p靶向FSHb，我們通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告進(jìn)行驗(yàn)證（圖1.3B）。我們首先將靶基因FSHb與miR-488-3p的結(jié)合序列直接合成后克隆至雙熒光素酶報(bào)告載體中，克隆位置位于載體中海腎熒光素酶報(bào)告基因的3’UTR區(qū)域，構(gòu)建了FSHb-3"UTR-WT質(zhì)粒（圖1.3C）。最后，將構(gòu)建的質(zhì)粒與miR-488
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 陳燁;丁錦希;郝麗;唐迪;;集中帶量，還是掛網(wǎng)議價(jià)采購(gòu)——生物類似物采購(gòu)模式研究[J];中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志;2020年04期

2 田月;趙志剛;;國(guó)內(nèi)外生物類似物的審批、監(jiān)管比較與思考[J];藥品評(píng)價(jià);2017年04期

3 常鵬飛;促甲狀腺素釋放激素及其類似物對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的保護(hù)作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(腦血管疾病分冊(cè));1997年05期

4 本刊編輯部;·讀者來(lái)信·[J];農(nóng)藥;1989年04期

5 袁其曉;一種口服有效的促黃體生成激素釋放激素的類似物[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)參考資料.計(jì)劃生育婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè);1977年03期

6 葛維娟;尚叢珊;許樂(lè);;蘆竹堿及其類似物合成方法的比較研究[J];化工管理;2016年17期

7 潘學(xué)武;董妍玲;石亞亞;;內(nèi)生真菌產(chǎn)生喜樹(shù)堿及其類似物的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2010年17期

8 王慧麗;奚耕思;;雄激素受體類似物在擬黑多刺蟻腦部的表達(dá)和定位[J];陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年02期

9 孫濱源,田桂玲,葉蘊(yùn)華;生長(zhǎng)激素釋放抑制因子類似物的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;1998年06期

10 劉丹;欒天;袁瑩;張磊;;多靶點(diǎn)酪氨酸激酶抑制劑阿法替尼及其類似物的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2014年24期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 歐陽(yáng)翰;磷酸化精氨酸穩(wěn)定類似物的合成及應(yīng)用[D];廈門大學(xué);2018年

2 徐佳琳;姜黃素類化合物的提取、合成及活性研究[D];浙江工業(yè)大學(xué);2019年

3 丁德軍;基于雙鍵修飾的白藜蘆醇類似物的癌預(yù)防活性及其機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2012年

4 劉倍均;采用非天然D型氨基酸修飾和側(cè)鏈鏈接策略進(jìn)行新型Anoplin類似物的設(shè)計(jì)、合成和活性研究及與中藥單體熊果酸聯(lián)合抗菌效果研究[D];蘭州大學(xué);2018年

5 劉少金;基于Bikinin的油菜素內(nèi)酯功能類似物設(shè)計(jì)、合成及其生物活性[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

6 吳小慶;抑咽側(cè)體素類似物的設(shè)計(jì)、合成、生物活性及構(gòu)效關(guān)系研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 王媛;非天然氨基酸修飾的內(nèi)嗎啡肽類似物構(gòu)效關(guān)系及藥理活性研究[D];蘭州大學(xué);2014年

8 趙琳琳;胰高血糖素樣肽-1及其長(zhǎng)效類似物的研究[D];華中科技大學(xué);2013年

9 王碩;兩種多肽類藥物結(jié)構(gòu)的譜學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2011年

10 蔣翔銳;新型土震素B類似物的合成及其生物活性研究[D];浙江大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王文華;GnRH類似物通過(guò)miR-488調(diào)控牛促卵泡素分泌的研究[D];吉林大學(xué);2020年

2 胡麗彥;具有選擇性激活Th2免疫活性的α-GalCer類似物的設(shè)計(jì)與合成[D];江西師范大學(xué);2019年

3 周月婷;Tschimganin類似物的合成及殺蟲活性評(píng)價(jià)[D];石河子大學(xué);2019年

4 姚森;擬肽類PD176252類似物的設(shè)計(jì)、合成及生物活性評(píng)價(jià)[D];合肥工業(yè)大學(xué);2019年

5 鄧華;農(nóng)藥相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)的信息整合及穩(wěn)定G—四鏈的農(nóng)藥小分子類似物發(fā)掘[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2019年

6 冷曉;天然產(chǎn)物Cyanolide A類似物的全合成及其生物活性測(cè)試[D];江西科技師范大學(xué);2017年

7 謝程虎;多區(qū)域修飾的1—去氧紫杉醇類似物的合成及其抗腫瘤活性研究[D];上海大學(xué);2019年

8 史興鵬;瑞博西尼合成新方法及其類似物的抗腫瘤活性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2019年

9 劉立強(qiáng);天然炔酚及其類似物的合成和生物活性研究[D];大連理工大學(xué);2019年

10 陳萌;環(huán)五肽Galaxamide及其類似物的合成與其配位研究[D];暨南大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2864470