鹽穗木(Halostachys caspica)雖是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高的牧草資源,但其提取物具有較強(qiáng)的抑菌性,綿羊采食過多時(shí)會(huì)引發(fā)瘤胃疾病。為充分發(fā)揮鹽穗木在畜牧業(yè)的應(yīng)用價(jià)值,探索鹽穗木對(duì)瘤胃微生物的影響。本試驗(yàn)通過研究鹽穗木提取物對(duì)金黃色葡萄球菌(S.aureus)細(xì)胞壁、細(xì)胞膜通透性的影響及其對(duì)瘤胃纖維降解菌的作用效果,為鹽穗木飼料的合理應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。本試驗(yàn)的主要研究方法和結(jié)果如下:采用倍比稀釋法研究鹽穗木正丁醇萃取物對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果,通過測(cè)定培養(yǎng)液中電解質(zhì)和胞外蛋白含量的變化研究其對(duì)金黃色葡萄球菌細(xì)胞膜通透性的影響;再通過檢測(cè)堿性磷酸酶(AKP)含量的變化和菌體細(xì)胞微觀結(jié)構(gòu)的觀察研究其對(duì)細(xì)胞壁的影響。研究結(jié)果表明,鹽穗木正丁醇萃取物對(duì)金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)分別為25mg/mL、50mg/mL,在培養(yǎng)液中加入萃取物后,培養(yǎng)液的電導(dǎo)率、蛋白質(zhì)和AKP的含量都會(huì)顯著增加,同時(shí)用掃描電鏡觀察到鹽穗木正丁醇萃取物可使菌體細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變形,并出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)容物外泄現(xiàn)象。說明鹽穗木提取物是通過破壞金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的完整性來發(fā)揮抑菌作用的。通過菌落的形態(tài)學(xué)觀察和革蘭氏染色法對(duì)瘤胃纖維降解菌進(jìn)行分離純化,再使用剛果紅培養(yǎng)基檢測(cè)其纖維降解能力,最后通過細(xì)菌的生理生化特征分析和16S rDNA序列分析鑒定瘤胃纖維降解菌的種類。從瘤胃液中共分離到5株纖維降解菌,在NCBI中GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)后,可將這5株纖維降解菌初步判定為:枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis strain)、嗜鹽芽孢桿菌(Bacillus halotolerans strain)、貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis strain)、特基拉芽孢桿菌(Bacillus tequilensis strain)和地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis strain)。通過體外抑菌試驗(yàn)研究鹽穗木提取物對(duì)5種瘤胃纖維降解菌活性的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,鹽穗木正丁醇萃取物對(duì)分離得到的5種纖維降解菌均有明顯的抑菌效果,初步測(cè)得它們的MIC均為25mg/mL。結(jié)果表明綿羊采食過多的鹽穗木會(huì)抑制其瘤胃纖維降解菌的活性,易引起瘤胃積食等消化系統(tǒng)疾病。綜合以上試驗(yàn)結(jié)果,為充分發(fā)揮鹽穗木營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值,應(yīng)避免其作為單一飼料使用,可根據(jù)鹽穗木的營(yíng)養(yǎng)成分和卡拉庫(kù)爾羊所需的營(yíng)養(yǎng)水平配制鹽穗木飼糧。
【學(xué)位單位】：塔里木大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：S816
【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

鹽穗木Fig.2-1HalostachyscaspicaFig.2-2T

塔里木大學(xué)碩士學(xué)位論文第2章鹽穗木提取物對(duì)金黃色葡萄球菌抑菌方式的研究20圖2-1鹽穗木圖2-2鹽穗木正丁醇萃取物Fig.2-1HalostachyscaspicaFig.2-2Then-butanolextractfromHalostachyscaspica2.2.2生長(zhǎng)曲線的測(cè)定在金黃色葡萄球菌接種到含正丁醇萃取物的培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)，對(duì)照組加入等量無菌水。每隔2小時(shí)取樣，用紫外分光光度計(jì)于600nm處測(cè)其OD值，通過吸光度的變化觀察鹽穗木正丁醇萃取物的抑菌效果。2.2.3MIC和MBC的測(cè)定準(zhǔn)確稱取1.0g鹽穗木正丁醇萃取物膏體，用蒸餾水作溶劑溶解膏體，定容至5mL，配成200mg/mL的鹽穗木正丁醇萃取物溶液。用倍比稀釋法制成200mg/mL、100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL。因在提取鹽穗木正丁醇萃取物的過程中，已將正丁醇萃取物進(jìn)行了反復(fù)干燥，故而鹽穗木正丁醇萃取物溶液中不含有正丁醇，可選用等量無菌水作為對(duì)照組。分別吸取1mL加入到6支試管中，再向6支試管中分別加入970μL培養(yǎng)液和30μL106CFU/mL的金黃色葡萄球菌菌液，使1號(hào)～6號(hào)試管中藥液的終濃度分別為100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、0mg/mL。于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，涂布接種于固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)16～24h后觀察結(jié)果。以菌落數(shù)出現(xiàn)最少的最大萃取物濃度為最低抑菌濃度（MIC），以無菌落生長(zhǎng)的最小萃取物濃度為最低殺菌濃度（MBC）[86]。2.2.4電導(dǎo)率的測(cè)定[87]
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2862778