雞傳染性支氣管炎(infectious bronchitis, IB)是雞的一種急性高度接觸性呼吸道傳染病,由雞傳染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)導(dǎo)致。該病毒具有高度變異性,血清型眾多,且不同血清型之間僅有部分交叉反應(yīng)甚至不存在交叉反應(yīng)性。國(guó)內(nèi)外主要采用弱毒疫苗接種對(duì)JB進(jìn)行預(yù)防,但現(xiàn)有的傳統(tǒng)疫苗對(duì)目前流行毒株僅能提供部分免疫保護(hù)。因此,為制定有效的免疫程序和為雞群提供堅(jiān)實(shí)的保護(hù),應(yīng)選擇地方分離毒株或與流行毒株同一血清型毒株研制的疫苗。Sczy3是本實(shí)驗(yàn)室于2009年分離的一株LX4型的IBV毒株,利用雞胚腎細(xì)胞(CEK)將其連續(xù)傳至100代(C100)以致弱,希望制備出一株IB弱毒疫苗的候選株。試驗(yàn)結(jié)果顯示：毒株在CEK細(xì)胞傳代過程中,毒株能夠高度適應(yīng)CEK細(xì)胞,并能出現(xiàn)合胞體、空斑等典型病變。此后,將C]00代毒接種后非免疫雛雞群未見臨床發(fā)病癥狀,發(fā)病率和死亡率均為0%,這說明Sczy3毒株在CEK細(xì)胞連續(xù)傳至C100代時(shí)已充分致弱。通過熒光定量PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),不同代次的病毒在CEK細(xì)胞中CEK內(nèi)增殖變化曲線呈單峰狀,接毒后12-36h時(shí)是病毒增殖的高峰期,并于36h病毒滴度達(dá)到最高,但從接毒后36h至72h內(nèi)病毒滴度則逐漸降低。在CEK細(xì)胞中大致傳10代,Sczy3即可適應(yīng)細(xì)胞,且病毒滴度逐漸升高,但在感染CEK細(xì)胞36h時(shí),則呈現(xiàn)出早期代次的Sczy3病毒滴度要高于中、晚期代次的病毒滴度(病毒滴度：C20C50C90)。為評(píng)價(jià)Sczy3 C100對(duì)同源毒株及當(dāng)前流行毒株的免疫保護(hù)效力。采用Sczy3C100、4/91和H120商品化疫苗分別接種7日齡的非免疫雛雞,經(jīng)二免后2周分別用Sczy3P3和SCTW分離株進(jìn)行攻毒,統(tǒng)計(jì)各試驗(yàn)組雞群抗體效價(jià)、攻毒后臨診癥狀、氣管和腎臟的帶毒情況等指標(biāo)。結(jié)果顯示：免疫組雞群免疫后抗體效價(jià)均為陽性,Sczy3 C100對(duì)同源毒株可提供有效免疫保護(hù)；而對(duì)不同基因型毒株SCTW可提供一定臨床保護(hù),但雞群氣管和腎臟的病毒檢出率稍高于Sczy3 P3攻毒組。目前我國(guó)有眾多的IBV基因型流行,故而IBV新疫苗的研究任重道遠(yuǎn)。
【學(xué)位單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S852.65
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 文獻(xiàn)綜述和選題目的意義
    1 概論
        1.1 流行概況
        1.2 病原學(xué)
            1.2.1 病原分類
            1.2.2 IBV病毒粒子結(jié)構(gòu)
            1.2.3 生物學(xué)特性
        1.3 IBV的基因結(jié)構(gòu)
        1.4 結(jié)構(gòu)蛋白
        1.5 IBV的遺傳變異機(jī)制
        1.6 培養(yǎng)特性
    2 IB疫苗研究進(jìn)展
        2.1 IB滅活疫苗
        2.2 IB弱毒疫苗
        2.3 IB亞單位疫苗
        2.4 IB載體疫苗
        2.5 IB DNA疫苗
    3 熒光定量PCR研究進(jìn)展
    4 實(shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x
第二部分 試驗(yàn)內(nèi)容
    試驗(yàn)一 雞傳染性支氣管炎病毒SCZY3細(xì)胞適應(yīng)株的培育
        1 材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、雞胚和雞紅細(xì)胞
            1.2 毒株與菌株
            1.3 主要儀器
            1.4 主要試劑和試劑盒
            1.5 試劑的配制
            1.6 引物的設(shè)計(jì)
        2 方法
            2.1 Sczy3細(xì)胞適應(yīng)株的培育及傳代
            2.2 雞紅細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)
            2.3 病毒滴度測(cè)定
            2.4 Sczy3細(xì)胞適應(yīng)毒株的致弱評(píng)價(jià)
            2.5 遺傳穩(wěn)定性和毒力穩(wěn)定性
                2.5.1 細(xì)胞水平檢測(cè)
                2.5.2 動(dòng)物水平檢測(cè)
        3 結(jié)果
            3.1 IBV Sczy3在CEK細(xì)胞上的適應(yīng)
            3.2 細(xì)胞上清液對(duì)雞紅細(xì)胞的凝集活性
            3.3 病毒滴度的測(cè)定
            3.4 不同代次IBV Sczy3 CEK細(xì)胞適應(yīng)毒的致弱評(píng)價(jià)
            3.5 遺傳穩(wěn)定性和毒力穩(wěn)定性評(píng)價(jià)結(jié)果
                3.5.1 不同代次細(xì)胞適應(yīng)株NP基因的RT-PCR測(cè)定
                3.5.2 Sczy3C100的毒力返強(qiáng)測(cè)定
        4 討論
            4.1 關(guān)于CEK細(xì)胞的培養(yǎng)
            4.2 關(guān)于IBV Sczy3在CEK細(xì)胞上的適應(yīng)
            4.3 關(guān)于IBV Sczy3的病毒滴度
            4.4 關(guān)于IBV Sczy3的致弱
            4.5 關(guān)于IBV Sczy3的穩(wěn)定性
    試驗(yàn)二 建立熒光定量RT-PCR方法對(duì)IBV SCZY3 CEK細(xì)胞適應(yīng)株的增殖規(guī)律進(jìn)行研究
        1 材料
            1.1 試劑
            1.2 試劑
            1.3 熒光定量PCR引物的設(shè)計(jì)
        2 方法
            2.1 病毒RNA提取與cDNA的合成
            2.2 N基因質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品的制備
            2.3 熒光定量RT-PCR反應(yīng)體系和條件的優(yōu)化
            2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
            2.5 敏感性試驗(yàn)
            2.6 重復(fù)性檢驗(yàn)
            2.7 應(yīng)用熒光定量PCR檢測(cè)研究Sczy3細(xì)胞適應(yīng)株的增殖特點(diǎn)
                2.7.1 比較Sczy3細(xì)胞適應(yīng)株在CEK細(xì)胞內(nèi)不同感染時(shí)間的病毒量
                2.7.2 比較不同代次的Sczy3細(xì)胞適應(yīng)株在不同感染時(shí)間CEK細(xì)胞的病毒核酸拷貝數(shù)
        3 結(jié)果
            3.1 檢測(cè)IBV的熒光定量PCR方法的建立
                3.1.1 質(zhì)粒濃度的測(cè)定
                3.1.2 建立熒光定量RT-PCR的反應(yīng)程序與反應(yīng)體系
                3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
                3.1.4 敏感性試驗(yàn)結(jié)果
                3.1.5 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果
            3.2 IBV Sczy3在CEK上的增殖規(guī)律的研究
        4 討論
    實(shí)驗(yàn)三 SCZY3 C100免疫保護(hù)效力的評(píng)價(jià)
        1 材料
            1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 毒株
            1.3 常用試劑和試劑盒
        2 方法
            2.1 攻毒毒株病毒滴度的測(cè)定
            2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
            2.3 樣品的采集
            2.4 樣品病毒的分離
            2.5 間接ELISA檢測(cè)抗體
        3 結(jié)果
            3.1 攻毒毒株病毒滴度的測(cè)定
            3.2 Sczy3 C 100免疫保護(hù)效力的評(píng)價(jià)
                3.2.1 發(fā)病雞臨診癥狀、發(fā)病率及死亡率
                3.2.2 血清抗體變化及病毒分離結(jié)果
        4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;艾滋病毒株部分流行規(guī)律被發(fā)現(xiàn)[J];健康生活;2008年11期

2 ;我國(guó)艾滋病毒株部分流行規(guī)律被發(fā)現(xiàn)[J];中國(guó)艾滋病性病;2008年05期

3 劉玉梅;趙利平;劉國(guó)英;李超華;高瑛;趙麗霞;陳九連;趙雨嶒;盧永干;;應(yīng)用ELISA方法判定口蹄疫疫苗毒株血清學(xué)相關(guān)關(guān)系[J];廣東畜牧獸醫(yī)科技;2013年03期

4 馮鐵建;趙廣錄;陳琳;王曉輝;石向東;;深圳市HIV-1毒株的流行狀況[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2006年05期

5 孔朝霞 ,李思翹;重組HIV毒株正在全球蔓延[J];中國(guó)艾滋病性病;2003年02期

6 黃振武,夏弈明,金奇,吳紅英;體外快速篩選和鑒別Coxsackievirus B_3有毒株和無毒株方法[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2002年01期

7 邵一鳴,趙峰,楊維中,張遠(yuǎn)志,龔新昌;我國(guó)西南西北地區(qū)吸毒人群重組人類免疫缺陷病毒1型毒株的發(fā)現(xiàn)[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;1999年02期

8 侯梅利;;疫苗毒株可在田間進(jìn)行重組從而形成新的可感染的毒株[J];國(guó)外畜牧學(xué)(豬與禽);2013年11期

9 李勝斌;危艷武;唐青海;吳洪麗;劉建波;郭龍軍;王一平;劉丹;劉長(zhǎng)明;;豬細(xì)小病毒體外培養(yǎng)適應(yīng)毒株的培育及動(dòng)物感染試驗(yàn)[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年11期

10 張瑞;李艷伍;許蘭菊;賈赟;蔣大偉;張秀云;李煒;宋海霞;;阿留申病毒強(qiáng)致病性毒株非結(jié)構(gòu)蛋白基因的克隆及序列分析[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2010年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 尤永君;雞傳染性支氣管炎病毒疫苗候選毒株的篩選及評(píng)價(jià)[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 劉燦;豬繁殖與呼吸綜合征高致病性毒株的致弱評(píng)價(jià)與相關(guān)分子機(jī)制研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

3 韋華冕;德宏HIV-1重組毒株的發(fā)生與傳播及其相關(guān)影響因素研究[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2015年

4 Yassir Fadl Abubakar Hassan;基于系統(tǒng)發(fā)育重建和時(shí)空動(dòng)態(tài)的HIV-1 CRF01_AE毒株的分子流行病學(xué)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 魏曾潔;雞傳染性支氣管炎病毒Sczy3株細(xì)胞適應(yīng)株的培育及其免疫效力的評(píng)價(jià)[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 吳瑞婷;雞傳染性支氣管炎病毒Sczy3株的致弱及其免疫效力的評(píng)價(jià)[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 王富妍;雞傳染性支氣管炎病毒Sczy3株M蛋白單克隆抗體的制備與鑒定[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

4 趙芳芳;禽傳染性支氣管炎病毒Sczy3株全基因組序列測(cè)定分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 黃志永;雞傳染性法氏囊病毒廣西流行代表毒株免疫原性的研究[D];廣西大學(xué);2008年

6 李連峰;PRRS典型毒株接種巴馬小型豬的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2013年

7 楊洺揚(yáng);豬繁殖與呼吸綜合征病毒不同毒株RT-PCR鑒別檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 劉明陽;PRRSV毒株的分離鑒定及單克隆抗體的制備[D];鄭州大學(xué);2013年

9 程春林;我國(guó)南方四省HIV-1 CRF01_AE流行毒株基因特征研究[D];蘇州大學(xué);2009年

10 孫敏華;中國(guó)部分地區(qū)2001-2007年新城疫病毒分子流行病學(xué)及代表毒株致病性研究[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

本文編號(hào)：2861594