發(fā)布時(shí)間：2020-10-29 21:04

　　 為滿足人們對(duì)健康優(yōu)質(zhì)羊肉的需求,本試驗(yàn)旨在研究不同能量水平對(duì)阿勒泰羔羊血清脂質(zhì)指標(biāo)、脂肪沉積分布、脂肪細(xì)胞大小、脂肪代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá),進(jìn)一步利用iTRAQ蛋白組學(xué)技術(shù)篩選與脂肪代謝相關(guān)的蛋白及其通路,為脂肪代謝的調(diào)控提供數(shù)據(jù)參考。選取月齡相近(3~3.5月齡)、體重接近(19.16±0.54)kg、臀型一致、健康狀況良好的阿勒泰母羔30只,隨機(jī)分為3組,每組10只羊,自由采食60 d后,分別按照50%(0.25 MJ/W~(0.75)×~(d-1))(50%代謝能組)、100%(0.5 MJ/W~(0.75)×d~(-1))(100%代謝能組)和150%(0.75 MJ/W~(0.75)×d~(-1))(150%代謝能組)的維持代謝能飼喂30 d。結(jié)果表明:(1)能量水平對(duì)阿勒泰羊的血清脂質(zhì)指標(biāo)具有顯著影響。在不同能量水平條件下,50%代謝能組的血清葡萄糖、游離脂肪酸、低密度脂蛋白含量顯著降低(P0.05),血清高密度脂蛋白含量顯著升高(P0.05)。(2)能量水平對(duì)阿勒泰羊各部位的脂肪沉積和脂肪細(xì)胞大小具有顯著影響。50%代謝能組的尾部脂肪、胃腸周圍脂肪、大網(wǎng)膜脂肪和總脂肪與胴體重的比值顯著低于100%代謝能組和150%代謝能組(P0.05)。心臟周圍脂肪和皮下脂肪與胴體重的比值在三組之間差異不顯著(P0.05)。150%代謝能組的脂肪細(xì)胞的直徑、周長(zhǎng)、面積顯著大于100%代謝能組和50%代謝能組(P0.05),脂肪細(xì)胞個(gè)數(shù)顯著低于其他兩組(P0.05)。(3)不同能量水平對(duì)阿勒泰羊各部位脂肪代謝相關(guān)基因PPARγ、ACC、LPL和LEPR mRNA表達(dá)具有顯著影響。在尾部脂肪、皮下脂肪和大網(wǎng)膜脂肪中,50%代謝能組的PPARγ、ACC和LPL基因mRNA表達(dá)顯著低于150%代謝能組(P0.05);50%代謝能組的LEPR基因mRNA表達(dá)在尾部脂肪、皮下脂肪和大網(wǎng)膜脂肪中顯著高于150%代謝能組(P0.05)。PPARγ、ACC和LPL有部位特異性,各基因在背最長(zhǎng)肌中的表達(dá)顯著低于在脂肪組織中的表達(dá)(P0.05)。(4)通過(guò)iTRAQ蛋白組學(xué)分析篩選出1866個(gè)差異蛋白,其中,在GO注釋結(jié)果中,205個(gè)蛋白與氧化還原過(guò)程有關(guān),130個(gè)蛋白與代謝過(guò)程有關(guān),在KEGG注釋結(jié)果中,151個(gè)蛋白與脂肪代謝有關(guān),104個(gè)蛋白與能量代謝有關(guān)。在差異蛋白分析中,50%代謝能組與150%代謝能組相比有380個(gè)差異蛋白。隨后,通過(guò)GO和KEGG的富集分析,挑選出與脂肪代謝相關(guān)的部分差異蛋白進(jìn)行互作分析,發(fā)現(xiàn)EHHADH、ACOX3和ACAA1參與了PPAR信號(hào)、脂肪酸代謝、過(guò)氧化物酶體三個(gè)通路,而SCP2參與PPAR信號(hào)和過(guò)氧化物酶體通路,ECI2參與脂肪酸代謝和過(guò)氧化物酶體通路。在脂肪酸代謝通路中,與其他蛋白互作較多的是HADHA、HADH、ACAA2、HADHB和ACADS蛋白,在過(guò)氧化物酶體通路中,HSD17β4、HACL1蛋白互作較多,在PPAR信號(hào)通路中,互作較多得是SCP2。本試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明能量水平對(duì)阿勒泰羔羊的血清脂質(zhì)指標(biāo)、各部位脂肪沉積、脂肪代謝相關(guān)基因在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白通路上具有顯著影響,為研究能量水平調(diào)控脂肪沉積提供了數(shù)據(jù)支持,并為阿勒泰羔羊脂肪代謝相關(guān)基因的生物學(xué)功能研究和遺傳進(jìn)化研究提供分子依據(jù)。
【學(xué)位單位】：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2020
【中圖分類】：S826
【部分圖文】：

試驗(yàn)技術(shù)路線

能量水平對(duì)阿勒泰羔羊脂肪代謝的影響17謝能組比差異不顯著（P>0.05）。如圖2-1所示，150%代謝能組的脂肪細(xì)胞大而飽滿，呈蜂窩狀，50%代謝能組的細(xì)胞個(gè)數(shù)最多，但其直徑最小，形狀扁平，充盈程度低，可直觀的看出50%代謝能組的細(xì)胞面積小于150%代謝能組。表2-6能量水平對(duì)阿勒泰羊脂肪細(xì)胞的影響Table2-6EffectofenergylevelsonfatcellofAltaysheep項(xiàng)目組別GroupsSEMP值Items50%代謝能組100%代謝能組150%代謝能組P-value細(xì)胞數(shù)Cellnumble（個(gè)）315.15a282.41b225.70c5.170<0.001直徑Diameter(μm)35.70b36.99b48.13a0.783<0.001周長(zhǎng)Circumference(μm)134.73b145.31b180.76a3.387<0.001面積Area(μm2)1013.72b1081.95b1810.31a51.941<0.001A.50%代謝能組；B.100%代謝能組；C.150%代謝能組A.50%metabolicenergygroup;B.100%metabolicenergygroup;C.150%metabolicenergygroup圖2-1能量水平對(duì)阿勒泰羊脂肪細(xì)胞形態(tài)的影響（HE,40×）Fig.2-1EffectofenergylevelsonfatcellofAltaysheep(HE,40×)3討論3.1能量水平對(duì)阿勒泰羊血清脂肪代謝相關(guān)生化指標(biāo)的影響血液生化指標(biāo)是評(píng)價(jià)動(dòng)物健康狀況和代謝水平的重要標(biāo)準(zhǔn)[96]。血清指標(biāo)與動(dòng)物品種、年齡、營(yíng)養(yǎng)水平、生存環(huán)境等密切有關(guān)[14,97-101]。在血清中TP濃度與蛋白質(zhì)代謝有關(guān)，它影響著血清蛋白合成、轉(zhuǎn)運(yùn)和蛋白質(zhì)分解代謝[96]。在本試驗(yàn)中，試驗(yàn)至10d時(shí)，高能飼喂可以使阿勒泰羊血清TP濃度明顯降低，隨后再經(jīng)過(guò)20d和30d的高能飼喂，發(fā)現(xiàn)血清TP的濃度逐步恢復(fù)到0d時(shí)的濃度，這可能是隨著飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)，動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)水平變化自身產(chǎn)生調(diào)節(jié)的緣故。血清GLU在動(dòng)物代謝中起著關(guān)鍵作用，它維持著神經(jīng)系統(tǒng)、紅細(xì)胞、胎盤、乳腺和卵巢的生理活動(dòng)，也是生物合成細(xì)胞成分的前提物質(zhì)[102,103]。在反芻?

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2020屆碩士學(xué)位論文341.5.4GO富集分析首先，把所有差異蛋白質(zhì)向GeneOntology數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.geneontology.org/）的各個(gè)term映射，隨后計(jì)算每個(gè)term的蛋白質(zhì)數(shù)目，然后應(yīng)用超幾何檢驗(yàn)，最后找出與所有蛋白質(zhì)背景相比，在差異蛋白質(zhì)中顯著富集的GO條目。1.5.5KEGG富集分析KEGGPathway顯著性富集分析方法是以KEGGPathway為單位，應(yīng)用超幾何檢驗(yàn)，通過(guò)與所有鑒定到的蛋白背景相比較，找出在差異蛋白中顯著性富集的Pathway，最后通過(guò)Pathway顯著性富集能確定差異蛋白參與的生化代謝途徑和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。1.5.6差異蛋白互作分析利用StringDB蛋白質(zhì)互作數(shù)據(jù)庫(kù)(http://string-db.org/)進(jìn)行鑒定，提取相應(yīng)物種的序列(或提取近源物種的序列)，然后將差異蛋白的序列與提取出的序列進(jìn)行blast比對(duì)，得出相應(yīng)的互作信息，最后利用Cytoscape軟件進(jìn)行可視化編輯并構(gòu)建網(wǎng)絡(luò)圖。2結(jié)果2.1電泳結(jié)果總蛋白樣本，分子量從大到小均由分布，在50KDa附近豐度較高，未降解蛋白，條帶清晰可見，提取的蛋白樣品合格，蛋白電泳圖見圖4-1。圖4-1蛋白質(zhì)檢結(jié)果Fig.4-1ProteinqualitytestresultsNLNMNR
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本文編號(hào)：2861448