芒果(.Mangifera indica L.)是一種著名的熱帶水果,被譽(yù)為熱帶水果之王。中國是芒果主產(chǎn)國之一,芒果主要分布在海南、廣東、廣西、云南、四川、福建和臺灣。芒果蒂腐病是芒果采后最為嚴(yán)重的病害之一,主要危害芒果果實,發(fā)病部位最初在果蒂周圍先出現(xiàn)褐色斑點,然后病斑迅速擴(kuò)展,最后整個芒果出現(xiàn)褐變并發(fā)出酸臭味,導(dǎo)致芒果在貯藏、運(yùn)輸期間腐爛并造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 目前,芒果蒂腐病的研究遠(yuǎn)遠(yuǎn)滯后于芒果炭疽病!這與芒果蒂腐在芒果采后保鮮中的重要影響所不符,而缺乏重視與缺少研究技術(shù)也導(dǎo)致了芒果蒂腐病害危害加劇及病原菌抗藥性的產(chǎn)生。因此,本研究從2013至2014年期間,對海南三亞、樂東、東方和昌江等海南芒果主產(chǎn)區(qū)的芒果蒂腐病菌進(jìn)行采集分離,重點在于對芒果蒂腐菌可可球二孢(Botryodiplodia theobromae Pat.)的毒性分化、抗藥性差異及遺傳多樣性分析,通過形態(tài)學(xué)和藥劑學(xué)以及分子生物學(xué)方法尋找可可球二孢病菌毒性分化、抗藥性及遺傳分化之間的關(guān)系,以期更深入地了解病菌自然群體的遺傳多樣性和遺傳分化情況；另外,為評價目前海南主要芒果品種對于蒂腐病菌株入侵、定植的風(fēng)險,為芒果蒂腐菌的流行動態(tài)預(yù)測提供依據(jù),也為芒果大田病害防治及采后的防腐保鮮選擇高效的殺菌劑提供了依據(jù)。主要研究結(jié)果如下： 1.從海南省不同地區(qū)不同芒果品種的自然發(fā)病的病果中分離并鑒定出大量的芒果蒂腐菌可可球二孢、擬莖點、炭疽等病菌共132株,其中,可可球二孢B. theobromae菌株124株,占93.9%。研究表明,芒果蒂腐可由多種病菌侵染所致,但海南芒果蒂腐病主要由可可球二孢B. theobromae引起。 2.根據(jù)對124株可可球二孢B. theobromae菌株的致病力測定結(jié)果,選出5個致病力較高的菌株：SYTN31605、SYTN21610、LDJH21611、LDJH21608、LDYM11601,針對海南常見的11個芒果品種進(jìn)行抗病性測定。結(jié)果表明：除‘白象牙’1個品種為高感(HS)外,其余10個品種均表現(xiàn)為感病(S),本次測定并未發(fā)現(xiàn)對供試5個菌株均表現(xiàn)出抗性的品種 3.生物學(xué)特性測定結(jié)果發(fā)現(xiàn)：30個芒果蒂腐可可球二孢B. theobromae菌株生長的最適培養(yǎng)基為PDA,其次是高氏培養(yǎng)基,麥芽汁培養(yǎng)基不利于菌絲生長,最佳培養(yǎng)條件是12h光照,12h黑暗的培養(yǎng)方式,最適pH為6-8,孢子萌發(fā)最適溫度是30℃,4h,菌絲生長的最適宜溫度是30℃,菌絲的致死溫度是65℃,10min。 4.13種殺菌劑對62個可可球二孢B. theobromae菌株進(jìn)行室內(nèi)毒力測定,以10m/L為鑒別劑量進(jìn)行抗藥性初步檢測,供試菌株對多種殺菌劑表現(xiàn)出抗藥性,對多菌靈和甲基托布津的抗性頻率分別為87.1%和83.9%,對嘧菌酯和醚菌酯的抗性頻率分別為79.0%和87.1%,對吡唑醚菌酯、苯醚甲環(huán)唑、戊唑醇、丙環(huán)唑、咪鮮胺、異菌脲、咯菌腈、百菌清、代森錳鋅的抗性頻率分別為82.3%、83.9%、87.1%、83.9%、54.8%、19.4%、56.5、1.6%、0、83.9%、87.1%,對從中篩選出表現(xiàn)出較高抗性的6種殺菌劑針對15株可可球二孢菌株進(jìn)行精密毒力測定。研究表明：用于防治芒果蒂腐可可球二孢菌株的最佳藥劑是咯菌腈,其次是異菌脲,6種藥劑中藥性效果最差的是多菌靈,EC50值范圍大小為3.23-33113.11mg/L,平均抗性水平2479.16,多菌靈與甲基硫菌靈存在明顯的交叉抗性,表明海南大多數(shù)地區(qū)的芒果蒂腐病菌可可球二孢已對苯并咪唑類殺菌劑和甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑產(chǎn)生極大的抗性。 5.利用分子標(biāo)記RAPD方法對30個芒果蒂腐可可球二孢B. theobromae病菌遺傳多樣性分析,針對30個菌株,從21條引物中篩選出6條隨機(jī)引物,根據(jù)6條引物擴(kuò)增的結(jié)果,一共擴(kuò)增出64條譜帶,集中在250-2500bp,多態(tài)性條帶58條,DNA多態(tài)率高達(dá)90.6%,遺傳相似性系數(shù)在0.58-0.86之間,表明這30個芒果蒂腐病菌遺傳分化大,群體之間的結(jié)構(gòu)多樣性豐富,在相似系數(shù)為0.594時,所有菌株可聚合為2大類,群I有26個菌株,占全部菌株的86.7%,群II有4個菌株,聚合類型與菌株的地理來源不一致,抗藥性結(jié)果結(jié)合RAPD結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),抗藥性強(qiáng)的菌株一般與其他抗藥性低的菌株親緣關(guān)系較遠(yuǎn),推測這可能是遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)的改變才導(dǎo)致了抗藥性的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：海南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：S436.67
【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 芒果蒂腐病菌的國內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.1.1 芒果采后病害的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 芒果蒂腐病原菌的發(fā)現(xiàn)與研究
        1.1.3 芒果蒂腐病的潛伏侵染和致病機(jī)理研究
    1.2 芒果蒂腐病的防治研究進(jìn)展
        (1) 物理防治
        (2) 生物防治
        (3) 化學(xué)防治
    1.3 植物病原真菌抗藥性研究進(jìn)展
    1.4 分子標(biāo)記分析
    1.5 本研究的目的和意義及研究技術(shù)路線
2 材料方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 供試菌株
        2.1.2 接種材料
        2.1.3 實驗用具
        2.1.4 供試儀器和供試試劑
        2.1.5 供試藥劑
        2.1.6 供試培養(yǎng)基
    2.2 實驗方法
        2.2.1 病原菌分離純化和鑒定
        2.2.2 致病力測定
        2.2.3 芒果品種的抗病性測定
        2.2.4 生物學(xué)特性測定
        2.2.5 可可球二孢菌株對殺菌劑敏感性測定
            (1) 芒果可可球二孢菌株對藥劑抗性的初步檢測
            (2) 防治芒果蒂腐菌藥劑的精密毒力測定
        2.2.6 RAPD遺傳多樣性分析
        2.2.7 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與討論
    3.1 芒果蒂腐病的鑒定與致病力分析
        3.1.1 芒果蒂腐病及其病原鑒定
        3.1.2 124株病原菌的室內(nèi)致病性測定結(jié)果
    3.2 芒果品種抗病性檢測
    3.3 生物學(xué)特性
        (1) 常溫下菌株產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)率
        (2) 溫度對菌株生長的影響
        (3) PH對菌株生長的影響
        (4) 光照對菌株生長的影響
        (5) 培養(yǎng)基對菌株生長的影響
        (6) 菌絲致死溫度和時間
    3.4 可可球二孢對殺菌劑的敏感性及抗藥性水平測定
        (1) 防治芒果蒂腐菌藥劑的敏感性初步檢測
        (2) 芒果可可球二孢對不同殺菌劑的抗藥性水平
        (3) 交互抗性分析
    3.5 基因組DNA多態(tài)性
    3.6 遺傳多樣性分析
        (1) RAPD聚類結(jié)果分析
        (2) 致病力分化結(jié)合遺傳多樣性分析
        (3) 抗藥性結(jié)果結(jié)合RAPD聚類圖和遺傳距離分析
        (4) 生物學(xué)特性結(jié)合遺傳多樣性分析
4 結(jié)論與討論
    4.1 主要研究結(jié)論
        4.1.1 芒果蒂腐病菌的分離與致病性測定
        4.1.2 11個主要芒果品種的抗病性評價
        4.1.3 芒果蒂腐病菌的生物學(xué)特性
        4.1.4 芒果蒂腐病菌對化學(xué)殺菌劑的抗藥性
        4.1.5 芒果蒂腐菌的遺傳多樣性分析
    4.2 創(chuàng)新點
    4.3 討論
        4.3.1 芒果蒂腐病的優(yōu)勢病原
        4.3.2 芒果品種的抗病性
        4.3.3 生物學(xué)特性
        4.3.4 抗藥性
        4.3.5 遺傳多樣性分析
5. 后續(xù)研究工作
參考文獻(xiàn)
致謝

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