【摘要】：植物內(nèi)生真菌是一類具有重要價(jià)值的資源微生物,在促進(jìn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展和醫(yī)藥領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景。試驗(yàn)采用組織塊分離法分離山葵根、葉柄以及葉片中的內(nèi)生真菌,經(jīng)嚴(yán)格的表面消毒程序,共獲得29株內(nèi)生真菌。以形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合分子生物學(xué)方法進(jìn)行分類鑒定,并分析了不同部位內(nèi)生真菌的多樣性以及種群分布規(guī)律。通過平板對(duì)峙和抑制菌絲生長(zhǎng)試驗(yàn)篩選對(duì)山葵墨入病菌抑制率高的菌株,測(cè)定高活性菌株的生物學(xué)特性。在溫室和田間小區(qū)內(nèi),通過噴霧處理進(jìn)一步測(cè)定高活性菌株對(duì)墨入病的防治效果。主要結(jié)果如下：1、比較山葵葉、葉柄及根的表面消毒條件,我們得出,山葵的根用75%的酒精消毒30s,3.5%的NaC10消毒5min、山葵的葉和葉柄用75%的酒精消毒30s,3.5%的NaClO消毒3min后,表面消毒效果最好,可獲得內(nèi)生真菌較好的分離效果。2、通過顯微形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)方法,將山葵內(nèi)生真菌初步鑒定為6目、8科、8屬。從葉片中分離出內(nèi)生真菌13株,其中包括7個(gè)種屬,分別為Colletotrichum sp., Chaetomium sp., Fusarium sp., Arthrinium sp., Penicillium sp., Alternaria sp., Mucor sp.。從葉柄中分離出內(nèi)生真菌5株,其中包括3個(gè)種屬,分別為Fusarium sp., Penicillium sp., Alternaria sp. 。從根中分離到內(nèi)生真菌11株,其中包括6個(gè)屬,分別為Colletotrichum sp., Chaetomium sp., Fusarium sp., Penicillium sp., Alternaria sp., Xylaria sp.。采用4℃C斜面保存以及-20℃C甘油保存純培養(yǎng)物。3、利用平板對(duì)峙培養(yǎng),將所有分離物與山葵墨入病菌(Phoma wasabiae Yokogi)菌株進(jìn)行拮抗性測(cè)定,結(jié)果得到對(duì)山葵墨入菌具有抑制作用的內(nèi)生真菌10株。其中,菌株SK26的抑菌半徑最大,為2.82cm。采用抑制菌絲生長(zhǎng)法對(duì)初篩的10株拮抗內(nèi)生菌進(jìn)行復(fù)篩,結(jié)果測(cè)得菌株SK26發(fā)酵原液對(duì)山葵墨入病菌菌絲生長(zhǎng)具有較強(qiáng)的抑制作用,抑制率達(dá)77.39%。結(jié)合培養(yǎng)形態(tài)特征和分子生物學(xué)分析,將菌株SK26初步鑒定為子囊菌亞門、核菌綱、球殼菌目、黑孢殼科中的球毛殼(chaetomium globosum)真菌。SK26發(fā)酵原液對(duì)熱處理和紫外照射處理具有很好的穩(wěn)定性,不耐酸堿,僅在中性偏酸環(huán)境下較為穩(wěn)定。溫室生防試驗(yàn)結(jié)果表明：SK26拮抗內(nèi)生真菌的孢懸液對(duì)山葵墨入病的防治效果較好,防效為66.18%,SK26的發(fā)酵液對(duì)山葵墨入病的防治效果較差,僅為21.56%。田間小區(qū)試驗(yàn)初步表明：田間施藥三次后SK26孢懸液對(duì)山葵墨入病的防效為57.21%,發(fā)酵液處理的防效29.87%。內(nèi)生真菌SK26不管是孢懸液還是發(fā)酵液在施藥后病情指數(shù)都有所上升,但較對(duì)照上升得不顯著,對(duì)墨入病的防治起到一定控制性的效果。4、SK26菌株的基礎(chǔ)生物學(xué)特性研究表明,最適菌絲生長(zhǎng)溫度為25℃,最適產(chǎn)孢溫度為30℃C；最適菌絲生長(zhǎng)pH為7,最適產(chǎn)孢PH為8；全光照條件利于菌絲生長(zhǎng),光暗交替條件利于菌株產(chǎn)孢；最適菌絲生長(zhǎng)的碳源為蔗糖,最適產(chǎn)孢碳源為乳糖；SK26在有機(jī)氮源牛肉膏中菌絲生長(zhǎng)最佳,在無機(jī)氮源硝酸鉀中產(chǎn)孢最多。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S476.1;S435.672

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本文編號(hào)：2772380