【摘要】：GATA家族是能與靶基因核酸的共同序列(A/T)GATA(A,G)相結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子,其核心成員GATA-4和GATA-6主要表達(dá)于動(dòng)物卵巢顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞中,GATA-4和GATA-6被證實(shí)在人、小鼠以及豬的卵巢中均共同參與調(diào)控類固醇激素的合成過程。目前對(duì)GATA-4調(diào)控卵巢顆粒細(xì)胞類固醇激素合成的機(jī)理已經(jīng)進(jìn)行了大量的研究,但GATA-6在鵝以及其他物種卵巢中的功能研究卻還沒有報(bào)道。因此,本研究以天府肉鵝母系為實(shí)驗(yàn)材料,首先構(gòu)建鵝GATA-6干擾載體和過表達(dá)載體；其次通過干擾和過表達(dá)GATA-6基因,分析其對(duì)顆粒細(xì)胞類固醇合成及相關(guān)基因的調(diào)控作用；最后通過共轉(zhuǎn)染GATA-4和GATA-6過表達(dá)載體,探討兩者在顆粒細(xì)胞中的作用差異及可能的相互作用關(guān)系。主要研究結(jié)果如下：(1)通過RT-PCR、克隆測(cè)序以及序列拼接獲得天府肉鵝GATA-6基因完整編碼區(qū)序列1173bp,預(yù)測(cè)其共編碼390個(gè)氨基酸,序列提交至NCBI數(shù)據(jù)庫,其登陸號(hào)為：KP723851。(2)CCK結(jié)果表明：過表達(dá)GATA-6基因后,鵝卵巢顆粒細(xì)胞增殖率上升；而干擾GATA-6基因表達(dá)后,顆粒細(xì)胞增殖率下降；由此表明GATA-6能夠正向調(diào)控顆粒細(xì)胞增殖。(3)與空白組及空載組相比,干擾GATA-6基因表達(dá)后,膽固醇和孕酮的分泌量顯著增加(p0.05),而其下游靶基因3β-HSD.cyp17、P450scc.17β-HsD表達(dá)量顯著降低(p0.05),Cyp19、StAR顯著上升(p0.05),而FSHR無明顯變化(p0.05)。故表明3β-HSD、Cyp19、Cyp17、P450scc、17β-HSD、stAR是GATA-6在卵泡發(fā)育過程中參與調(diào)控轉(zhuǎn)錄的下游靶基因,并通過調(diào)控相關(guān)靶基因轉(zhuǎn)錄間接調(diào)節(jié)類固醇激素的合成。(4)與空白組及空載組相比,過表達(dá)GATA-6基因后,孕酮分泌量增加(p0.05),膽固醇分泌量降低(p0.05),睪酮分泌量極顯著減少(p0.01)；而其下游靶基因3β-HSD和Cyp19以及FSHR的表達(dá)量極顯著下降(p0.01),17β-HSD顯著下降(p0.05), Cyp17和StAR的表達(dá)量極顯著上升(p0.01), P450scc的表達(dá)量雖然呈上升趨勢(shì)但是差異不顯著(p0.05)。此外,GATA-4基因表達(dá)量無顯著性的變化,所有空白組和對(duì)照組之間沒有顯著的變化(p0.05)。比較干擾和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,表明GATA-6對(duì)于調(diào)控下游靶基因存在差異性的調(diào)控模式；而轉(zhuǎn)錄因子GATA-6對(duì)轉(zhuǎn)錄因子GATA-4的表達(dá)量的影響沒有差異性的影響。(5)與空白組以及對(duì)照組相比,共轉(zhuǎn)染GATA-4和GATA-6真核表達(dá)載體后,膽固醇的分泌量顯著增加(p0.05),孕酮分泌量增加但差異不明顯(p0.05),睪酮分泌量顯著減少(p0.05)。而下游靶基因3β-HSD、Cyp19以及FSHR的表達(dá)量顯著升高(p0.05),17β-HSD雖然表達(dá)量上升但差異不顯著(p0.05), Cyp17和P450scc表達(dá)量極顯著降低(p0,01), StAR表達(dá)量顯著降低(p0.05)；所有空白組和對(duì)照組沒有發(fā)生顯著的變化(p0.05)。故表明GATA-4和GATA-6在卵泡中類固醇合成相關(guān)靶基因的調(diào)控作用既存在拮抗作用又存在補(bǔ)償代謝機(jī)制。
【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：S835

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1 岳文慧;張宇麗;于鐵莉;陸鴻略;梁媛;張淑君;;喉咽癌組織中GATA-6的表達(dá)及意義[J];山東醫(yī)藥;2014年22期

2 余莉;劉瀚e

本文編號(hào)：2744742